Amplificação gênica alelo-específica na caracterização das hemoglobinas S, C e D e as interações entre elas e talassemias beta / Allele-specific genic amplification in the characterization of hemoglobins S, C, D and interactions among them and with beta thalassemia

INTRODUÇÃO: As hemoglobinopatias resultam de alterações hereditárias, sendo prevalentes em muitas regiões do mundo, mas atingem a população brasileira de forma significativa. Elas são decorrentes de alterações em genes estruturais responsáveis pelo aparecimento das hemoglobinas variantes e/ou em genes reguladores, resultando nas talassemias. A identificação dessas patologias tem sido rotineiramente realizada por procedimentos eletroforéticos, contudo nossa experiência laboratorial evidencia que as mesmas nem sempre apresentam resoluções suficientes para a correta caracterização da mutação. CASUíSTICAS E MÉTODOS: O propósito deste trabalho foi estabelecer uma metodologia válida para a caracterização das hemoglobinas S, C e D em homozigose ou heterozigose, e suas possíveis interações, baseada na amplificação gênica alelo-específica (PCR-AE) com a utilização de primers sense, antisense e primers que se acoplam na posição do alelo mutante e na respectiva posição do alelo normal. RESULTADOS E DISCUSSÃO: Os resultados evidenciaram a validade dessa metodologia na caracterização das mutações, sendo esse procedimento de fácil realização, reprodutível e possível de ser aplicado em um significativo número de amostras.

BRACKGROUND: The hemoglobinopathies are a group of hereditary hemoglobin disorders in worldwide distribution, affecting Brazilian population significantly; they are decurrent of alterations in structural genes, responsible for hemoglobin variants, and/or in regulatory genes, resulting the thalassemia. These disorders have been identified in most cases by electrophoretics procedures, and our laboratory experience points out that sometimes they do not obtain enough resolution for a right characterization of mutation. MATERIAL AND METHOD: The objective of this study was to establish a valid laboratory methodology for the characterization of hemoglobins S, C and D in homozygous or heterozygous and possible interactions, based on the allele-specific genic amplification (PCR-AE) with the use in parallel two primers that differ at their 3 extremities and are complementary to the normal or mutated sequences. RESULTS AND DISCUSSION: The results make evident the validation of this methodology in the characterization of these mutations, once this procedure is easy to execute,to reproduce, as well as it is possible to be applied to a significative number of samples.

Focalização isoelétrica na identificação das hemoglobinas / The isoelectric focusing for hemoglobin identification

INTRODUÇÃO: Considerando a significativa freqüência das hemoglobinopatias na população brasileira e a necessidade do estabelecimento de metodologia confiável, rápida, reprodutível e possível de ser aplicada a um grande número de amostras, foi objetivo desse trabalho analisar as diferenças observadas pelas metodologias eletroforéticas em acetato de celulose e em ágar amido em comparação com a focalização isoelétrica (IEF) e o estabelecimento de um padrão amostral apresentando as principais posições das hemoglobinas anormais, com enfoque nas observadas na população brasileira. CASUíSTICA E MÉTODOS: O material de estudo foi constituído por amostras de sangue de pacientes laboratoriais e doadores pertencentes à região central do estado de São Paulo, Brasil, e nelas aplicamos os testes de rotina laboratorial. Para efeito de comparação e validade das provas laboratoriais, correlacionamos os resultados dos testes com a técnica de focalização isoelétrica. RESULTADOS E DISCUSSÃO: Os resultados observados em cada procedimento, somados aos dados de literatura, permitiram estabelecer padrões de migração para cada sistema eletroforético das hemoglobinas observadas na população brasileira. Dessa forma foram estruturados quadros com a possibilidade do uso dos mesmos evidenciando a facilidade e a viabilidade dessa técnica por diferentes laboratórios.

