Occurrence and diversity of ciliated protozoa in the most commonly consumed leafy greens in Brazil: a qualitative study / Ocorrência e diversidade de protozoários ciliados nos vegetais folhosos mais consumidos no Brasil: um estudo qualitativo

Ciliated protozoa are an ubiquitous group of eukaryotes that have been poorly reported on leafy greens. The present study aimed to verify the occurrence and diversity of ciliated protozoa in the leaves and roots of three of the most commonly consumed leafy greens in Brazil – lettuce, rocket and coriander. The vegetable samples were washed by manual agitation (3 minutes) in two different media (mineral water and Page ́s Amoeba Saline solution). After washing, the contents were incubated in Petri dishes and aliquots were removed for microscopic identification and in vivo observation. A total of 21 ciliated protozoa species were found, most of which were bacterivorous. Leafy greens have commonly been associated with foodborne outbreaks and ciliated protozoa, which although they are not a Public Health concern, can act as “Trojan Horses” harboring bacteria, viruses and other protozoa cysts and oocysts and can suggest a new route towards microbiological quality related to the food chain. This is the first report of ciliated protozoa on leafy greens consumed in Brazil.

Os protozoários ciliados constituem um grupo onipresente de eucariotos pouco relatados em vegetais folhosos. O presente estudo teve como objetivo verificar a ocorrência e a diversidade de protozoários ciliados nas folhas e raízes de três dos vegetais folhosos mais consumidos no Brasil - alface, rúcula e coentro. As amostras de vegetais foram lavadas por agitação manual (3 minutos) em dois meios diferentes (água mineral e Solução Salina para Ameba). Após a lavagem, o conteúdo foi incubado em placas de Petri e alíquotas foram retiradas para identificação microscópica e observação in vivo dos organismos. Um total de 21 espécies de protozoários ciliados foi encontrado, a maioria das quais era bacterívora. Tais hortaliças têm sido comumente associadas a surtos transmitidos por alimentos e os protozoários ciliados que, embora não sejam um problema de saúde pública, podem atuar como “Cavalos de Tróia” ao abrigar bactérias, vírus além de cistos e oocistos de protozoários o que pode sugerir uma nova rota para a avaliação da qualidade microbiológica relacionada à cadeia alimentar. Este é o primeiro relato de protozoários ciliados em folhas verdes consumidas no Brasil.

Occurrence and diversity of ciliated protozoa in the most commonly consumed leafy greens in Brazil: a qualitative study

Ciliated protozoa are an ubiquitous group of eukaryotes that have been poorly reported on leafy greens. The present study aimed to verify the occurrence and diversity of ciliated protozoa in the leaves and roots of three of the most commonly consumed leafy greens in Brazil ­ lettuce, rocket and coriander. The vegetable samples were washed by manual agitation (3 minutes) in two different media (mineral water and Page ́s Amoeba Saline solution). After washing, the contents were incubated in Petri dishes and aliquots were removed for microscopic identification and in vivo observation. A total of 21 ciliated protozoa species were found, most of which were bacterivorous. Leafy greens have commonly been associated with foodborne outbreaks and ciliated protozoa, which although they are not a Public Health concern, can act as "Trojan Horses" harboring bacteria, viruses and other protozoa cysts and oocysts and can suggest a new route towards microbiological quality related to the food chain. This is the first report of ciliated protozoa on leafy greens consumed in Brazil. (AU)

Os protozoários ciliados constituem um grupo onipresente de eucariotos pouco relatados em vegetais folhosos. O presente estudo teve como objetivo verificar a ocorrência e a diversidade de protozoários ciliados nas folhas e raízes de três dos vegetais folhosos mais consumidos no Brasil - alface, rúcula e coentro. As amostras de vegetais foram lavadas por agitação manual (3 minutos) em dois meios diferentes (água mineral e Solução Salina para Ameba). Após a lavagem, o conteúdo foi incubado em placas de Petri e alíquotas foram retiradas para identificação microscópica e observação in vivo dos organismos. Um total de 21 espécies de protozoários ciliados foi encontrado, a maioria das quais era bacterívora. Tais hortaliças têm sido comumente associadas a surtos transmitidos por alimentos e os protozoários ciliados que, embora não sejam um problema de saúde pública, podem atuar como "Cavalos de Tróia" ao abrigar bactérias, vírus além de cistos e oocistos de protozoários o que pode sugerir uma nova rota para a avaliação da qualidade microbiológica relacionada à cadeia alimentar. Este é o primeiro relato de protozoários ciliados em folhas verdes consumidas no Brasil. (AU)

