Efeito de diferentes concentrações de ingestão de gossipol livre sobre morfometria testicular e qualidade seminal de touros da raça Nelore / Effect of free gossypol intake in different levels on the testicular morphometry and seminal quality of Nelore bulls

A cotonicultura tem forte fator de impacto na economia nacional, e o estado de Mato Grosso se destaca por ser o maior produtor de algodão herbáceo e deter o maior rebanho bovino do país, condições essas que estimulam o uso do caroço, da torta e do farelo de algodão na alimentação animal. Considerando que o gossipol está presente nos subprodutos do algodão e que seus efeitos sobre a reprodução podem reduzir a fertilidade dos animais, objetivou-se, com essa pesquisa, avaliar o efeito da ingestão de dietas com diferentes teores de gossipol livre por dia sobre a morfometria testicular e a qualidade seminal de touros da raça Nelore. Foram utilizados 28 touros, distribuídos aleatoriamente em seis tratamentos: T0, 0 grama de gossipol livre/touro/dia ; T1, 1,08 grama de gossipol livre/touro/dia; T2, 2,07 gramas de gossipol livre/touro/dia; T3, 3,24 gramas de gossipol livre/touro/dia; T4, 3,82 gramas de gossipol livre/touro/dia e T5, 5,08 gramas de gossipol livre/touro/dia. Os animais de cada tratamento foram mantidos confinados em área média de 100m2, dotada de bebedouro, cochos para mistura mineral e para volumoso/concentrado. O consumo de 3,24 gramas de gossipol livre/touro/dia alterou a qualidade espermática e a morfometria testicular de touros.(AU)

The cotton industry has a strong impact factor in the Brazilian economy and the state of Mato Grosso stands out for being the largest upland-type cotton producer and also holds the largest cattle herd in the country, conditions that stimulate the use of cottonseed pie and cottonseed meal in animal feed. Whereas gossypol is present in cotton by-products and their effects on reproduction can reduce the animal fertility, this research evaluated the effect of diets with different free gossypol contents in the testicular morphometry and semen quality of Nelore bulls. 28 bulls were randomly distributed in six treatments: T0, receiving no free gossypol; T1, receiving 1.08g / bull / day; T2, receiving 2.07g / bull / day; T3, receiving 3.24g / bull / day; T4, receiving 3.82g / bull / day and T5, receiving 5.08g / bull / day of free gossypol respectively. The animals in each treatment were kept confined in an averaged area of 100m2, having fresh water, troughs for mineral mixture and roughage / concentrate. The consumption of 3.24g of free gossypol / bull / day altered the bulls sperm quality and testicular morphometry.(AU)

Effect of somatotropin on survival and diameter of bovine preantral follicles / Efeito da somatotropina na sobrevivência e no diâmetro de folículos pré-antrais de bovinos

The aim of this study was to evaluate the effect of Recombinant bovine somatotropin (rbST) on survival and diameter of bovine preantral ovarian follicles (PAOF) cultured in vitro. Ovaries were collected from adult cows and fragments of ovarian cortex were immediately fixed (non-cultured control) or cultured in vitro in α-MEM+ alone or containing 10, 50, 100 or 1,000ng/mL rbST. The fragments were processed for Classical Histology and Transmission Electron Microscopy. After one and seven days of culture, the percentage of normal follicles in the non-cultured control was superior (P< 0.05) to the follicles cultured in α-MEM+ alone or with different rbST concentrations. The oocyte and follicular mean diameter did not increase during the culture for one and seven days, both in media containing rbST and in the medium without this hormone. The only medium in which there was no reduction in follicular diameter with the time of culture was the medium without rbST. Ultrastructural damage in PAOF cultured in vitro was found. It is concluded that the use of rbST at different concentrations in in situ culture of bovine preantral follicles has no beneficial effects on survival and growth of bovine PAOF.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da somatotropina recombinante bovina (rbST) sobre a sobrevivência e o diâmetro de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) bovinos cultivados in vitro. Ovários foram coletados de vacas adultas e fragmentos do córtex ovariano foram imediatamente fixados (controle não cultivado) ou cultivados in vitro em α-MEM + sozinho ou contendo 10, 50, 100 ou 1.000ng/mL de rbST. Os fragmentos foram processados para histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão. Após um e sete dias de cultivo, o percentual de folículos normais no controle não cultivado foi superior (P<0,05) aos cultivados em α-MEM + sozinho ou acrescido de diferentes concentrações de rbST. Os diâmetros médios oocitário e folicular não aumentaram durante o cultivo por um e sete dias, tanto nos meios contendo rbST, como no meio sem esse hormônio (α-MEM + ). O único meio em que não houve redução no diâmetro folicular com o tempo de cultivo foi o sem rbST. Verificaram-se ainda danos ultraestruturais em FOPA cultivados in vitro. Conclui-se que o uso de rbST em diferentes concentrações no cultivo in situ de folículos pré-antrais bovinos não tem efeitos benéficos na sobrevivência e no crescimento de FOPA bovinos.(AU)

