Detection of T lymphocytes in intestine of broiler chicks treated with Lactobacillus spp. and challenged with Salmonella enterica serovar Enteritidis.

The expression of immune response in the form of leukocytic infiltrate by CD3+, CD4+, and CD8+ cells in the epithelium and in the intestinal lamina propria of chicks was studied in the present work by means of immunohistochemical reaction. The chicks were treated with Lactobacillus spp. or cecal microflora (CM) and experimentally challenged or not with Salmonella enterica serovar Enteritidis. The 320 birds utilized were divided into 4 groups containing 80 chicks each and submitted to treatments with Lactobacillus reuteri, Lactobacillus salivarius, Lactobacillus acidophilus, and CM. Each group was subdivided into 4 subgroups of 20 birds each and classified into a subgroup that did not receive treatment (negative control), subgroup treated, subgroup treated and challenged with Salmonella Enteritidis, and subgroup only challenged with Salmonella Enteritidis (positive control). The results obtained show that the treatment with L. reuteri, L. salivarius, L. acidophilus, or CM and challenged or not with Salmonella Enteritidis determine immune response in the form of leukocytic infiltrate by CD3+ and CD8+ lymphocytes followed by CD4+ in the epithelium and in the lamina propria of the duodenum, jejunum, and cecum of chicks up to 12 d of age. The quantity of CD3+ lymphocytes was significantly higher (P < 0.05) in the intestine of chicks treated with L. acidophilus or CM and challenged or not with Salmonella Enteritidis; however, the higher quantity of CD8+ lymphocytes was in the intestine of chicks treated with CM and challenged with Salmonella Enteritidis. The duodenum was the segment in which the immune response by T cells (CD3+, CD4+, and CD8+) was stimulated with the greatest intensity, followed by, respectively, the jejunum and cecum. The quantity of CD3+ lymphocytes present in the duodenum, jejunum, and cecum increases with the age of chicks, independent of the stimulus determined by treatments or challenge.

Avaliação in vitro da atividade inibitória de Lactobacillus spp., isolados do inglúvio e cecos de aves sobre Salmonella / In vitro evaluation of the inhibitory activity of Lactobacillus spp. isolated from crop and ceca of chickens against Salmonella serotypes

Inglúvios e cecos de reprodutoras comerciais de frangos de corte foram utilizados para o isolamento de Lactobacillus spp. As estirpes isoladas foram caracterizadas como Gram-positivo, catalase negativo, produtoras de gás em glicose, não produtoras de H2S em triple sugar iron e identificadas pela reação em cadeia da polimerase como Lactobacillus reuteri e Lactobacillus salivarius. A utilização da técnica spot-on-the-lawn para avaliação da inibição in vitro permitiu a análise de vários microrganismos simultaneamente. Todas as estirpes isoladas inibiram in vitro S. Enteritidis fagotipo 4, S. Enteritidis fagotipo 28, S. Typhimurium, S. Pullorum, S. Agona, S. Anatum, S. Dublin e S. Senftenberg.

Crops and ceca of commercial broiler breeders were used for the isolation of Lactobacillus spp. The isolated samples were characterized by Gram positive staining, negative catalase test, production of gas from glucose, negative for H2S production from triple sugar iron, and were identified by the polymerase chain reaction as Lactobacillus reuteri and Lactobacillus salivarius. The use of the spot-on-the-lawn technique, with modifications, for the evaluation of the in vitro inhibition made it possible the simultaneous analysis of several microrganisms. All the crop and ceca isolated microorganisms presented an in vitro inhibitory effect against strains of Salmonella Enteritidis fagotype 4, S. Enteritidis fagotype 28, S. Typhimurium, S. Pullorum, S. Agona, S. Anatum, S. Dublin, and S. Senftenberg.