Enterocytozoon bieneusi detected by molecular methods in raw sewage and treated effluent from a combined system in Brazil

BACKGROUND Enterocytozoon bieneusi are the most common microsporidia associated with different clinical manifestations such as diarrhoea, respiratory tract inflammation and acalculous cholecystitis, especially in immunocompromised patients. Infection usually occurs by ingestion of food and water contaminated with spores, but can also result from direct contact with spores through broken skin, eye lesions, and sexual transmission, depending on the microsporidian species. Although there are reports of E. bieneusi found in humans and animals in Brazil, there are no published studies of environmental samples examined by molecular methods. OBJECTIVES The purpose of this study was to verify the presence of E. bieneusi in raw sewage and treated effluent from a combined system by molecular methods. METHODS Raw sewage and treated effluent samples collected from a combined system were analysed for the presence of E. bieneusi using the internal transcriber spacer (ITS) region of E. bieneusi by nested polymerase chain reaction. FINDINGS The analysis revealed E. bieneusi presence and a novel genotype (EbRB) in one raw sewage sample and one treated effluent. MAIN CONCLUSIONS The presence of E. bieneusi in final effluent indicates that the combined system may not remove microsporidian spores. This study is the first report of E. bieneusi in environmental samples in Brazil.

Avaliação da performance de metodologias de detecção de Cryptosporidium spp. e Giardia spp. em água destinada ao consumo humano, para o atendimento às demandas da Vigilância em Saúde Ambiental no Brasil / Performance evaluation of different methodologies for detection of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. in water for human consumption to meet the demands of the Environmental Health Surveillance in Brazil

Objetivo: avaliar a performance de três protocolos de concentração de cistos e oocistos em amostras de água bruta de rios brasileiros. Métodos: os protocolos estudados foram precipitação química, filtração em membranas de 47mm de diâmetro e 3μm de porosidade nominal e filtração com o sistema Filta-Max®. Amostras de água bruta coletadas de rios nos estados de São Paulo e Minas Gerais foram analisadas após contaminação artificial. Os resultados de precisão inicial e recuperação de organismos marcados (Color-Seed®) foram comparados com os critérios da Agencia de Proteção Ambiental dos Estados Unidos da Améri¬ca (USEPA). Resultados: Nos ensaios de precisão inicial para cistos de Giardia, a filtração em membranas e com Filta-Max® atingiram os critérios da USEPA para recuperação de cistos. Para Cryptosporidium, somente o procedimento com Filta-Max® alcançou os critérios. Conclusão: o sistema Filta-Max® foi o único método que atingiu todos os critérios para identificação de Cryptosporidium e Giardia em água.

Objective: this study aimed to evaluate three different concentration protocols of cysts and oocysts in raw water samples in Brazilian rivers. Methods: the protocols studied were chemical precipitation, filtration in membranes of 47mm of diameter versus nominal porosity of 3µm and filtration using Filta-Max® system. The raw water samples collectedfrom rivers in the states of São Paulo andMinas Gerais were analyzed after being seeded with Color-Seed®. The results of initial precision using filtration in membranes and recovery of Color-Seed® organisms were compared to the acceptance criteria established by the United States Environmental Protection Agency (USEPA). Results: The study of initial precision to Giardia using filtration in membranes and recovery of Color-Seed® met the USEPA criteria; for Cryptosporidium only the Filta-Max® achieved the established criteria. Conclusion: Filta-Max® system showed to be the only method that achieved all the performance criteria for identification of Giardia and Cryptosporidium in water.

Sobrevivência e infectividade do Trypanosoma cruzi na polpa de açaí: estudo in vitro e in vivo / Survival and infectivity of Trypanosoma cruzi in açaí pulp: in vitro and in vivo study

Objetivo: estudar a sobrevivência e a infectividade de Trypanosoma cruzi na polpa de açaí. Métodos: foram realizados experimentos in vitro e in vivo. Alíquotas de polpa provenientes da cidade de Belém (capital do estado do Pará, região Norte do Brasil) foram misturadas a 105 tripomastigotas e mantidas às temperaturas ambiente, 4°C e -20°C, com diferentes períodos de incubação; posteriormente, os parasitos foram isolados e inoculados em camundongos imunodeficientes C.B-17-Prkdcscid/PasUnib pelas vias intraperitoneal, oral ou gavagem. Resultados: todas as vias foram eficientes. Houve retardo de 5 dias no início da parasitemia na infecção oral. À temperatura ambiente por 48 horas, a polpa preservou a virulência do parasito. Refrigeração a 4°C por 144 horas e congelamento a -20°C por 26 horas não eliminaram o parasito. Conclusão: os testes sugerem a possibilidade de os surtos de doença de Chagas aguda no Norte do Brasil estarem relacionados ao consumo de polpa de açaí.

