Use of single-enzyme amplified fragment length polymorphism for typing Clostridium perfringens isolated from diarrheic piglets

Clostridium perfringens is an important pathogen in human and veterinary medicine. In swine, the agent is responsible for necrotic enteritis and enterotoxemia characterized by diarrhea, weight loss, delayed development and, in some cases, death. In the present study amplified fragment length polymorphism analyses (AFLP) was used to characterize 54 C. perfringens strains isolated from swine presenting diarrhea. Analysis of the results showed 29 distinct profiles with discriminatory index equal to 0.97. Partial correlation between the origin of the isolates and groups was drawn, and correlation was possible in only 18.5 percent of the samples. Characterization of the strains in biotypes (A, B, C, D and E), production of beta-2 toxin and enterotoxin were performed by means of the polymerase chain reaction (PCR). Biotypes A, C and D were observed among the strains analyzed. All samples were positive for presence of the gene encoding beta-2 toxin and negative for the gene encoding enterotoxin. AFLP have shown to be a simple, fast, low cost method with high discriminative power and good reproducibility, presenting a great potential in epidemiological studies involving C. perfringens strains of animal origin.

Clostridium perfringens é um importante agente infeccioso em medicina veterinária e humana. Em suínos, o agente é responsável pela enterite necrótica e enterotoxemia, caracterizadas por diarréia, perda de peso, atraso no desenvolvimento e morte. No presente estudo foi utilizado o polimorfismo do comprimento de fragmentos amplificados (AFLP), para caracterizar 54 isolados de C. perfringens obtidos de suínos com diarréia. A análise dos resultados do AFLP demonstrou 29 perfis distintos com índice discriminatório igual a 0,97. A correlação entre a origem dos isolados e os agrupamentos obtidos foi parcial, sendo apenas possível a correlação total de 18,5 por cento das amostras estudadas. A caracterização das cepas em biotipos (A, B, C, D e E), produção da toxina beta-2 e enterotoxina foi realizada através da reação da polimerase em cadeia (PCR). Dentre as cepas analisadas foram observados os biotipos A, C e D, sendo que todas as amostras foram positivas para a presença do gene codificador da toxina beta-2 e negativas para o gene codificador da enterotoxina. Neste estudo, o AFLP demonstrou ser uma metodologia simples, rápida, de baixo custo, com alto poder discriminatório e boa reprodutibilidade, apresentando grande potencial para estudos epidemiológicos envolvendo cepas de C. perfringens de origem animal.

Identification of bacterial agents of enteric diseases by multiplex PCR in growing-finishing pigs

A enterite proliferativa suína, a espiroquetose colônica, a disenteria suína e a salmonelose são as doencas entéricas mais freqüentes em suínos das fases de crescimento e terminacão no Brasil. O diagnóstico destas doencas através de técnicas bacteriológicas tradicionais é difícil, lento e no caso da enterite proliferativa suína, impossível. A deteccão destes agentes através da reacão de polimerase em cadeia é altamente sensível e específica e está se tornando uma ferramenta muito útil no diagnóstico em Medicina Veterinária. No presente estudo foram testadas duas técnicas de PCR sob a forma de "multiplex"para deteccão e identificacão simultânea dos agentes bacterianos envolvidos na enterite proliferativa suína, na espiroquetose colônica, na disenteria suína e na salmonelose em amostras de fezes diarreicas. O DNA obtido de culturas puras de cada agente sozinho ou misturado em diferentes combinacões e concentracões foram amplificados utilizando a Multiplex PCR específica para Lawsonia intracellularis e Salmonella, ou Brachispyra pilosicoli e Brachispyra hyodysenteriae. Após a padronizacão, a M-PCR foi aplicada na deteccão dos quatro agentes em 541 amostras de fezes diarreicas de suínos provenientes de diferentes Estados do Brasil. O agente mais freqüente foi Lawsonia intracellularis (13 per center), seguido pela Salmonella spp. (4,8 per center), B. hyodysenteriae (1,4 oer center), B. pilosicoli (1 per center) e suas diferentes associacões. Os resultados obtidos indicam que as duas reacões testadas permitem a deteccão destes quatro importantes patógenos entéricos de maneira rápida e específica.