Comparação entre método bioquímico e reação em cadeia de polimerase para identificação de Lactobacillus spp., isolados de aves / Comparison between biochemical and polymerase chain reaction methods for the identification of Lactobacillus spp. isolated from chickens

Lactobacilos foram isolados do inglúvio e cecos de reprodutoras pesadas e caracterizados como Gram-positivo, catalase negativo, produtores de gás em glicose e não produtores de H2S em triple sugar iron e pela fermentação de carboidratos. Utilizaram-se os iniciadores: Lac 1/23-10C para detecção de Lactobacillus acidophilus, L. crispatus, L. amylovorus, L. gasseri, L. helveticus e L. jensenii; Lac 2/LU-1' para L. acidophilus; Fer 3/Fer 4 para L. fermentum; Reu 1/Reu 2 para L. reuteri e Sal 1 e Sal 2 para L. salivarius. L. reuteri e L. salivarius foram identificados pela reação em cadeia de polimerase (PCR) e pelo teste bioquímico, enquanto L. acidophilus, L. fermentum e Lactobacillus sp. somente pelo teste bioquímico. Os resultados obtidos na PCR foram mais precisos quando comparados aos obtidos com o método bioquímico, que demonstrou ser subjetivo devido às variações na fermentação de carboidratos, principalmente na diferenciação entre L. fermentum e L. reuteri.

Lactobacilli were isolated from crops and ceca of broiler breeders and characterized by positive Gram staining, negative catalase test, production of gas from glucose, and negative for H2S production from triple sugar iron, and carbohydrates fermentation. Primers: Lac1/23-10C for detecting Lactobacillus acidophilus, L. crispatus, L. amylovorus, L. gasseri, L. helveticus, and L. jensenii; Lac2/LU-1' for L. acidophilus; Fer3/Fer4 for L. fermentum; Reu1/Reu2 for L. reuteri, and Sal1/Sal2 for L. salivarius were used. L. reuteri and L. salivarius were identified by both polymerase chain reaction (PCR) and biochemical tests. However, L. acidophilus, L. fermentum, and Lactobacillus sp. were only identified by biochemical tests. PCR results were more precise, considering the variability of carbohydrate fermentation among the strains, especially for identifying L. fermentum and L. reuteri.

Uso de microbiota cecal congelada com crioprotetores em pintos infectados experimentalmente com Salmonella enterica sorovar Enteritidis / Use of frozen cecal microbiota with cryoprotectors in chicks experimentally infected with Salmonella enterica serotype Enteritidis

Pintos de corte com um dia de idade foram tratados com microbiota cecal cultivada em condição de aerobiose, nos tempos de congelamento de 90, 200, 290 e 360 dias, e associada aos crioprotetores sacarose, trealose, dimetilsulfóxido (DMSO) e glicerol. Posteriormente as aves foram desafiadas com Salmonella Enteritidis, visando determinar a eficácia dos tratamentos em relação à quantidade de bactérias viáveis da microbiota que foi maior aos 90 dias (10,58 Log10 UFC/ml), quando as aves foram tratadas com sacarose, e menor aos 290 dias, quando tratadas com glicerol (7,73 Log10 UFC/ml). No tempo zero, todas as aves apresentaram Salmonella (100 por cento) quando tratadas com DMSO e glicerol, com colonização cecal de 4,9 e 5,2 Log10 UFC/g do conteúdo cecal, respectivamente; aos 360 dias nenhuma ave foi infectada, independente do tratamento. A microbiota cecal, independente de tratamento, sempre determinou menor quantidade de S. Enteritidis em qualquer um dos parâmetros pesquisados, quando comparada com a das aves não tratadas. O congelamento em nitrogênio líquido foi eficaz na manutenção da viabilidade da microbiota cecal até 360 dias.

One-day-old broiler chicks were treated with cecal microbiota cultivated under aerobiose conditions, frozen during 90, 200, 290 and 360 days and associated with different cryoprotectors such as sucrose, trehalose, DMSO and glycerol. Subsequently, the birds were challenged with Salmonella Enteritidis in order to determine the efficacy of the different treatments in relation to the quantity of viable bacteria, which was higher at 90 days when treated with sucrose (10.58 log10 CFU/ml) and lower at 290 days when treated with glycerol (7.73 log10 CFU/ml). The quantity of infected birds was 100 percent in 0 time, when the cecal colonization by S. Enteritidis was 4.9 and 5.2 log10 CFU/g of cecal content, respectively treated with DMSO and glycerol. No bird was infected at 360 days, irrespectively of the treatment. In all treatments, the cecal microbiota always determined a lesser quantity of S. Enteritidis for all the studied parameters compared to non-treated birds. Frozen in liquid nitrogen was effective in maintaining the viability of cecal microbiota during the experimental period of 360 days.