Objective: to evaluate infectivity by Trypanosoma cruzi and its survival in açaí pulp. Methods: experiments were performed in vitro and in vivo; aliquots of pulp from Belém City (capital of the state of Pará, Northern Region of Brazil) were mixed with 105 trypomastigotes, and maintained at room temperature, and at temperatures of 4°C and -20 °C, within different incubation periods; following that, the parasites were isolated and inoculated into immunodeficient mice CB-17-Prkdcscid/PasUnib, by intraperitoneal, oral, orgavage routes. Results: all routes showed effectiveness. There was a delay of 5 days in the beginning of the parasitemia by oral infection; the pulp at room temperature for 48h kept the parasite virulence preserved. Keeping the samples cooled at 4ºC during 144h and the freezing at -20°C for 26h did not kill the parasite. Conclusion: tests suggest that açaí pulp consumption may be related to outbreaks of acute Chagas' disease in Northern Brazil.

Parasitologia ambiental: métodos de concentração e detecção de Cryptosporidium spp. e Giardia spp. em amostras de água / Environmental parasitology: methods of concentration and detection of Cryptosporidium spp. and Giardia spp. in water samples

A transmissão de protozoários patogênicos pela água é um dos mais relevantes problemas de saúde pública na atualidade. Numerosos surtos epidêmicos causados pelos protozoários Giardia e Cryptosporidium ocorreram ao redor do mundo em passado recente. Entretanto, os métodos utilizados para a detecção de cistos e oocistos em amostras de água são influenciados porcaracterísticas físico-químicas da matriz de água, como a turbidez. Esta revisão apresenta uma análise crítica das diferentes metodologias de concentração de cistos de Giardia e de oocistos de Cryptosporidium em amostras de águas destinadas ao consumo humano. A implantação domonitoramento desses protozoários é uma necessidade no Brasil dada a recente revisão da Portarianúmero 518 do Ministério da Saúde.

Detecção de oocistos de Cryptosporidium spp. e cistos de Giardia spp. em amostras de esgoto bruto ou tratado: avaliação crítica dos métodos / Detection of Cryptosporidium spp. oocysts and Giardia spp. cysts in raw and effluent wastewater: critical evaluation of methods

Neste trabalho, avaliou-se a eficiência dos métodos centrífugo-concentração e filtração em membrana, na detecção de oocistos de Cryptosporidium spp. e cistos de Giardia spp. em amostras de esgoto bruto e tratado, provenientes de um sistema de lodos ativados (estação de tratamento de esgoto, Samambaia, Campinas, em São Paulo). As amostras foram coletadas quinzenalmente por dois anos: 53 amostras de esgoto bruto (AFL), 53 de efluente tratado sem desinfecção por luz ultravioleta (EFL) e 38 de efluente tratado e desinfetado por luz ultravioleta (EFL+UV). Cistos de Giardia spp. foram encontrados em 90,5 por cento das amostras AFL; em 96,2 por cento, de EFL; e em 94,7 por cento, de EFL+UV. Oocistos de Cryptosporidium spp. foram detectados em 6,4 por cento das amostras AFL e em 2,6 por cento de EFL+UV. Ambos os métodos mostraram-se eficientes na detecção destes protozoários em todos os tipos de amostras, além de apresentarem baixo custo por análise.

In this study, the efficiency of centrifuge-concentration and membrane filtrated methods was evaluated in the detection of Cryptosporidium spp. oocysts and Giardia spp. cysts in raw or treated wastewater samples, from activated sludge systems (ETE - Samambaia, Campinas, in São Paulo). The samples were collected once a fortnight for two years: 53 samples of influent (AFL), 53 samples of treated effluent without ultraviolet disinfection (EFL), and 38 samples of treated effluent with ultraviolet disinfection (EFL+UV). Giardia spp. cysts were found in 90.5 percent of the AFL samples; in 96.2 percent of the samples, EFL; and in 94.7 percent, EFL+UV. Cryptosporidium spp. oocysts were detected in 6.4 percent of AFL samples and 2.6 percent of EFL+UV. Both methods showed efficiency when detecting protozoa in all types of samples, besides having low costs by analysis.