BACKGROUND: Considering the significant frequency of hemoglobinopathies in the Brazilian population and the necessity of establishing a reliable methodology, quick, reproductive and possible to be applied in a large number of samples, it was the objective of this work to analyze the differences on electrophoretic procedures with cellulose acetate and acid agar compared with isoelectric focusing (IEF), and to establish a standard of migration, presenting main positions of abnormal hemoglobin, based on Brazilian population hemoglobin. MATERIAL AND METHOD: The studied material was formed by blood samples from laboratory patients and blood donors of São Paulo state central area, Brazil, and applied laboratory routines tests. For a reasonable comparison and validation of laboratory tests, we related the results with isoelectric focusing. RESULTS AND DISCUSSION: These observations added to literature accounts allowed the establishment of standards of migration all over hemoglobinopathies observed in the Brazilian population. In this way, charts were developed to demonstrate the simplicity and viability of this techinique by different laboratories.

Perfil agregante em cardíacos em uso do ácido acetil salicílico / Aggregant profile in cardiac patients using acetyl-salicylic acid

As plaquetas atuam na hemostasia, processo esse responsável pelo controle da perda sangüínea em um vaso lesado. O ácido acetil salicílico, um antiagregante plaquetário, tem sido avaliado em cardíacos, quanto a essa atuação, há mais de trinta anos. Os objetivos do presente projeto foram verificar a agregação plaquetária em pacientes cardíacos e hipertensos em uso do ácido acetil salicílico (AAS), nas concentrações de 100 mg/dia e 200 mg/dia, frente a agentes agonistas adenosina difosfato, ácido aracdônico e adrenalina em diferentes concentrações; realizar os mesmos estudos em um grupo considerado normal de doadores de sangue. O grupo analisado foi constituído por 41 pacientes cardíacos e por 40 doadores de sangue, considerado grupo controle. Os resultados evidenciaram que a realização de uma padronização com pool de plasmas frescos de doadores de sangue mostrou ser válida e aplicável para a agregação plaquetária. Ao estabelecermos nossos valores de referência para a agregação plaquetária frente a diferentes agentes agregantes, diferentes concentrações e frente à ausência de agente agregante, foi possível evidenciar que a maioria dos pacientes em estudo em ambas as concentrações de AAS, demonstraram perfil hipoagregante e os pacientes que excepcionalmente não responderam do mesmo modo, muito provavelmente deve-se à variáveis pessoais.

ABO, Lewis, secretor and non-secretor phenotypes in patients infected or uninfected by the Helicobacter pylori bacillus.

CONTEXT: Epidemiological studies have demonstrated higher frequencies of the O blood group and the non-secretor phenotype of ABH antigens among patients suffering from peptic ulcers. Since Helicobacter pylori has been established as the main etiological factor in this disease, controversies about the associations of the ABO and Lewis blood group phenotypes and secretor and non-secretor phenotypes in relation to susceptibility towards infection by this bacillus have been presented. OBJECTIVE: To verify the frequencies of ABO, Lewis blood group phenotypes, secretor and non-secretor phenotypes in patients infected or uninfected by H. pylori. DESIGN: Cross-sectional study. SETTING: Outpatient clinic. PARTICIPANTS: One hundred and twenty patients with dyspeptic symptoms who underwent endoscopy. MAIN MEASUREMENTS: ABO and Lewis blood group phenotypes were determined by a standard hemagglutination test and the secretor and non-secretor phenotypes were evaluated by saliva samples using the inhibitor hemagglutination test. RESULTS: The diagnosis of infection, made via breath and urea tests and confirmed using polymerase chain reaction (PCR) in gastric biopsy fragments, showed the presence of H. pylori in 61.7% of the patients and absence in 38.3%. The differences between the frequencies of the ABO blood group phenotypes among infected (A 27.0%; B 12.2%; AB 4.0% and O 56.8%) and uninfected patients (A 58.7%; B 13.0%; AB 4.3% and O 24.0%) were significant. The Lewis blood type, secretor and non-secretor phenotypes showed homogeneous distribution between the groups of patients analyzed. CONCLUSIONS: Our results suggest that the infection of H. pylori can be related to ABO blood groups but not to the Lewis blood group nor to secretor and non-secretor phenotypes.

