CORAL SNAKE ANTIVENOM PRODUCED IN CHICKENS (Gallus domesticus) / Antiveneno de serpiente coral producido en gallinas (Gallus domesticus)

The production of anti-snake venom from large mammal's blood has been found to be low-yielding and arduous, consequently, antivenom immunoglobulins for treatment are achieved regularly as polyvalent serum. We have standardized an undemanding technique for making purified immunoglobulin IgY antivenom consisting of polyclonal antibodies against coral snake venom in the egg yolk of immunized hens. We have adapted a reported process of antibody purification from egg yolks, and achieved 90% antibody purity. The customized technique consisted of the removal of lipids from distilled water-diluted egg yolks by a freeze–thaw sequence. The specific immunoglobulins were present in the egg yolk for up to 180 days postimmunization. Therefore, by means of small venom quantities, a significant amount of immunoglobulins were found in an adequately purified state (The obtained material contained about 90% pure IgY). The antigen binding of the immunoglobulins was detected by a double immunodiffusion test. Titers of antibodies in the yolk were estimated with a serum protection assay (Median effective dose = ED50) (ED50= 477 mg/kg). Given that breeding hens is economically feasible, egg gathering is noninvasive and the purification of IgY antibodies is quick and easy, chicken immunization is an excellent alternative for the production of polyclonal antibodies. To the best of our knowledge, this is the first coral snake antivenom prepared in birds.

La producción de antiveneno de serpiente usando sangre de grandes mamíferos se ha encontrado que es de bajo rendimiento y de trabajo arduo, en consecuencia, las inmunoglobulinas antiveneno para el tratamiento se obtienen generalmente, como suero polivalente. Hemos estandarizado una técnica poco exigente para la fabricación de inmunoglobulina purificada IgY, que consistió en generar anticuerpos policlonales contra el veneno de la serpiente coral en huevos de gallinas inmunizadas. La técnica consistió en la eliminación de lípidos de las yemas del huevo, diluidas en agua y en una secuencia de congelación-descongelación. Las inmunoglobulinas específicas estuvieron presentes en la yema de huevo hasta 180 días después de la inmunización. La unión del antígeno a las inmunoglobulinas se detectó mediante un ensayo de inmunodifusión doble. Los títulos de anticuerpos en la yema fueron estimados con un ensayo de protección (dosis efectiva media = ED50). Dado que las gallinas reproductoras son económicamente viables, la recolección de huevos es no invasiva y la purificación de anticuerpos IgY es rápida y fácil, la inmunización de la gallina es una excelente alternativa para la producción de anticuerpos policlonales. A nuestro entender, esta es el primer anti-veneno contra serpiente de coral preparado en aves.

Use of hen egg derived immunoglobulin against scolopendra (Scolopendra gigantea) venom

Las picaduras de escolopendra (Scolopendra gigantea) en seres humanos y animales domésticos representan un accidente agudo y muy doloroso. La necrosis y otros daños ocasionados por este veneno pueden ser prevenidos, si se inyecta un antiveneno. Este estudio propone producir anticuerpos policlonales en gallinas hiper-inmunizadas contra el veneno de escolopendra (Scolopendra gigantea Linneaus 1758). Un grupo de gallinas fue inyectado subcutánea e intramuscularmente con diluciones de venenos, de acuerdo con tres rutinas diferentes. Los huevos fueron recogidos diariamente y los anticuerpos en la yema fueron purificados con un método modificado de polietilen-glicol y cloroformo. Los niveles de anticuerpos en yema fueron calculados con prueba de precipitación de gel de agar y pruebas de protección (ED50). Los huevos cosechados 15 días post-inyección tenían los títulos más altos de anticuerpos. Después de seis meses, los anticuerpos liofilizados y guardados a 5°C mantenían su actividad. Ratones envenenados, inyectados posteriormente con anticuerpos purificados, tuvieron un 100% de supervivencia al compararse con los controles. La limpieza, la eficacia, y la sencillez de producir los antivenenos en gallina, y la incapacidad de estos anticuerpos (IgY) para fijarse al complemento humano, formulan una alternativa interesante a otros antivenenos producidos en mamíferos. Este estudio puntualiza que los anticuerpos de huevo de gallina pueden ser provechosos como un instrumento terapéutico para tratar escolopendrismo en seres humanos y animales domésticos. Además, abre un campo terapéutico para la fabricación de otros antivenenos contra el espectro amplio de las toxinas y como probable herramienta de diagnóstico.