Moluscos bivalves destinados ao consumo humano como vetores de protozoários patogênicos: metodologias de detecção e normas de controle / Bivalve molluscs destined for human consumption as vectors of pathogenic protozoa: detection methodologies and control rules

As áreas costeiras e marinhas albergam uma larga variedade de espécies animais que servem como fonte de alimento para toda a humanidade. Dentre todas estas espécies, os moluscos bivalves marinhos têm atraído a atenção mundial, não somente devido ao crescente aumento de sua produção e consumo nas últimas décadas, mas especialmente porque eles podem atuar como indicadores biológicos de poluição fecal de seres humanos e animais nos locais onde estes são cultivados ou coletados para o consumo humano. Ademais, são capazes de filtrar grandes volumes de água por dia e, se patógenos humanos de veiculação hídrica, como Cryptosporidium e Giardia, estiverem presentes nos arredores das áreas onde os moluscos vivem, estes ou outros patógenos podem ficar acumulados e concentrados, especialmente no intestino, brânquias ou na hemolinfa dos animais. Muitos surtos associados ao consumo de moluscos bivalves têm sido reportados no mundo todo, especialmente relacionados com a ingestão de alimentos crus, como as ostras, mas, até os dias de hoje, não existem relatos de surtos de protozoários patogênicos associados ao consumo de moluscos bivalves. Entretanto, é notável que a ingestão de mariscos pode representar uma ameaça e um risco de aquisição de doenças emergentes para populações imunocomprometidas ou imunocompetentes. No Brasil, a população não está ciente dos riscos potenciais de aquisição de infecções parasitárias associados à ingestão de bivalves, principalmente aqueles ingeridos crus. Esta revisão elucida diversos aspectos sobre a ocorrência natural de protozoários patogênicos em moluscos bivalves reportada em muitos países e inclusive no Brasil. Além disso, enfatiza as principais metodologias e técnicas disponíveis para a sua detecção, as normas de controle e a legislação brasileira vigente para o cultivo, produção e consumo de moluscos bivalves em nosso país.

Investigação parasitológica conduzida em trabalhadores de uma estação de tratamento de esgoto de Jundiaí - SP / Parasitological inquiry conducted in sewer workers at a sewage treatment plant in Jundiaí - SP

Protozoários patogênicos e helmintos requerem baixas doses infectantes, o que representa um risco para os trabalhadores que trabalham diretamente com esgoto em Estações de Tratamento de Esgoto (ETE). O objetivo deste estudo foi verificar a presença de cistos e oocistos de protozoários, ovos e larvas de helmintos em fezes de trabalhadores de uma ETE que trabalham direta e indiretamente com esgoto, ou seja, os que têm contato com esgoto (técnicos de laboratório e operadores de máquinas) e as pessoas que atuam na área administrativa da ETE. Dos 40 indivíduos que forneceram material para os exames, somente três apresentaram resultado positivo (7,30%). A prevalência de Ascaris lumbricoides foi de 2,50% e 4,87% para larva rabditóide de Strongyloides stercoralis.

Occurrence of Giardia cysts and Cryptosporidium oocysts in activated sludge samples in Campinas, SP, Brazil

Giardia e Cryptosporidium causaram vários surtos epidêmicos de gastroenterite, associados à água potável. Efluentes de esgoto contaminados foram incriminados como uma fonte potencial de cistos e oocistos. Uma investigação foi conduzida para verificar a presença de cistos de Giardia e oocistos de Cryptosporidium em amostras de lodo ativado de uma Estação de Tratamento de Esgoto. Para isto as amostras foram submetidas: i) a concentração pelo processo de clarificação com éter (ECP) e ii) método de purificação por flutuação em sacarose (SFM) e, as alíquotas dos sedimentos foram examinadas por imunofluorescência. Cistos de Giardia estiveram presentes em todas as amostras avaliadas (100,0%; n = 8) quando utilizado ECP e kit 1, enquanto o kit 2 resultou em 6 amostras positivas (85,7%; n = 7). Para SFM, cistos de Giardia foram detectados em 75,0% e 100,0% destas amostras (para kit 1 e 2 respectivamente). Considerando os oocistos de Cryptosporidium, duas amostras (25,0%; kit 1 e 28,5% kit 2) foram positivas usando-se ECP enquanto para SFM, apenas uma amostra (examinada pelo kit 1) foi positiva (12,5%). Os resultados do experimento-controle revelaram que as taxas de recuperação para Giardia e Cryptosporidium, quando utilizado ECP foi de 54,5% e 9,6% e para SFM, foi de 10,5% e 3,2%, respectivamente. Considerando a detecção de alta concentração desses protozoários, é recomendada a avaliação prévia do lodo ativado antes de sua aplicação na agricultura e, com alguma melhora, ECP pode ser uma técnica apropriada e simples para a detecção de protozoários em amostras de esgoto.

