Distribución y caracterización molecular de betalactamasas en bacterias Gram negativas en Colombia, 2001-2016 / Distribution and molecular characterization of beta-lactamases in Gram-negative bacteria in Colombia, 2001-2016

Resumen Las betalactamasas, enzimas con capacidad hidrolítica frente a los antibióticos betalactámicos, son responsables del principal mecanismo de resistencia en bacterias Gram negativas; las de mayor impacto clínico y epidemiológico en los hospitales, son las betalactamasas de espectro extendido (BLEE), las de tipo AmpC y las carbapenemasas. El incremento en su frecuencia y su diseminación a nivel mundial ha limitado cada vez más las opciones terapéuticas tanto en infecciones adquiridas en los hospitales como las que se generan en la comunidad. En Colombia, las redes de vigilancia y los grupos de investigación iniciaron su estudio desde finales de los años 90 y, así, se logró la caracterización molecular de las diferentes variantes; además, se reportó una gran prevalencia y diseminación en los hospitales de mediana y alta complejidad, y se describió el impacto clínico de las infecciones que causan. Dichos estudios han evidenciado el alto grado de endemia de algunas de estas betalactamasas y, en consecuencia, la necesidad de una inmediata implementación de programas para inducir el uso prudente de los antibióticos y de medidas de vigilancia, que permitan controlar y prevenir su diseminación, con el fin de disminuir la morbimortalidad en los pacientes y preservar las opciones terapéuticas disponibles en la actualidad. En esta revisión, se recopiló la información sobre las variantes, la distribución geográfica y la caracterización molecular de las betalactamasas en Colombia, así como los estudios llevados a cabo desde finales de la década de 90 hasta el 2016, lo cual permitió tener un panorama de las betalactamasas que circulan en diferentes regiones, su incremento en el tiempo y sus implicaciones clínicas.

Abstract Beta-lactamases are enzymes with hydrolytic activity over beta-lactam antibiotics and they are the main resistance mechanism in Gram-negative bacteria. Extended-spectrum beta-lactamases (ESBL), AmpC, and carbapenemases have the greatest clinical and epidemiological impact in hospital settings. The increasing frequency and worldwide spread of these enzymes have limited the therapeutic options in hospital-acquired infections and those originating in the community. In Colombia, surveillance networks and research groups began studying them in the late 90s. Different variants of these enzymes have been molecularly characterized and their high prevalence and dissemination in medium and high complexity hospitals, along with a high clinical impact, have been reported. Furthermore, many studies in Colombia have evidenced high endemicity for some of these beta-lactamases, which requires an urgent implementation of antimicrobial stewardship programs in order to preserve the few therapeutic options and infection control strategies to prevent and limit their dissemination. In this publication, we carried out a review of the different enzyme variants, geographic distribution, and molecular characterization of these beta-lactamases in Colombia. Additionally, we describe the available information in the literature regarding studies conducted between the late 1990s and 2016, which provide an overview of the beta-lactamases circulating in different regions of Colombia, their increase over time, and their clinical implications.

Frecuencia de enzimas asociadas a sensibilidad disminuida a betalactámicos en aislados de enterobacterias, Caracas, Venezuela / Frequency of enzymes associated with reduced sensitivity to beta-lactamantibiotics in enterobacteria isolates, Caracas, Venezuela

Objective. To determine the frequency of enzymatic mechanisms associated with reduced sensitivity to broad-spectrum beta-lactam antibiotics in enterobacteria isolates obtained at hospital centers in Caracas, Venezuela.Methods. A cross-sectional study was conducted on enterobacteria isolated from patients at eight hospital centers in Caracas, Venezuela, from 15 October 2009 to 15 January 2010. The species were identified using conventional biochemical tests, and their susceptibility to antimicrobial drugs was assessed by antibiogram (Kirby-Bauer method), using the 2010 performance standards published by the Clinical and Laboratory Standards Institute. Beta-lactam-resistant genes were detected using an enhanced polymerase chain reaction assay.Results. Of 1 235 isolates, 207 (16.8%) exhibited resistance to third- and fourthgeneration cephalosporins, carbapenems, or both. They presented the following phenotypes: extended-spectrum beta-lactamase (ESBL), 93.8%; depressed AmpC, 4.3%; and carbapenemase, 1.9%. Further characterization of the first two phenotypes yielded the following breakdown of types: SHV, 36.7%; CTX-M-1 group, 22.3%; TEM, 21.7%; CTX-M-1 group with impermeability, 5.2%; two-enzyme combinations, 4.5%;CTX-M-2 group, 4.3%; PER, 3.4%; and KPC, 1.9%. The SHV type was predominant in the public hospital strains, whereas the CTX-M-1 group was most common in the strains from the private hospitals. Conclusions. Of the enzymatic mechanisms investigated, the SHV type was the most frequent, followed by the CTX-M-1 group and the TEM type. Also, a high percentageof type KPC was found. The research reported here is one of only a few multicenter studies that have been conducted in Venezuela to evaluate the frequency of this type of antimicrobial resistance mechanism, including phenotypical and molecular characterization...