A scolopendra sting in humans and domestic animals is an acute and highly painful accident. The present study was an attempt to raise specific hyper-immune polyclonal antibodies against scolopendra centipede (Scolopendra gigantea Linneaus 1758) venom. A group of hens were injected with venoms subcutaneously and intramuscularly according to three different routines. This protocol was found to be effective for hyperimmunization. Eggs were gathered daily and antibodies were purified from yolk with a polyethylene-glycol and chloroform modified method. Titers of antibodies in yolk were estimated with an agar gel precipitation test, and a serum protection (ED50) test. Eggs harvested at 15 days post-injection had maximum antibody titers. After six months, antibodies lyophilized and stored at 5°C still maintained their activity. Envenomed mice were injected with purified antibodies, which induced 100% recovery as compared to those not treated with the antibodies. The cleanliness, effectiveness, and simplicity of producing antibodies against scolopendra venom in avian egg yolk, and their incapability to attach human complement, formulates an interesting option to equine and other mammalian antivenoms. This study infers that avian egg yolk antibodies may be useful as a therapeutic tool in treating scolopendrism in humans and domestic animals. It also opens a field for the production of other antivenoms against the wide spectrum of toxins as well as the use of these antibodies as a diagnostic tool.

Experimental ophitoxemia produced by the opisthoglyphous lora snake (Philodryas olfersii) venom

Várias serpentes da família Colubridae produzem secrecões orais venenosas. Neste trabalho, foi estudado o veneno coletado da presa posterior da serpente opistóglifa venezuelana Philodryas olfersii. Deferentes proteínas estavam presentes no veneno, sendo caracterizadas pela eletroforese de proteínas (SDS-PAGE) a 20%. A secrecão mostrou atividade proteolítica (gelatinase) a qual foi parcialmente purificada em uma coluna de intercâmbio iônico (mono Q2). Adicionalmente, a atividade hemorrágica do veneno de Philodryas olfersii foi demonstrada em embriões de galinha, pele e peritônio de rato. Os sintomas neurológicos foram demonstrados em camundongos inoculados com veneno de Philodryas olfersii. Em conclusão, o veneno da Philodryas olfersii mostrou atividade proteolítica, hemorrágica, e neurotóxica, assim aumentando o interesse na elevada acão tóxica do veneno da Philodryas olfersii.

A low-cost method to test cytotoxic effects of Crotalus vegrandis (Serpentes: Viperidae) venom on kidney cell cultures

La patogénesis de la lesion renal ha sido relacionada a la miolisis, hemólisis, hipotensión y/o el efecto directo del veneno. Tanto el cultivo primario o el cultivo celular continuo proveen una alternativa in vitro para la evaluación cuantitativa de la toxicidad de venenos de serpiente. El veneno crudo de Crotalus vegrandis fue fraccionado por una cromatografía de exclusión molecular. La toxicidad del veneno crudo de C. vegrandis, sus fracciones hemorrágicas y neurotóxicas fueron evaluadas en células renales primarias de ratón y una línea continua de células Vero mantenidas in vitro. Las células fueron aisladas de la corteza renal murina y se cultivaron en placas de 96 pozos con medio Dulbecco (DMEM). Allí fueron tratadas con el veneno crudo y sus fracciones. Las células de la corteza renal murina tuvieron una morfología de células epiteliales y la mayoría se tiñeron con un anticuerpo anti-músculo actina. La citotoxicidad fue evaluada por el método colorimétrico del tetrazolium. La viabilidad de las células fue menor en las células tratadas con el veneno crudo, seguida por la fracción hemorrágica y neurotóxica, con un CT50 de 4.93, 18.41 y 50.22 µg/mL, respectivamente. Los cultivos de células Vero parecieron ser más sensibles con un CT50 de 2.9 y 1.4 µg/mL para el veneno crudo y el pico hemorrágico, respectivamente. Los resultados de este estudio muestran la potencialidad de usar sistemas de cultivo celular para evaluar la toxicidad de los venenos.

Immunohistochemical changes in kidney glomerular and tubular proteins caused by rattlesnake (Crotalus vegrandis) venom

El daño renal es una causa importante de muerte en pacientes que sobreviven a los efectos iniciales de los severos envenenamientos crotálicos. El objetivo de este estudio ha sido el describir como las proteínas del citoesqueleto y los componentes de membrana basal muestran alteraciones importantes en su manifestación, bajo la acción del veneno crudo de Crotalus vegrandis y una fracción hemorrágica (Uracoina-1) del mismo veneno ya que, la matriz extracelular del tejido renal es alterada por la actividad de estas toxinas. Para detectar las proteínas en cuestión se utilizó el método de inmunoperoxidasa con anticuerpos mono y policlonales. Los tipos celulares dentro de las lesiones renales fueron caracterizados por identificación fenotípica, por medio del análisis inmunohistoquímico de diferentes marcadores de proteínas utilizando anticuerpos primarios contra células mesangiales, endoteliales, proteínas de citoesqueleto (filamento intermedio), matriz extracelular y membrana basal. Se procesaron las muestras para estudio morfológico por procedimientos de rutina (biotina-streptavidina-peroxidasa) y se observaron por microscopía de luz. Fueron incluidos los controles negativos y positivos para cada antígeno probado, en los ensayos de tinción. Se observó también la desaparición en el citoesqueleto, de la expresión de las proteínas vimentina y desmina, luego de la inyección de veneno crudo y Uracoina-1. En la matriz extracelular y la membrana basal de los animales envenenados, la expresión del anti-colágeno Tipo IV, tiende a desaparecer después de las 24 a las 120 horas de la inyección del veneno.