Histopathology and immunohistochemistry of peripheral neural sheath tumor and perivascular wall tumor in dog / Histopatologia e imuno-histoquímica de tumor de bainha de nervo periférico e de tumor de parede perivascular em cães

Soft tissue sarcomas (STS) comprise a heterogeneous group of malignancies derived from extra-skeletal mesenchymal tissues that may show similar histopathological changes. Histopathologic patterns suggestive of perivascular wall tumors (PWT) and peripheral nerve sheath tumors (PNST) have been described. This study investigated the histogenesis in a series of 71 cases of canine STS that showed morphological compatibility with what is described for PWT and PNST. Immunohistochemistry analysis were done to CD56, S100, SMA, Desmin, Von Willebrand Factor, NSE and GFAP. Twenty-one cases (29.6%) showed histopathologic features compatible with PWT, 23 cases (32.4%) with PNST and 27 cases (38.0%) shared both histopathological features. By immunohistochemistry, 59 (83.1%) cases showed positivity only for neural markers and 12 (16.9%) had simultaneous positivity for both neural and muscle markers. PNST was the most prevalent neoplasm and none of the cases were positive for muscle markers only. The histopathologic features were not useful to define the diagnosis of PWT, since most tumors were negative for muscle markers but positive for neural markers. Due to this immunoreactivity and the morphologic features, future studies may propose guidelines for the classification of these neoplasms.(AU)

Sarcoma de tecidos moles (STM) compreende um grupo heterogêneo de neoplasias malignas, derivadas de tecidos extraesqueléticos, que podem apresentar alterações histopatológicas similares. Os padrões histopatológicos sugestivos de tumor de parede perivascular (TPP) e de tumor de bainha de nervo periférico (TBNP) têm sido descritos. Este estudo investigou a histogênese de uma série de 71 STM caninos, que apresentavam compatibilidade morfológica com o que é descrito para TPP e TBNP. A análise imuno-histoquímica foi feita para CD56, S100, SMA, Desmina, Fator Von Willebrand, NSE e GFAP. Vinte e um casos (29,6%) apresentaram características histopatológicas compatíveis com TPP, 23 casos (32,4%) com TBNP e 27 casos (38,0%) apresentaram características histopatológicas de ambos. Na imuno-histoquímica, 59 (83,1%) casos apresentaram positividade somente para marcadores neurais e 12 (16,9%) tiveram positividade simultânea tanto para marcadores neurais como para marcadores musculares. TBNP foi a neoplasia mais prevalente e nenhum dos casos foi positivo para somente para marcadores musculares. As características histopatológicas não foram úteis para definir o diagnóstico de TPP, uma vez que a maioria foi negativa para marcadores musculares, mas positiva para marcadores neurais. Devido a essa imunorreatividade e às características morfológicas, pesquisas futuras poderão propor orientações para a classificação dessas neoplasias.(AU)

Adição da proteína específica do oviduto de porcas (pOSP) e da melatonina em meios de maturação e o efeito na clivagem in vitro de embriões suínos / Addition of the oviduct specific protein of porcine (pOSP) and melatonin in maturation media and their effect on the in vitro production of pig embryos

No presente estudo, utilizou-se a melatonina e a proteína específica do oviduto (pOSP) nos meios de maturação in vitro. Foram avaliadas a expansão do complexo cumulus-ovócito (CCOs), as concentrações intracelulares de espécies reativas de oxigênio (ROS) e o desenvolvimento embrionário nos diferentes grupos (C = controle; T1 = somente com melatonina; T2 = com melatonina e pOSP e T3 somente com pOSP). No tocante à expansão do CCOs, houve diferença (P<0,05) dos valores obtidos no grupo C em relação aos valores médios dos grupos T1, T2 e T3, porém não houve diferença entre os valores obtidos nos tratamentos (P>0,05). Na dosagem de ROS, não houve diferença entre os valores médios obtidos no grupo C (26,4±10,9) e o valor verificado no grupo T1 (23,4±7,8), porém no grupo T2 (21,3±9,7) o valor médio mostrou-se satisfatório em relação ao valor do grupo C. No entanto, o valor médio do grupo T3 (16,6±10,5) foi o que demonstrou resultado mais satisfatório quando comparado aos demais grupos (P<0,05). A produção de embriões foi avaliada por meio da taxa de clivagem. Não houve diferença (P >0,05) entre os valores obtidos entre o grupo C (48,9 %) e os valores verificados nos grupos T1 (51,5 %), T2 (50 %), T3 (57,7 %), nem destes entre si. Este estudo permitiu concluir que a proteína específica do oviduto recombinante e a melatonina foram eficientes em melhorar a expansão dos CCOs. Além disso, as células tratadas com pOSP mostraram-se com menor quantidade de ROS, podendo a pOSP ser considerada um antioxidante proteico.(AU)