Morfobiologia e patogenicidade da Eimeria falciformis var. pragensis Cerná, Sénaud, Mehlhorn & Scholtyseck, 1974 em camundongo (Mus musculus) / Morphobiology and pathogenicity of Eimeria falciformis var. pragensis Cerna, Seraud, Mehlhorn & Scholtyseck, 1974 in mouse

Identificou-se, com base em características morfobiológicas, uma das espécies de Eimeria provenientes de camundongos de um biotério comercial e purificada pela técnica do oocisto único. Os oocistos eram sub-esféricos ou ovóides, medindo 21,3 x 16,9 *m, (n=780), com membrana dupla, lisa, incolor, sem micrópila, sem corpo residual oocístico e com 1 a 4 grânulos polares. Esporocistos eram elipsóides, com corpúsculo de Stieda, mediram 11,5 x 6,3 *m (n= 678) e continham corpo residual esporocístico. Todo o ciclo endógeno ocorreu no intestino grosso, com pelo menos 4 geraçöes assexuadas. Merontes maduros de 1ª geraçäo de 10,3 x 10,6 *m, com 8 a 25 merozoítas de 5,0-10,0 x 1,0-3,0 *m foram vistos inicialemtne às 24 horas pós-inoculaçäo (HPI). Merontes de 2ª geraçäo de 14,4 x 8,1 *m, com 8 a 20 merozoítas de 11,0-16,0 x 2,0 - 3,0 *m surgiram a partir de 48 HPI. Entre 72 e 96 HPI havia muitos merontes maduros de 3ª geraçäo, de dois tipos: um medindo 13,9 x 8,3 *m, com merozoítas de 17,0-19,0 x 2,0-4,0 *m e outro 7,3 x 10,4 *m, com 6 a 10 merozoítas de 8,0-13,0 x 1,0-3,0 *m. Merontes de 4ª geraçäo, de 10,4 x 11,9 *m e com 26 a 48 ou mais merozoítas de 8,0-13,0 x 2,0-3,0 *m foram vistos a partir de 132 HPI, bem como gametócitos imaturos e, às 144, já havia gametócitos maduros. O período de pré-patência foi de 6 1/2 a 7 dias pós-inoculaçäo (DPI) e a patência de 6 a 13 dias. A 23-24-C, em Dicromato de Potássio a 2,0%, 72,0% dos oocistos esporularam em 216 horas. Os camundongos infectados apresentaram, em geral, apatia, anorexia, perda de peso, diarréia ou disenteria entre o 6§ e o 10§ DPI. A mortalidade ocorreu entre o 8§ e o 13§ DPI, principalmente no 9§, e nos grupos que receberam doses mediana de oocistos. As lesöes se restringiram ao intestino grosso e se traduziram por uma enterite necrótica evoluindo depois para regeneraçäo e cura. Com base nas características morfológicas da Eimeria estudada, concluiu-se tratar da E. falciformis var. pragensis

Do connective tissue components induce plasma activation in vivo?

1. this oaoer describes the effect if homologous plasma in contact with connective tissue on vascular perveability, edema and cell migration. 2. The contact of "non-activated"plasma with connective tissue structures does not tesults in generation of mediators responsible for increase in vascular premeability or in edema. 3. "Activated" plasma is able to induce vascular permeability and edema when in contact with connective tissue components. 4. Injection of "non-activated" or "activated" plasma induced a mild inflammatory cell migration

Isolamento de parvovirus canino no Brasil / Isolation of canine parvovirus in Brazil

Foram examinadas 56 amostras de fezes, 10 de raspado de mucosa intestinal de 2 amostras de material vomitado de cäes doentes, além de 7 amostras de fezes de cäes normais, com o objetivo de isolar-se o parvovirus canino durante a epizootia de gastoenterite hemorrágica ocorrida em Säo Paulo. Das 56 amostras de fezes de cäes doentes foram isolados virus de 24 (42,8%) e das 7 amostras de fezes de cäes clinicamente normais foi isolado virus de apenas 1 (14,3%). Tanto o material vomitado quanto do raspado de mucosa intestinal obteve-se o isolamenteo de parvovirus de uma amostra apenas, correspondendo a 50% e 10%, respectivametne. A reaçäo de hemaglutinaçäo, realizada com os váios tipos de materiais clínicos, demonstrou concordância de 96,3% com o isolamento de virus nas 27 amostras positivas, evidenciando a grande utilidade prática desta reaçäo como método de triagem para determinar, nos casos de diarréia em cäes, a presença de particulas virais com esta caracteristica hemaglutinantes. Em 15 amostras de suspensäo fecal e em uma das culturas positivas foi observada, a microscopia eletrônica, a presença de particulas virais com a s características morfológicas dos parvovirus isolados e o parvovirus felino foi demonstrada pela reaçäo de inibiçäo de hemaglutinaçäo e pela imunofluorescência em 6 das amostras isoladas