ABO, Lewis, secretor and non-secretor phenotypes in patients infected or uninfected by the Helicobacter pylori bacillus

CONTEXT: Epidemiological studies have demonstrated higher frequencies of the O blood group and the non-secretor phenotype of ABH antigens among patients suffering from peptic ulcers. Since Helicobacter pylori has been established as the main etiological factor in this disease, controversies about the associations of the ABO and Lewis blood group phenotypes and secretor and non-secretor phenotypes in relation to susceptibility towards infection by this bacillus have been presented. OBJECTIVE: To verify the frequencies of ABO, Lewis blood group phenotypes, secretor and non-secretor phenotypes in patients infected or uninfected by H. pylori. DESIGN: Cross-sectional study. SETTING: Outpatient clinic. PARTICIPANTS: One hundred and twenty patients with dyspeptic symptoms who underwent endoscopy.MAIN MEASUREMENTS: ABO and Lewis blood group phenotypes were determined by a standard hemagglutination test and the secretor and non-secretor phenotypes were evaluated by saliva samples using the inhibitor hemagglutination test. RESULTS: The diagnosis of infection, made via breath and urea tests and confirmed using polymerase chain reaction (PCR) in gastric biopsy fragments, showed the presence of H. pylori in 61.7 percent of the patients and absence in 38.3 percent. The differences between the frequencies of the ABO blood group phenotypes among infected (A 27.0 percent; B 12.2 percent; AB 4.0 percent and O 56.8 percent) and uninfected patients (A 58.7 percent; B 13.0 percent; AB 4.3 percent and O 24.0 percent) were significant. The Lewis blood type, secretor and non-secretor phenotypes showed homogeneous distribution between the groups of patients analyzed. CONCLUSIONS: Our results suggest that the infection of H. pylori can be related to ABO blood groups but not to the Lewis blood group nor to secretor and non-secretor phenotypes

Aplicaçäo da PCR no diagnóstico molecular do Helicobacter pylori / Application of the PCR in the molecular diagnostic method for Helicobacter pylori

A infecçäo pelo bacilo Gram-positivo Helicobacter pylori está associada a maior risco de gastrite crônica ativa, úlceras pépticas e câncer gástrico. Diferentes métodos têm sido usados para diagnosticar a infecçäo por esse bacilo, porém, como a PCR apresenta elevada sensibilidade e especificidade, ela tem sido de grande utilidade no diagnóstico dessa infecçäo. O objetivo deste trabalho foi avaliar a possibilidade de uso do método PCR na identificaçäao do H. pylori em biópsias de antro gástrico. Foram avaliados 120 pacientes adultos com sintomas de dispepsias e indicaçäo de endoscopia digestiva alta. O DNA genômico foi extraído por um método salino e amplificado em posiçöes específicas, sendo os fragmentos resultantes da amplificaçäo e compatíveis com a presença de infecçäo revelados em gel de agarose a 2 por cento. A metodologia da PCR permitiu detectar o H. pylori a partir de material de biópsia, sendo verificada a sua presença em 61,7 por cento (74/120) dos pacientes e ausência em 38,3 por cento(46/120). Esses resultados reforçam a utilidade da PCR como método diagnóstico dessa infecçäo.

Talassemia alfa: aspectos genéticos / Alpha talassemia: genetic aspects

A talassemia alfa pode ser definida como anemia hemolítica resultante de um defeito bioquímico que provoca a deficiência da síntese de cadeias globínicas alfa. As principais manifestações clínicas decorrentes da talassemia alfa são a doença de HbH e a hidropisia fetal. Indivíduos normais apresentam dois genes alfa em cada cromossomo 16 do conjunto diplóide (alfa alfa/alfa alfa), enquanto que os portadores silenciosos apresentam três alfa alfa alfa/-alfa ou no traço de talassemia alfa dois -alfa/alfa genes alfa com expressão normal. Assim o genótipo mais freqüentemente encontrado na doença de HbH é --/-alfa e o de hidropisia fetal é --/--. Em algumas regiões, somente a forma -alfa aparece com relativa freqüência e, embora os indivíduos -alfa/alfa alfa e -alfa/-alfa sejam comuns, a doença de HbH e a hidropsia fetal não ocorrem.