The present study used melatonin and recombinant oviduct specific protein (pOSP) in in vitro maturation medium (IVM). The expansion of the cumulus-oocyte complexes (COCs), the intracellular concentrations of reactive oxygen species (ROS) and embryo development of the different groups were evaluated (C = control; T1 = melatonin; T2 = melatonin and pOSP and T3 = pOSP). Regarding the COCs expansion, the groups T1, T2 and T3 showed satisfactory results compared with group C (P<0.05), but there was no difference between treatments (P>0.05). In the ROS dosage, there was no difference between the mean values obtained in group C (26.4 ± 10.9) and group 1 (23.4 ± 7.8). However, in group 2 (21.3 ± 9.7), the average value was found to be satisfactory in relation group C. Despite that, the average value of treatment 3 (16.6 ± 10.5) was the most satisfactory result found compared to the other groups (P<0.05). The production of embryos was evaluated by cleavage rate, there was no difference between the values obtained in group C and the values recorded in groups T1 (51.5 %), T2 (50 %), T3 (57.7 %), and among them. This study showed that the pOSP and the melatonin were effective in the improvement of the expansion of COCs cells. In addition, the cells that were treated with pOSP presented a lower amount of ROS, allowing the pOSP to be considered a proteic antioxidant.(AU)

Efeito do soro de cadela em estro na maturação in vitro de ovócitos caninos / Effect of estrus bitch serum on in vitro maturation of canine oocyte

Avaliou-se o efeito do soro de cadela em estro na maturação in vitro de ovócitos caninos, utilizando-se 92 ovócitos de cadelas, submetidas à cirurgia eletiva de ovarioisterectomia. Os ovócitos foram selecionados e distribuídos em dois tratamentos: T1 (n = 48), ovócitos cultivados in vitro durante 96 horas utilizando meio base - TCM199 + 5µg/mL de LH + 20µg/mL de FSH - mais 10 por cento de soro inativado de vaca em estro e T2 (n = 44), ovócitos cultivados em meio base mais 10 por cento de soro inativado de cadela em estro. O percentual de ovócitos observados em metáfase I não indicou diferenças (P>0,05) entre T1 (2,1 por cento) e T2 (0,0 por cento), porém a taxa de ovócitos maduros (metáfase II) foi diferente (P<0,05), sendo 27,1 por cento em T1 e 47,7 por cento em T2. O mesmo fato ocorreu com a taxa de cromatina condensada (P<0,01), com 14,6 e 0,0 por cento, respectivamente. Nos ovócitos sem configuração cromossômica, não foram observadas diferenças (P>0,05), sendo 56,3 por cento em T1 e 52,3 por cento em T2. Estes resultados indicam que a adição de soro de cadela em estro no meio de cultivo oferece melhores condições para o desenvolvimento in vitro, quando comparado à de soro de vaca em estro.

This study aimed to evaluate the effect of estrus on in vitro canine oocyte. A total of 92 oocyte from bitches under ovary-hysterectomy surgery was used. The oocytes were selected and randomly assigned to two different treatments, being T1 (n = 48) in vitro cultured for 96h using basic medium (TCM199 + 5µg/mL of LH + 20µg/mL of FSH), plus 10 percent of cow inactive serum in estrus and T2 (n = 44) basic medium plus 10 percent of bitch inactive serum in estrus. The percentage of oocyte observed on metaphase I do not indicate a difference (P>0.05) between T1 (2.1 percent) and T2 (0.0 percent). However, the rate of mature oocyte (metaphase II) was different (P<0.05), being 27.1 percent for T1 and 47.7 percent for T2. There was difference (P<0.05) in the condensed chromatin rate for T1 (14.6 percent) and T2 (0.0 percent), respectively. There was no difference (P>0.05) between T1 (56.3 percent) and T2 (52.3 percent) in oocyte with no chromosome configuration. These results indicate that supplementation with estrus bitch serum on culture media offer better conditions to in vitro development, when compared to estrus cow serum.