Ocorrência de oocistos de Cryptosporidium spp. E cistos de Giárdia spp. em diferentes pontos do processo de tratamento de água, em Campinas, São Paulo, Brasil / Occurrence of oocistos of Cryptosporidium spp. And cistos of Giárdia spp. in peculiar points of the water treatment, in Campinas, São Paulo, Brazil

Os protozoários Cryptosporidium spp. e Giárdia spp. são parasitos intestinais que podem ser transmitidos pela água. São responsáveis pela ocorrência de vários surtos de diarréia, em diversos países, sendo que oocistos e cistos exibem acentuada resistência às condições ambientais e aos processos de tratamento da água, apresentando grande relevância em Saúde pública. Considerando que estes protozoários já foram detectados em amostras de água bruta do rio Atibaia, o presente estudo investigou a ocorrência de oocistos e cistos, parâmetros físico-químicos e bacteriológicos, nas principais etapas do sistema da estação de tratamento de água 3 e 4 de Campinas. Foram realizados dois experimentos: um no período de seis meses, e outro, em dias consecutivos, respectivamente. No processamento das amostras foi utilizada a técnica de filtração em membrana, seguida por eluição, centrífuco-concentração, imunofluorescência direta e teste confirmatório empregando corante fluorogênico (DAPI). Os demais parâmetros foram determinados de acordo com os procedimentos do ôStandard Methods, 1998ö. A positividade de Giárdia na água bruta captada no experimento I e II foi de 90 por cento e 100 por cento, respectivamente; Cryptosporidium não foi detectado. Cistos e oocistos não foram detectados em todas as amostras colhidas após as etapas de filtração e decantação. As análises físico-químicas e bacteriológicas atestaram a qualidade da água nas diversas etapas e a degradação da qualidade da água bruta. Os resultados obtidos fornecem uma indicação da eficiência na remoção deste organismo pelo sistema convencional da estação de tratamento da água analisada.

Occurrence of Cryptosporidium oocysts and Giardia cysts in raw water from the Atibaia river, Campinas, Brazil

Cryptosporidium parvum and Giardia duodenalis are waterborne parasites that have caused several outbreaks of gastrointestinal disease associated with drinking water. Due to the lack of studies about the occurrence of these protozoa in water in the Southeast of Brazil, an investigation was conducted to verify the presence of cysts and oocysts in superficial raw water of the Atibaia River. The water samples were submitted to membrane filtration (3.0 mum) and elution was processed by (1) scraping and rinsing of membrane (RM method) and (2) acetone-dissolution (ADM method). Microbiologic and chemical parameters were analyzed. Aliquots of the pellets were examined by immunofluorescence (Merifluor, Meridian Diagnostics, Cincinnati, Ohio). All water samples were positive for Cryptosporidium and Giardia, in spite of the high turbidity. Higher recovery rates occurred in samples treated by the RM method than by the ADM technique. The goal for future work is the assessment of viability of cysts and oocysts to determine the public health significance of this finding

Novos aspectos sobre um tema bem conhecido: cryptosporidium / News aspects about a well known theme: cryptosporidium

Cryptosporidium é um protozoário parasita cuja importância emergiu paralelamente aos primeiros casos de HIV/SIDA. O curso clínico da infecçäo está diretamente relacionado ao estado imunológico do indivíduo. A criptosporidiose é uma zoonose, sendo a infecçäo registrada em cerca de 152 diferentes hospedeiros mamíferos. A protozoose atinge os indivíduos imunocompetentes como crianças que freqüentam creches. Nos últimos anos, estudos empregando técnicas moleculares revolucionaram o conhecimento sobre o protozoário. Nessa revisäo, importantes e novos aspectos da criptosporidiose e seu agente etiológico säo discutidos, como a validade das distintas espécies, os diferentes genótipos e a relevância do seu diagnóstico à luz da Parasitologia Clínica no Brasil