Distribuiçäo de hemoglobinopatias em populaçäo pré-escolar de Araraquara, Estado de Säo Paulo, Brasil / Distribution of the hemoglobinopathies in preschool population of Araraquara, State of Säo Paulo, Brazil

Foram analisadas 459 crianças na fase pré-escolar (1 a 7 anos), frequentadoras de Centros Recreativos Municipais da cidade de Araraquara no estado de Säo Paulo, com o objetivo de se verificar as distribuiçöes das hemoglobinopatias, bem como os índices hematimétricos desta populaçäo. Os resultadosevidenciaram freqüências de 8,1% de hemoglobinas anormais na populaçäo total, sendo que entre os caucasóides foram observados 3,2% de traço talassêmico beta, 2,52% de traço falcêmico e 0,6% de heterozigotos AC; e para os negróides as freqüências observadas foram de 4,9% de traço falcêmico 4.2% de heterozigotos AC; 2,1% de anemia falciforme e 0,7% de traço talassêmico beta. Com relaçäo aos parâmetros eritrométricos observamos que os valores médios do grupo de portadores de hemoglobinas AA encontram-se dentro dos valores normais preconizados pela literatura, mas nos limites inferiores de normalidade, sendo que ao verificarmos os valores individuais, 32,1% entre os caucasóides e 50% entre os negróides mostram valores de hemoglobina inferiores aos aceitos como normais pela O.M.S. > (12g/d1). Entre os portadores de hemoglobinas anormais observamos anemias moderadas, sendo que os valores individuais mostraram, entre os caucasóides, 100% dos portadores de traço talassêmico beta e 50% daqueles com traço falcêmico com hemoglobina abaixo e 12g/d1; e para os negróides, 87,5% dos portadores de traço falcêmico, 100% daqueles com anemia falciforme e 87,3% do heterozigotos AC com hemoglobina também inferior a 12g/d1

Incidência das freqüências gênicas dos sistemas ABO e Rh (incluindo variante D(u)) em populaçäo da cidade de Araraquara, SP / Incidence of the gene frequencies of the ABO and Rh (including the D(u) variant) systems in population of Araraquara, SP

Avaliou-se a distribuiçäo dos sistemas ABO e Rh (inclusive D(u)) em 14.037 indivíduos da cidade de Araraquara, Estado de Säo Paulo. Freqüências fenotípicas e genotípicas foram estimadas para esses indivíduos. A populaçäo do estado de Säo Paulo, representada por sete cidades de diferentes regiöes, foi tomada como parâmetro de comparaçäo. Os resultados evidenciaram para o sistema ABO comparaçöes significativamente diferentes entre esse estudo e os das demais cidades, com exceçäo de Santo André e um dos estudos da cidade de Säo Paulo. Com relaçäo ao Rh observaram-se diferenças significativas entre Araraquara e as cidades de Botucatu (uma das amostragens), Säo José dos Campos e Säo Paulo, excetuando-se Campinas, Itapetininga, Santo André, Säo Carlos e a outra amostra de Botucatu. A freqüência gênica do fator D(u) encontra-se dentro de limites mínimos e máximos em relaçäo aos outros estudos efetuados no estado de Säo Paulo

Prevalência de anemia ferropriva e níveis de depleçäo de ferro em escolares da regiäo do Vale do Ribeira Estado de Säo Paulo / Ferropenic anemia and levels of iron depletion in school children of the \"Vale do Ribeira\" (SP)

Avaliou-se a incidência de anemia ferropriva e níveis de depleçäo das reservas de ferro orgânico em crianças em idade escolar do Vale do Ribeira (SP), pelas determinaçöes da série vermelha e ferritina. As crianças foram divididas, conforme sua origem, em rurais e urbanas. Entre as crianças rurais, 9,4 por cento e, entre as urbanas, 7,7 por cento apresentavam anemia ferropriva de acordo com os critérios da Organizaçäo Mundial da Saúde. Os níveis de depleçäo das reservas de ferro (excluindo os grupos com anemia) foram, respectivamente, 5,5 por cento e 8,4 por cento.