Atividades antioxidante e antimicrobiana de Ziziphus joazeiro mart. (Rhamnaceae): avaliação comparativa entre cascas e folhas / Antioxidant and antimicrobial activities of Ziziphus joazeiro mart. (Rhamnaceae): comparison between bark and leaves

Os objetivos deste estudo foram determinar as atividades antioxidante e antimicrobiana de extratos de cascas e folhas de uma notável árvore da Caatinga (semi-árido brasileiro), usado em remédios populares, Ziziphus joazeiro Mart. A atividade antioxidante foi avaliada através do método de captação pelo DPPH, enquanto a atividade antimicrobiana foi avaliada pelo método de difusão em ágar seguido pela determinação da concentração inibitória mínima (CMI). Os resultados mostraram que ambos os extratos de Z. joazeiro possuem atividade antioxidante com EC50 de 461,88 e 1.743,05mg/mL para as folhas e casca, respectivamente. As amostras foram ativas contra 70% das bactérias testadas. O extrato de folhas mostrou CMI entre 0,25-0,5 mg/mL contra Micrococcus luteus e entre 0,125-0,250 mg/mL contra Mycobacterium smegmatis, enquanto o extrato da casca apresentou CMI entre 0,5-1,0 mg /ml M. smegmatis.

The objectives of this study were to determine the antioxidant and antimicrobial activities of ethanolic extracts of the bark and leaves of a notable tree of the caatinga (Brazilian semiarid scrubland) used in many popular remedies, Ziziphus joazeiro Mart. The antioxidant activity was assessed by the DPPH free-radical scavenging assay, while the antimicrobial activity, against a range of Gram positive and negative bacteria and a yeast, was determined by the agar disk diffusion method, followed by an assay of the minimum inhibitory concentration (MIC). The results showed that both extracts of Z. joazeiro have antioxidant activity, the EC50 of leaf extract being 461.88 and that of bark 1743.05 mg/mL, with respect to DPPH absorbance in a standard assay. Samples were active against 70% of the bacterial species tested. The leaf extract showed MICs of 0.25-0.5 mg/mL against Micrococcus luteus and 0.125-0.250 mg/mL against Mycobacterium smegmatis, while the bark extract showed a MIC of 0.5-1.0 mg/mL against M. smegmatis.

Desenvolvimento de embriões de camundongas após manutenção em diferentes soluções de manipulação / Development of mice embryos after maintenance in different manipulation solutions

Avaliou-se a eficácia de duas soluções de manipulação (SM) de embriões de camundongas nos estádios de blastocisto inicial (Bin), mórula compacta grau I (McI) e II (McII), distribuídos aleatoriamente em três tratamentos (T), de acordo com a solução de manutenção. No T1 usou-se PBS modificado (controle); no T2, SME e no T3, SME enriquecida. Os embriões foram mantidos durante quatro horas na solução de manutenção e posteriormente classificados quanto ao estádio de desenvolvimento e à qualidade embrionária. Logo após, foram cultivados em meio TCM 199 e classificados novamente quanto ao estádio de desenvolvimento e à qualidade embrionária. A taxa de desenvolvimento dos embriões após manutenção por quatro horas em solução de manipulação foi menor (P<0,05) nos embriões do controle, comparada à de embriões do SME e SME enriquecida, diferença esta não observada (P>0,05) após o cultivo in vitro. Os embriões McII do T3 tiveram maior desenvolvimento (P<0,05) em relação aos embriões do T1 e T2, indicando o efeito benéfico do enriquecimento da solução SME. Conclui-se que as soluções de manipulação SME e SME enriquecida influenciaram beneficamente o desenvolvimento de embriões.

The effect of embryo manipulation solution followed by in vitro culture in mice embryos was studied. The embryos at early blastocyst (Bin), and compact morula grades I (McI) and II (McII) were randomly assigned into three treatments. T1 used modified PBS (control), T2 used EMS, and T3 used EMS supplemented. In each treatment, the embryos were kept in manipulation solution for four hours. Finishing the manipulation period, the embryos were classified according the development stage and quality. Following, the embryos were cultured in TCM 199. After the culture period, the embryos were evaluated according to quality and development stage. The development rate for Bin, McI, and McII after maintenance for four hours in manipulation solution was lower for control embryo (P>0.05) as compared to EMS and EMS supplemented embryos. After in vitro culture, no differences (P>0.05) on embryo development rate among control, EMS, and EMS supplemented were observed. Moreover, McII from EMS supplemented had a higher development (P<0.05) (93 percent) as compared to control (82.5 percent) and EMS (83.9 percent), suggesting a beneficial effect of EMS supplemented. EMS and EMS supplemented embryos had a positive effect on embryo development, showing higher embryo development than those in PBS solution.