Objetivo. Determinar la frecuencia de los mecanismos enzimáticos asociados a sensibilidad disminuida a los antibióticos betalactámicos de amplio espectro en aislados de enterobacteriasobtenidos de centros hospitalarios de Caracas, Venezuela. Métodos. Se realizó un estudio transversal con enterobacterias aisladas de pacientes de ocho centros hospitalarios de Caracas, Venezuela, desde el 15 de octubre de 2009 al 15 de enero de2010. La identificación se realizó mediante pruebas bioquímicas convencionales, y la susceptibilidada los antimicrobianos mediante antibiograma (Kirby-Bauer), según las normas de 2010 del Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio. La detección de los genes de resistenciaa betalactámicos se realizó mediante amplificación por reacción en cadena de polimerasa. Resultados. De 1 235 aislados, 207 (16,8%) mostraron resistencia a cefalosporinas de terceray cuarta generación o a carbapenemes o a ambos. De esos, 93,8% presentaron fenotipo betalactamasa de espectro extendido (BLEE); 4,3%, fenotipo AmpC derreprimido, y 1,9%, fenotipocarbapenemasa. La caracterización de los dos primeros fenotipos determinó que 36,7% eran tipo SHV; 22,3%, grupo CTX-M-1; 21,7%, tipo TEM; 5,2%, grupo CTX-M-1 + impermeabilidad; 4,5%, combinación de dos enzimas; 4,3%, grupo CTX-M-2; 3,4%, tipo PER, y 1,9%, tipo KPC.Se observó un predominio del tipo SHV en las cepas obtenidas de hospitales públicos y del grupo CTX-M-1, en los privados. Conclusiones. De los mecanismos enzimáticos investigados, el tipo SHV fue el más frecuente,seguido del grupo CTX-M-1 y tipo TEM. Asimismo, se encontró un alto porcentaje de carbapenemasas tipo KPC. Este es uno de los pocos estudios multicéntricos realizados enVenezuela donde se evalúa la frecuencia de este tipo de mecanismo de resistencia a los antimicrobianos,incluida la caracterización fenotípica y molecular...

Emergencia de la resistencia a colistina en Klebsiella pneumoniae. Caracterización microbiológica y epidemiológica de aislamientos productores y no productores de carbapenemasa de tipo KPC / [Emergence of colistin-resistant Klebsiella pneumoniae. Microbiological and epidemiological characterization of the isolates producing and non-producing KPC-type carbapenemase].

Sixty-four colistin-resistant Klebsiella pneumoniae isolates recovered from clinical specimens from 57 patients admitted to Hospital de Clinicas Jose de San Martin during the period 2010-2012 were studied to describe the microbiological and epidemiological characteristics and factors associated with the emergence of colistin-resistance. Fifty-four colistin-susceptible K. pneumoniae isolates from the same period were also included in the study. The genetic relatedness among the isolates was studied by a PCR assay. Fifty percent of the resistant isolates were KPC-2 producers, 45.3

were ESBL producers and 4.7

only showed resistance to aminopenicilins. All KPC-producers (resistant and susceptible to colistin) were genotipically indistinguishable except for one, whereas the presence of 7 clonal types, which were different from the ones identified in the colistin-susceptible isolates, were detected among ESBL producers. The previous use of colistin was the main factor associated with the acquisition of resistance, and in the case of non-KPC producers the stay in ICU was another significant factor observed. Colistin resistance emerged in our hospital in the year 2010, reaching 3

in nosocomial isolates and maintaining this rate in successive years, due to the selection of resistant subpopulations in the epidemic clonal type in KPC-producers and due to the dispersion of colistin-resistant clonal types in non-KPC producing-isolates.