Estudo do perfil lipídico e da hemoglobina glicosilada em diabéticos, de ambos os sexos, dependentes e näo dependentes da insulina / A study of the lipid profile and glucosidic hemoglobin in insulin-treated and non-insulin treated diabetics of both sexes

Foram realizados estudos do perfil lipídico, ácido úrico e hemoglobina glicosilada em indivíduos diabéticos dependentes da insulina (IDD) e näo dependentes da insulina (NIDD) e em grupo considerado normal, de ambos os sexos, em vista da discordância encontrada na literatura com respeito ao assunto. Após análise estatística, observamos no grupo feminino NIDD um aumento de concentraçäo de lipídeos totais, colesterol, triglicerídeos, fosfolipídeos, LDL-colesterol e VLDL-colesterol, quando comparado com o grupo controle, e um aumento da concentraçäo dos lipídeos totais, colesterol, LDL-colesterol, VLDL-colesterol, triglicerídeos e dos fosfolipídeos no NIDD, quando comparado ao IDD. A concentraçäo de ácido úrico no IDD quando analisada contra o NIDD se mostrou diminuída. No entanto, o estudo realizado para o grupo masculino foi somente estatísticamente maior no que diz respeito à concentraçäo de fosfolipídeos no IDD em relaçäo ao NIDD

Hemoglobinas anormais no Brasil: prevalência e distribuiçäo geográfica / Abnormal hemoglobins in Brazil: prevalence and geographic distribution

Foi realizado um estudo de hemoglobinas anormais entre habitantes do Brasil. Foram utilizadas amostras de sangue de 55.217 indivíduos provenientes de centros de saúde, escolas e bancos de sangue de 40 cidades, e analisadas no período de 1978 a 1985. Para efetuar as análises, os indivíduos foram divididos em grupos (características raciais e por classe etária); 42.768 foram classificados como "caucasóides" e 12.449 como "negróides", incluindo nesta última categoria os mulatos escuros e claros. Foram usadas técnicas eletroforéticas para determinar a presença das hemoglobinas dos tipos S e C, de alfa e beta talassemias e formas raras dessas proteínas. Estudos de cadeias polipeptídicas e mapeamento peptídico foram aplicados para caracterizar variantes raras. Os diagnósticos de alfa e beta talassemias foram realizados de acordo com as normas estabelecidas pela Organizaçäo Mundial da Saúde. Pelos procedimentos utilizados foram detectadas hemoglobinas anormais em 1.703 (3.08%) dos indivíduos estudados. Desse total 1.378 eram variantes moleculares específicas (1.068 variantes do tipo S, 245 do tipo C, e 65 de formas raras), 291 talassemias e 34 meta-hemoglobinemias. A prevalência das hemoglobinas anormais foi maior entre os negróides em 34 das 40 cidades estudadas. Entre os caucasóides a maior prevalência ocorreu em Valença (BA) e foi de 8.31%, enquanto entre os negróides foi em Säo José dos Campos (SP) com 15.38%. De uma forma geral, na populaçäo caucasóide a faixa de prevalência mais freqüente foi de 1 a 5%, e ocorreu em 36 cidades, enquanto que entre os negróides a faixa mais freqüente foi de 5 a 10% e ocorreu em 19 cidades. Os métodos utilizados permitiram identificar 21 genótipos de hemoglobinas anormais, sendo 13 de variantes moleculares e 8 de talassemias. Entre os genótipos das variantes moleculares, 8 foram considerados raros, e um deles (Hb N Baltimore) näo havia sido encontrado anteriormente na populaçäo brasileira...