Nova técnica para contagem do número de células de blastocistos / A new technique to count the number of cells of blastocysts

A simplified, fast, and innovative method was developed to count the total cell number in blastocysts. Murine blastocysts (N = 195) were used in this study. They were obtained after 10h culture of initial blastocysts, compact morulae grades I and II recovered from superovulated mouse. After culture, the blastococysts were selected to test the new proposal of counting. The process was done after embryo fixation in a sodium citrate solution, and adherence in glass slide. Following, the coloration was done using a fast panoptic coloration kit. As a result, it was possible to identify the blastomeres and count them in each blastocyst. This method provided a fast and effective analysis of the total cell number when compared with other techniques. Moreover, this new method shows advantages related to the cell visualization, which can be done in more simple equipment like stereoscopic microscope. Other interesting observed point was the long period of time and quality that the coloration stays on slides, considering other techniques.

Energia digestível em rações para porcas primíparas em lactação / Digestible energy in the diet of primiparous lactating sows

Utilizaram-se 48 porcas primíparas, de genética PIC, com média de peso de 185,03±15,78kg, para avaliar diferentes níveis de energia digestível (3.350, 3.500, 3.650 e 3.800kcal/kg) na ração, durante a lactação (19,98±1,04 dias). Utilizou-se o delineamento experimental inteiramente casualizado, com quatro tratamentos e 12 repetições, sendo a porca considerada a unidade experimental. O consumo total de ração não variou entre os animais dos tratamentos, sendo que as porcas consumiram em média 4,0kg de ração por dia. O consumo de energia digestível aumentou de forma linear, de acordo com o nível de energia na ração. Não se observou efeito do nível de energia da ração sobre a mobilização de reserva corporal, as características reprodutivas e o nível de insulina no soro das porcas. Observou-se aumento linear do ganho de peso dos leitões em função do consumo de energia das porcas. Conclui-se que porcas primíparas em lactação exigem 3.800kcal/kg de ração, correspondente a um consumo de 14.307kcal/dia.

Angioarquitetura venosa do órgão genital da fêmea bovina / Venous angioarchitecture of the bovine female genital organ

Investigou-se a angioarquitetura venosa da genitália de fêmeas bovinas não prenhes, para avaliar a presença de possíveis anastomoses dos vasos provenientes da região da vulva e da vagina com a veia útero-ovariana, usando-se cinco peças obtidas em abatedouros. No laboratório, um ramo da veia vaginal caudal, infundido com contraste radiográfico intravascular, foi submetido à radiografia; Observou-se que a veia vaginal forma intensa rede de anastomoses na superfície ventral do útero, entre os antímeros direito e esquerdo. As genitálias apresentaram anastomoses dos vasos vulvares e vaginais com vasos da cérvice, corpo e cornos uterinos, sugerindo que parte de um agente luteolítico administrado via intravulvosubmucosa pode ser transportado diretamente aos ovários por uma rota local, sem atingir a circulação sistêmica.

Teste da libido e atividade de monta em touros da raça Nelore / Libido test and breeding activity of Nelore bulls

Estudaram-se o efeito do tempo de avaliação da libido sobre a conduta sexual de touros e a atividade de monta em diferentes proporções touro:vaca e verificaram-se as possíveis correlações entre libido, circunferência escrotal e qualidade seminal. Vinte touros foram selecionados por meio de exame andrológico e teste da libido e distribuídos segundo as proporções touro:vaca: T1= 1:25; T2= 1:50; T3= 1:75; e T4= 1:100, com cinco repetições em cada proporção. O aumento no tempo de avaliação do teste da libido de 10 para 15 minutos reduziu o percentual de touros classificados como questionáveis e com libido boa e elevou o percentual de touros com libido muito boa e excelente. O tempo de 10 minutos interferiu negativamente no desempenho sexual dos touros. Das 1250 vacas utilizadas nos quatro tratamentos, 738 (59,0 por cento) foram marcadas, sendo 624 (84,5 por cento), 112 (15,2 por cento) e duas (0,3 por cento) marcadas por um, dois e três touros, respectivamente. As correlações entre libido e qualidade seminal e circunferência escrotal foram baixas.