SHV-type extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) are encoded in related plasmids from enterobacteria clinical isolates from Mexico

OBJECTIVE: In this work we report the molecular characterization of beta-lactam antibiotics resistance conferred by genes contained in plasmids from enterobacteria producing extended-spectrum beta-lactamases (ESBL). MATERIAL AND METHODS: Fourteen enterobacterial clinical isolates selected from a group of strains obtained from seven different hospitals in Mexico during 1990-1992 and 1996-1998 were analyzed at the Bacterial Resistance Laboratory (National Institute Public Health, Cuernavaca). Molecular characterization included PFGE, IEF of beta-lactamases, bacterial conjugation, PCR amplification and DNA sequencing, plasmid extraction and restriction. RESULTS: Isolates were genetically unrelated. ESBL identified were SHV-2 (5/14) and SHV-5 (9/14) type. Cephalosporin-resistance was transferable in 9 of 14 (64 percent) clinical isolates with only one conjugative plasmid, DNA finger printing showed a similar band pattern in plasmids. CONCLUSIONS: The dissemination of cephalosporin resistance was due to related plasmids carrying the ESBL genes.

OBJETIVO: En este trabajo se reporta la caracterización molecular de la resistencia a antibiótico beta-lactámicos conferida por genes contenidos en plásmidos de enterobacterias productoras de beta-lactamasas de espectro extendido (BLEEs). MATERIAL Y MÉTODOS: Catorce aislamientos clínicos de enterobacterias fueron seleccionados por conveniencia de un banco de cepas obtenidas de siete diferentes hospitales de México durante los periodos 1990-1992 y 1996-1998 y fueron procesados en el Laboratorio de Resistencia Bacteriana (Instituto Nacional de Salud Pública, Cuernavaca). En la caracterización se empleó PFGE, IEF para beta-lactamasas, conjugación bacteriana, amplificación por PCR y secuenciación de DNA, extracción y restricción de plásmidos. RESULTADOS: Las 14 cepas fueron no relacionadas genéticamente. Se identificaron BLEEs tipo SHV-2 (5/14) y SHV-5 (9/14). La resistencia a cefalosporinas fue transferida por conjugación en 9 de 14 (64 por ciento) aislamientos clínicos mediante un plásmido que mostró un patrón de restricción similar entre ellos. CONCLUSIÓN: Se sugiere que la diseminación de la resistencia a cefalosporinas fue debida a plásmidos relacionados que contienen los genes que codifican BLEEs.

Incidencia de beta-lactamasas de espectro extendido en el Hospital Clínico de la Universidad de Chile / Incidence of extended-spectrum beta-lactamases in University of Chile Clinical Hospital

Las Betalactamasas de espectro extendido (BLEE) son enzimas de configuración plasmídica producidas por bacterias que hidrolizan los antibióticos betalactámicos. La aparición de cepas bacterianas productoras de BLEE, constituye un problema de salud pública que afecta a todo tipo de instituciones y a la comunidad en general. Este estudio tiene como objetivo determinar las incidencia de BLEE en pacientes hospitalizados del Hospital Clínico de la Universidad de Chile. Se estudió un total de 238 cepas en el periodo julio-agosto 2004; de las cuales 184 correspondieron a de E. coli, 39 a K. pneumoniae y 15 a K. oxytoca, utilizándose el test confirmatorio de BLEE según estándar NCCLS 2004. Se encontró una incidencia de BLEE para E. coli de un 10.3 por ciento, para K. pneumoniae de 28.2 por ciento y de K. oxytoca de 20 por ciento, respectivamente. La distribución de los aislamientos de las cepas BLEE (+) en los distintos servicios del Hospital fue diversa: E. coli se encontró principalmente, en los servicios de medicina y cirugía, y K. pneumoniae en los servicios críticos. Los resultados del estudio permitieron conocer la incidencia y distribución de BLEEs en el Hospital Clínico de la Universidad de Chile y justificaron la implementación de esta técnica de diagnóstico como parte de la rutina del laboratorio de microbiología.