Análisis clínico y epidemiológico de los accidentes por mordeduras de serpientes del gÚnero Bothrops en Venezuela [A clinical and epidemiological analysis of accidental bites by snakes of the genus Bothrops in Venezuela]

Clinical register of 60 patients bitten by Bothrops snake who assisted at Leopoldo Manrique Hospital and the Institute of Tropical Medicine (HLM-IMT) in Caracas during 1996-1997 were analysed. The accident was more frequent in males (45/75). In 32 cases (53.3) the snake was classified and 26 were Bothrops lanceolatus, 4 Bothrops venezuelensis and 2 Bothrops atrox. Anatomic regions more frequent bitten were superior members (40/66.6): hands (36/60), forearm (2/3.3), elbow (1/1.6) and arm (1/1.6). On inferior members (20/33.3): legs (6/10), feet (10/16.7), ankle (2/3.3), and the hip (2:3.3). The most frequent clinical manifestations in moderate and severe cases (33 patient) were pain (100), oedema (98), ecchymosis (76), blisters (20), necrosis (12), abscess (6) bleeding (19), heart failure (1/1.6), renal failure (1/1.6). The blood clotting was evaluated in 60 (100) cases and it was altered in 33 (55) patients. No deaths were recorded.

El problema de las picaduras de avispas (insecta, hymenoptera, vespidea polistinae) a nivel internacional: aspectos biológicos y sociales / The problem of the pricking of wasp (insec hymenoptera, vespidae polistinae) a level international: aspects biologics and socials

En este trabajo se describe el caso de un viajero venezolano, quien durante su infancia había sufrido un ataque masivo de Pompiliidae venezolanos y recientemente desarrollo un cuadro de anafilaxis, ocasionado por un solitario Vespidae norteamericano (Polistes palisotius sp), durante un viaje a la ciudad de Orlando, en los Estados Unidos de América (USA). Los elementos bioquímicos del veneno de Vespidae están caracterizados por un conjunto de sustancias tales como aminas biogénicas de bajo peso molecular y proteínas y polipéptidos de alto y medio peso molecular. Sepiesa que la proteína (antígeno 5) es de alto poder alergénico, causante de liberación de histamina en las personas sensibilizadas. La picadura natural parece tener un efecto potenciador de la actividad inmunológica. Las muertes reportadas en los Estados unidos, desde 1950, por animales venenosos, el 50 por ciento fueron causadas por la picadura de insectos himenópteros: de 229 fatalidades, 101 resultaron de picaduras de avispas

Preparación toxoide a partir de la fracción hemorrágica del veneno de Bothrops asper (serpiente de América Central y del Sur) / Toxoid preparation from hemorrhagic fraction of Bothrops asper venom

Se describe una técnica para la preparación de un toxoide a partir de la fracción hemorrágica del veneno de Bothrops asper. Este método conserva un alto grado de inmunogenecidad aunque elimina los efectos letales. Ninguno de los animales vacunados con el toxoide de esta fracción presentó lesiones hemorrágicas cuando les fue inyectado el veneno de la fracción hemorrágica

Efecto del BCG sobre la evolución de la leishmaniasis tegumentaria / Effect of the BCG on the tegumentary leishmaniasis

Durante mucho tiempo, la infección experimental con Leishmania sp. ha sido considerada ser solamente un prototipo para el estudio de las interacciones generales parásito-hospedador; algunos autores han propuesto que la eficiencia terapéutica de la inmunoterapia (BCG más promastigotes de Leishmania mexicana) es igual a la de la quimioterapia (Glucantime). En nuestro modelo experimental la inoculación de BCG en lesiones de leishmaniasis tegumentaria, que teóricamente debería haber provocado una estimulación inmune inespecífica, encontró como hallazgo fundamental, la muerte de todo el lote experimental, que fue inyectado con BCG intralesional, sugiriendose como posible mecanismo el desarrollo de un fenómeno inmunosupresivo, por competencia antigénica