Vitrificação de ovócitos imaturos de bovinos utilizando etilenoglicol associado à trehalose e polivinilpirrolidona / Vitrification of immature bovine oocytes, by the ethylene glycol associated with trehalose and polivinylpyrrolidone

Avaliaram-se os efeitos da vitrificação de ovócitos imaturos de bovinos utilizando o etilenoglicol (EG) associado à trehalose e à polivinilpirrolidona (PVP). Utilizaram-se ovócitos provenientes de ovários de vacas abatidas em matadouro, distribuídos aleatoriamente em três tratamentos (T). TI - ovócitos não desnudados e não congelados, TII - ovócitos vitrificados com cumulus oophorus e TIII - ovócitos desnudados vitrificados. A percentagem de ovócitos recuperados e ovócitos com morfologia normal após a vitrificação foi diferente entre TII e TIII (92,2 e 72,6 por cento; 79,0 e 63,6 por cento, respectivamente). Os ovócitos normais foram cultivados à 38,5ºC em atmosfera de 5 por cento de CO2 por 24 horas. Após o cultivo, os ovócitos foram fecundados e os embriões cultivados in vitro por sete dias. Foram encontradas diferenças entre tratamentos quanto às taxas de maturação nuclear, fecundação e clivagem (83,9, 70,0 e 44,0 por cento; 17,5, 23,7 e 5,1 por cento; 0,0, 0,0 e 0,0 por cento para os tratamentos I, II e III, respectivamente). Apenas no TI foram obtidas mórulas e blastocistos (21,4 por cento). Os procedimentos de vitrificação, segundo os protocolos utilizados, não são indicados para a criopreservação de ovócitos imaturos de bovinos.

Qualidade espermática do sêmen criopreservado de cäes. I - Efeito do meio diluidor / Spermatozoa quality of cryopreserved canine semen. I - Use of extenders

Estudou-se o efeito de dois meios diluidores, Tris-citrato-gema de ovo e Tes-Tris, sobre a qualidade espermática in vitro após criopreservaçäo do sêmen de cäes. Utilizaram-se três machos e realizaram-se cinco coletas em cada um deles. Foram avaliadas a motilidade, o vigor espermático, a integridade da membrana plasmática (teste hiposmótico), a integridade do acrossoma e a longevidade espermática (teste de termo-resistência). O meio diluidor Tris-citrato-gema de ovo foi superior (P<0,05) ao meio Tes-Tris por ter apresentado valores em torno de 15 por cento mais altos após a congelaçäo/descongelaçäo do sêmen nos testes de termo-resistência e hiposmótico e nas avaliaçöes da integridade do acrossoma, da motilidade e do vigor espermático

Qualidade espermática do sêmen criopreservado de cäes. II - Efeito do protocolo de resfriamento / Spermatozoa quality of cryopreserved canine semen. II - Effect of cooling procedures

Estudou-se o efeito de dois protocolos de resfriamento do sêmen de cäes sobre a qualidade espermática in vitro, após sua criopresevaçäo. Utilizaram-se três machos e realizaram-se cinco coletas em cada um deles. Os procedimentos de resfriamento foram realizados em um congelador de células (biocool) e em caixa de isopor. Foram avaliadas a motilidade, o vigor espermático, a integridade da membrana plasmática (teste hiposmótico), a integridade do acrossoma e a longevidade espermática (teste de termo-resistência). A comparaçäo entre os protocolos de resfriamento mostrou que näo houve diferença (P>0,05) entre a caixa de isopor e o biocool logo após o resfriamento. Após a descongelaçäo os resultados foram semelhantes entre os protocolos, observando-se diferença (P<0,05) apenas na motilidade espermática e no teste de termo-resistência (TTR), os quais foram superiores na caixa de isopor

Fecundaçäo in vitro com sêmen de bovinos da raça Gir / In vitro fertilization with bovine semen in Gyr breed

Estudaram-se os efeitos da concentraçäo espermática e do tempo de incubaçäo do sêmen com ovócitos, durante a fecundaçäo in vitro, sobre as taxas de penetraçäo espermática, de fecundaçäo monoespermática e de clivagem, utilizando-se sêmen de touros da raça Gir. Ovócitos (n=817) maturados in vitro foram distribuídos em tratamentos visando à fecundaçäo in vitro (FIV), em um delineamento fatorial 2x2x2, com duas concentraçöes espermáticas (2 e 4 x 10 elevada a sexta potência espermatozóides/ml), dois períodos de incubaçäo (l2 e l8h) e dois touros (A e B). Espermatozóides viáveis foram obtidos pela técnica de swin-up. A FIV foi realizada em meio fert-talp com heparina, em incubadora com 5 por cento de CO2 em ar atmosférico e 95 por cento de umidade, a 39§C. Após inseminaçäo, 359 ovócitos foram fixados e corados para determinaçäo das taxas de penetraçäo e poliespermia. O restante foi co-cultivado com células da tuba uterina e TCM-199 por 72h, avaliando-se a clivagem. As taxas de penetraçäo, fecundaçäo monoespermática e clivagem näo foram influenciadas (P>0,05) pela concentraçäo espermática e pelo período de incubaçäo. O touro B produziu maiores taxas (P<0,05) de penetraçäo e de clivagem (83,3 e 81,0 por cento, respectivamente) do que o touro A (66,5 e 64,0 por cento). Houve tendência do touro B apresentar maior taxa de polispermia (P=0,067) do que o touro A (l6,4 e 6,2 por cento, respectivamente). As interaçöes entre tratamentos näo foram significativas (P>0,05). O efeito touro sobre a capacidade de fecundaçäo dos espermatozóides deve ser considerado quando da fecundaçäo in vitro