Efeito da microbiota cecal e do Lactobacillus salivarius inoculados in ovo em aves desafiadas com Salmonella enterica sorovar Enteritidis / Effect of cecal microflora and Lactobacillus salivarius in ovo administration used on chicken previously challenged with Salmonella enterica serovar Enteritidis

Ovos embrionados provenientes de matrizes pesadas foram inoculados na câmara de ar com microbiota cecal total, microbiota cecal diluída e cultura de Lactobacillus salivarius, no 18° dia de incubação. Dois dias após o nascimento, as aves foram desafiadas com Salmonella enterica sorovar Enteritidis (SE) e, cinco dias após o desafio, avaliou-se a presença da bactéria no fígado e ceco. O efeito de exclusão competitiva, após o desafio com SE, somente foi observado pela ausência da bactéria no fígado das aves tratadas in ovo com L. salivarius. A inoculação in ovo de microbiota cecal indefinida ou diluída não reduziu a colonização de SE no fígado e no ceco das aves, incluindo, neste último, também o tratamento com L. salivarius. Nenhum dos tratamentos in ovo determinou índice de eclodibilidade superior a 65 por cento.

Commercial 18-day-old incubating chicken embryos were inoculated with total or diluted cecal microbiota and Lactobacillus salivarius cultures directly into the inner air sac. Two days after hatching, the chicks were challenged with Salmonella enterica serovar Enteritidis (SE), and five days later the presence of bacteria in cecum and liver was evaluated. The competitive exclusion effect was determined by the search for SE in the liver of chicks treated in ovo with L. salivarius and challenged with SE. The in ovo inoculation of total or diluted cecal microbiota, in addition to the L. salivarius treatment did not significantly decrease the colonization of SE in liver and cecum. All treatments resulted in hatchability of 65 percent or less.

Recuperaçäo de Brucella abortus do leite in natura procedente de vacas soropositivas dos municípios de Pedra e Venturosa - PE: aspectos de saúde pública / Recovery of Brucella abortus of the raw milk from animals having seropositive Pedra e Venturosa counties - PE

Com o objetivo de recuperar Brucella abortus do leite, utilizaram-se 14 amostras de leite in natura de fêmeas bovinas soropositivas para brucelose procedentes de sete propriedades rurais situadas nos municípios de Pedra e Venturosa - PE. As amostras de leite foram centrifugadas a 1431,04 g por trinta minutos, obtendo sobrenadante e sedimento que foram semeados em ágar brucela, contendo antibióticos e antifúngicos, isolando-se apenas uma amostra de Brucella abortus do sedimento, correspondendo a 7,14 por cento dos animais estudados. Os sedimentos obtidos da centrifugaçäo foram tratados com antibióticos e antifúngicos e inoculados em cobaias, por via intraperitoneal. Das vinte e oito cobaias inoculadas cinco (17,85 por cento) apresentaram reaçäo sorológica positiva nos testes de soroglutinaçäo rápida (SAR), soroaglutinaçäo lenta (SAL) e 2-mercaptoetanol (2-ME), demonstrando uma possível infecçäo destes animais pela Brucella abortus presente no leite, apesar do isolamento bacteriano em órgäos como baço, fígado, linfonodo, pulmöes e testículos ter sido obtido em apenas uma amostra. A pesquisa de aglutininas anti-Brucella abortus em soros de humanos observou-se que oito amostras (21,05 por cento) apresentaram reaçäo de 1:100, em pelo menos uma das provas utilizadas na detecçäo de anticorpos, sugerindo possível infecçäo dos humanos através do consumo do leite e subprodutos in natura.