Porcine uterine and placental extracellular matrix molecules throughout pregnancy / Moléculas de la matríz extracelular placentaria y uterina durante la preñez porcina

The molecules that constitute the extracellular matrix are important in several functions related to tissue support and cell-cell, cell-extracellular matrix interaction. Among the macromolecules that constitute the mentioned matrix we find osteopontin, fibrinogen and collagen. The present study was undertaken to analyze the rol of osteopontin, fibrinogen and collagen in uterine-placental interface during normal porcine gestation. Uterine and placental tissues from crossbred gilts of 30 (n=5), 60 (n=5), 70 (n=5) and 114 (at term, n=5) days of gestation were used. Macroscopic analysis of the embryos/fetuses allowed us to determine their gestational age by means of the crown-rump lenght. Haematoxylin-Eosin and Masson's Trichrome dyes along with light microscopy were used to structure analysis of every selected period of gestation. A spacial and temporal study of osteopontin and fibrinogen was performed through immunohistochemical technique. Determination of collagen fibers was carried out through Picrosirius red technique and polarizing microscopy. Results were expressed as semi-quantitative. Higher expression of osteopontin was observed at early periods of gestation, mainly in uterine and placental villi, endometrial gland epithelium and histotroph. Fibrinogen expressed abundantly in fetal mesenchyme in every period analyzed and in fetal and maternal vessels at Day 70. Negative expression of collagen fibers was observed in villi, however increasing expression of thick fibers throughout pregnancy was detected in uterine stroma and myometrium. These results confirm the importance of osteopontin, fibrinogen and collagen in the support of uterine and placental structures and in the suitable maintenance of pregnancy.

Las moléculas que constituyen la matriz extracelular son importantes en varias funciones relacionadas con el soporte del tejido y la interacción célula-célula, célula-matriz extracelular. Entre las macromoléculas que constituyen la matriz mencionada se encuentra la osteopontina, el fibrinógeno y el colágeno. Este estudio se realizó para analizar el rol de la osteopontina, el fibrinógeno y el colágeno en la interface útero-placentaria durante la gestación porcina normal. Tejidos uterinos y la placentarios de hembras porcinas cruzadas de 30 (n=5), 60 (n=5), 70 (n=5) y 114 (a término, n=5) días de gestación fueron utilizados. El análisis macroscópico de los embriones/fetos nos permitió determinar la edad gestacional por medio de la longitud cráneo-rabadilla. Tinciones de Hematoxilina-Eosina y Tricrómico de Masson con microscopía de luz se utilizó para estructurar el análisis de cada periodo de tiempo seleccionado de la gestación. Un estudio espacial y temporal de la osteopontina y el fibrinógeno se realizó mediante técnicas de inmunohistoquímica. La determinación de fibras colágenas se llevó a cabo a través de la técnica Picrosirius rojo por microscopia de polarización. Los resultados se expresaron como semi-cuantitativos. La expresión de osteopontina se observó en los primeros períodos de gestación, principalmente en las vellosidades del útero y la placenta, epitelio de las glándulas endometriales e histotrofos. El fibrinógeno se expresa abundantemente en mesénquima fetal en todos los períodos analizados y en los vasos fetales y maternos el día 70. Una expresión negativa de fibras colágenas se observó en las vellosidades, sin embargo, un aumento de expresión de las fibras gruesas durante la gestación se detectó en el estroma uterino y el miometrio. Estos resultados confirman la importancia de la osteopontina, fibrinógeno y colágeno en el soporte de las estructuras del útero y placenta, así como el mantenimiento adecuado durante la gestación.

Expression of death cellular receptors FAS/CD95 and DR4 during porcine placentation / Expresión de los receptores de muerte celular FAS/CD95 y DR4 durante la placentación porcina

Apoptosis is a permanent and dynamic physiological process by which an organism eliminates the undesirable cells without causing an inflammatory response. The objective of this work was to study the expression of FAS, DR4 and other members of the TNF-R1 superfamily extrinsic route apoptotic receptors the DNA fragmentation and the cellular apoptosis in placental samples at the early, mid and late pregnancy on +/- 30, +/- 55 and +/- 114 gestational days, respectively. We used placental histological sections of samples fixed in buffered saline formaldehyde. Immunohistochemical techniques were performed to detect the apoptotic receptors, whereas the DNA fragmentation was detected by TUNEL reaction and apoptotic cellular ultrastructure was detected by TEM conventional techniques. Apoptosis related receptors were immunolocalized in the early pig gestation and correlated with apoptosis, suggesting a role in the cellular remodelling of the placenta. At gestation day 55, apoptosis might be correlated to FAS route, but not by DR4-mediating pathway. At the end of gestation, increased apoptosis and both receptors markers were detected showing cellular death due to the extrinsic route through FAS and DR4 receptors. In conclusion, the immunolocalization of FAS and TNF R-1 receptors along the pig placental development correlates with TUNEL reaction and with apoptotic ultrastructure observed by TEM and seems to occur through different pathways along gestation.

La apoptosis es un proceso fisiológico, dinámico y permanente a través del cual un organismo elimina células indeseables sin provocar una respuesta inflamatoria. El objetivo del presente trabajo fue estudiar la expresión de los receptores de la vía extrínseca de apoptosis, FAS, DR4 y otros miembros de la superfamilia TNF-R1, la fragmentación del ADN y la apoptosis celular a través de TEM, en muestras placentarias del inicio, la mitad y el final de la gestación, hacia el día +/- 30, +/- 55 y +/- 114 de preñez, respectivamente. Se realizaron cortes histológicos de las muestras placentarias fijadas en formol tamponado. Para la detección de los receptores de apoptosis se realizaron técnicas inmunohistoquímicas, para el estudio de la fragmentación del ADN se utilizó el ensayo TUNEL y para el análisis de la ultraestructura celular apoptótica la técnica convencional de TEM. La inmunolocalización de los receptores de muerte celular al inicio de la preñez porcina sugiere el rol de la apoptosis en la remodelación celular placentaria. Hacia el día 55 de preñez, la apoptosis detectada ocurriría únicamente a través de la vía del receptor FAS, no del receptor DR4. Al final de la gestación, se detectó un incremento de la apoptosis y la expresión de ambos receptores, indicando que la muerte celular a través de la vía de señalización extrínseca estaría inducida por los receptores FAS y DR4. En conclusión, la inmunolocalización de los receptores FAS y otros miembros del TNF-R1, los resultados de TUNEL y la ultraestructura celular apoptótica observada en la placentación porcina, indican que la apoptosis detectada ocurre por diferentes vías de inducción a lo largo de la gestación.