Taxa de gestaçäo e morfologia de embriöes bovinos da raça Nelore resfriados por 24 horas a 5§C em contêiner modelo Celle modificado / Morphological aspects and pregnancy rate of Nelore cow embryos, cooling in a modified Celle Container during 24 hours at 5§C

Na tentativa de se estabelecerem condiçöes de estocagem de embriöes bovinos da raça Nelore, resfriaram-se 29 embriöes em um contêiner modelo Celle modificado, por 24 horas a 5§C. Os embriöes foram avaliados, classificados quanto ao estádio de desenvolvimento e qualidade embrionária, antes e após o resfriamento, e transferidos a receptoras sincronizadas à base de prostaglandina e progestágeno. Dos embriöes resfriados, 82,8 por cento (24/29) eram grau I, 13,6 por cento (3/29) grau II e 6,9 por cento (2/29) grau III. Após 24 horas de resfriamento, 62,1 por cento (18/29) dos embriöes continuaram grau I, 20,7 por cento (6/29) grau II e 17,2 por cento (5/29) grau III. Durante o resfriamento, todos os embriöes permaneceram no mesmo estágio de desenvolvimento. Porém, dos embriöes na fase de blastocisto inicial a blastocisto expandido, 82,8 por cento (24/29) apresentaram colapso da blastocele. Após a transferência, obtiveram-se 37,9 por cento (11/29) de gestaçäo positiva, inferior (P<0,05) àquela apresentada pelo grupo-controle, de 75,6 por cento (62/82). Possivelmente, o método de sincronizaçäo influenciou os resultados, obtendo-se apenas uma gestaçäo positiva das 11 receptoras que receberam progestágenos

Cultivo in vitro de ovócitos bovinos em diferentes sistemas: I- efeito na maturaçäo nuclear / In vitro cultivation of bovine oocytes under different conditions: I-Effect on nuclear maturation

Foram utilizados ovócitos com o cumulus compacto, distribuídos em três tratamentos: I - meio de cultivo constituído de meio de cultura de tecido (TCM) acrescido de FSH (20µg/ml) e soro inativado de vaca em estro (10 por cento); II - meio de cultivo acrescido de células da granulosa em suspensäo (2 x 10 elevado a sexta potência/ml); III - monocamada de células da granulosa em meio de cultivo. As formas foram obtidas em zero, 12, 18, 24 e 30 horas de cultivo in vitro, para exame da configuraçäo cromossômica. Foram utilizados 1251 ovócitos com os seguintes resultados de maturaçäo nuclear, para os tratamentos I, II e III, respectivamente: 12 horas de cultivo, 1 (1,08 por cento), 1 (1,08 por cento) e 2 (2,17 por cento); 18 horas, 70 (76,92 por cento), 50 (56,82 por cento) e 46 (54,12 por cento); 24 horas, 93 (89,42 por cento), 81 (93,10 por cento) e 71 (85,54 por cento); 30 horas, 77 (89,53 por cento), 78 (91,76 por cento) e 63 (90,00 por cento). Os resultados foram elevados e significativos (P<0,01) na taxa de maturaçäo com 18 horas de cultivo, para os ovócitos cultivados segundo o tratamento I. Eles sugerem a fecundaçäo in vitro após 18 horas de cultivo, no caso da maturaçäo em meio sem células da granulosa, diferenciando do tempo usualmente utilizado de 24 horas, quando se utiliza o co-cultivo com células da granulosa

Cultivo in vitro de ovócitos bovinos em diferentes sistemas: II - aspectos ultra-estruturais / In vitro cultivation of bovine oocytes, under different conditions: II - ultrastructural aspects

Para avaliar o efeito de sistemas de cultivo in vitro na ultra-estrutura celular, foram cultivados ovócitos com o cumulus compacto distribuídos em três tratamentos: I - meio de cultivo constituído de meio de cultura de tecido (TCM) acrescido de FSH (20µg/ml) e soro inativado de vaca em estro (10 por cento); II - meio de cultivo acrescido de células da granulosa em suspensäo (2 x 10 elevado a sexta potência/ml); III - monocamada de células da granulosa em meio de cultivo. As amostras foram obtidas em zero, 12, 18, 24 e 30 horas de cultivo e submetidas aos procedimentos para a análise ultra-estrutural. As características verificadas nos ovócitos foram caracterizadas em cinco configuraçöes (C1 a C5), levando em consideraçäo vários estádios de maturaçäo. Para esta classificaçäo foram consideradas as modificaçöes ultra-estruturais no interior do ovócito, sendo C1 um ovócito sem alteraçäo indicativa de reativaçäo da meiose, C2, C3 e C4 estádios intermediários e C5 um ovócito maduro caracterizado principalmente pela configuraçäo cromossômica em metáfase II e pela distribuiçäo dos grânulos corticais em posiçöes solitárias nas proximidades da membrana citoplasmática. Foram verificados os seguintes resultados, para os tratamentos I, II e III, respectivamente: zero hora (C1 e C2, C1 e C2, C1 e C2), 12 horas (C4, C3 e C3), 18 horas (C5, C4 e C4), 24 horas (C5, C5 e C5) e 30 horas (C5, C5 e C5). No cultivo sem células da granulosa, as características que configuram um ovócito maduro sob aspecto ultra-estrutural já ocorrem com 18 horas de cultivo

Cultivo in vitro de ovócitos bovinos em diferentes sistemas: III - capacidade de desenvolvimento após a fecundaçäo / In vitro cultivation of bovine oocytes under different conditions: III - development after fecundation

Para avaliar o efeito de sistemas de maturaçäo in vitro, na capacidade de desenvolvimento após a fecundaçäo, foram cultivados ovócitos com o cumulus compacto, distribuídos em três tratamentos: I - meio de cultivo constituído de meio de cultura de tecido (TCM) acrescido de FSH (20µg/ml) e soro inativado de vaca em estro (10 por cento); II - meio de cultivo acrescido de células da granulosa em suspensäo (2 x 10 elevado a sexta potência/ml); III - monocamada de células da granulosa em meio de cultivo. Após 18 horas de maturaçäo no tratamento I e 24 horas nos tratamentos II e III, os ovócitos foram fecundados in vitro, com sêmen congelado. Dezoito horas após o início da inseminaçäo, os zigotos foram cultivados in vitro por sete dias, em monocamada de células da tuba uterina. No sétimo dia, uma amostragem de zigotos foi submetida à hipotonizaçäo e coloraçäo, para avaliar o número de células. Os resultados da taxa de fecundaçäo, da clivagem e do número de células foram 92,96, 59,86 e 87,16; 85,39, 61,43 e 104,00; 79,37, 60,00 e 131,16, para ovócitos maturados pelos tratamentos I, II, III, respectivamente. A análise pelo qui quadrado da taxa de fecundaçäo e de clivados e a análise de variância do número de células näo apresentaram diferenças (P>0,05) entre tratamentos. Os resultados demonstram que näo há diferenças na taxa de fecundaçäo e capacidade de desenvolvimento dos ovócitos, quando a fecundaçäo é realizada com 18 horas no caso de maturaçäo sem células e com 24 horas quando a maturaçäo é realizada em co-cultivo de células da granulosa

Tipos morfológicos de ovócitos bovinos / Morphological types of bovine oocytes

Foram utilizados ovários de vacas abatidas em matadouro para estudar o tipo de envoltório celular em 14.583 ovócitos. Após aspiraçäo dos folículos, os complexos "cumulus-ovócitos" foram lavados e classificados da seguinte maneira: 1-corona radiata intacta e mais de três camadas compactas de células do cumulus oophorus; 2-uma a três camadas de células envolvendo o ovócito; 3-parcialmente recoberto por células da corona radiata e o cumulus oophorus; 4-células do cumulus oophorus apresentando expansäo; 5-desnudo; 6-ovócitos apresentando características que näo configuram em nenhuma classificaçäo anteriormente citada. As freqüências encontradas foram 69,3; 7,8; 6,7; 11,1; 4,7 e 0,3 por cento, para as categorias 1, 2, 3, 4, 5 e 6 respectivamente. Ficou caracterizada a importância de estudos de maturaçäo e fecundaçäo in vitro, com ovócitos apresentando o cumulus compacto, devido à sua elevada incidência em ovários de vacas