Valoración morfométrica de la cabeza del espermatozoide del cerdo doméstico según su edad / Morphometric evaluation of sperm head of domestic pig according their age

Se utilizó el Análisis Automatizado de la Morfometría Espermática (ASMA) con el fin de determinar las dimensiones de la cabeza del espermatozoide (DCE) en semen de cerdos domésticos según la edad, además de agrupar las medidas obtenidas en subpoblaciones espermáticas (SP). Se evaluaron 36 muestras de semen fresco y diluido de 20 cerdos los cuales se clasificaron en dos categorías. A: menores de 18 meses de edad y B: mayores de 18 meses de edad. Las DCE (Largo, µm/ Ancho, µm/ Área, µm 2 y Perímetro, µm) se analizaron en frotis teñidos con Hemacolor ® mediante Sperm-Class Analyser ® (SCA) y los valores obtenidos guardados en una base de datos. El procedimiento GLM fue utilizado para evaluar el efecto de la edad del cerdo sobre las DCE y el análisis de agrupamiento (FASTCLUS) para identificar las SP. Los espermatozoides provenientes de cerdos mayores de 18 meses de edad presentaron mayor longitud (8,84 vs. 8,95 µm) que los cerdos menores de 18 meses de edad, sin embargo, las medias correspondientes al ancho (4,44 vs. 4,32 µm), área (33,33 vs. 32,39µm 2) y perímetro (27,65 vs. 26,3 µm) fueron más pequeñas en los cerdos de mayor edad. Dos SP fueron obtenidas con el fin de ratificar las diferencias observadas entre las 2 categorías de edades evaluadas (P<0,001). La población que incluyó los espermatozoides con las mayores dimensiones disminuyó de 41,61 por ciento en cerdos menores de 18 meses a 20,78 por ciento en cerdos mayores de 18 meses. Contrariamente, la SP que contenía los espermatozoides de menor tamaño incrementó de un 58,39 por ciento en cerdos menores de 18 meses a 79,22 por ciento en cerdos mayores de 18 meses. En conclusión, la edad de los cerdos influye significativamente sobre las DCE. Los cerdos de mayor edad tienen 20 por ciento más de espermatozoides de menor tamaño que los cerdos más jóvenes.

Assisted Sperm Morphometry Analysis (ASMA) was used to determine the sperm head dimensions (DCE) of boar by age, and then the data set clustered in sperm subpopulations (SP). To this purpose were evaluated 36 fresh and diluted semen samples of 20 Dalland domestic pigs, which were classified in 2 categories: under 18 months old and over 18 months old. The DCE (Length, µm/ Width, µm/, Area, µm 2 / and Perimeter, µm) were analyzed in slides stained by Hemacolor ® by the Sperm-Class Analyser ® (SCA), and the mean measurements recorded. A GLM procedure was performed to evaluate the effects of boar age on sperm head dimensions and clustering analysis (FAST-CLUS procedure) to separate in SP. Spermatozoa collected from older boar (over 18 months old) had head length larger (8.84 vs. 8.95 µm) than younger boar (under 18 months old), however, the width (4.44 vs. 4.32 µm), area (33.33 vs. 32.39 µm 2) and perimeter (27.65 to 26.3 µm) were smaller in older boar than younger boar. Two SP were clustered in this trial toratify the differences between younger and older pigs. The mean values of each DCE among the SP were significantly dif-ferent (P<0.001). Thus, the percentage of representation of the subpopulation that includes those spermatozoa whose dimensions are the largest decreased from 41.61 percent in pigs under 18 months old to 20.78 percent in pigs over 18 months old. Whereas, the percent of representation of the SP containing the smallest sper-matozoa increased from 58.39 percent in pigs under 18 months old to 153 79.22 percent in pigs over 18 months old. In conclusion, the age of sexually mature domestic male pig had a significant effect on the morphometric traits of their spermatozoa. Older boar had 20 percent more of smaller spermatozoa than younger boar.

Caracterización morfométrica de la cabeza del espermatozoide porcino mediante análisis computarizado (resultados preliminares) / Morphometry characterization of boar sperm head with computer assited analysis (preliminary results)

Para determinar los parámetros morfométricos de la cabeza espermática en semen porcino, así como evidenciar la presencia de subpoblaciones espermáticas fueron evaluadas 20 muestras seminales de 10 verracos Dalland. Sobre semen fresco y refrigerado fue evaluada la motilidad, vitalidad, acrosomas alterados y/o ausentes y anormalidades espermáticas. Mediante el análisis automatizado de la morfología espermática (ASMA), en frotis teñidos con Hemacolor®, se realizaron las mediciones de la cabeza espermática: Longitud (µm), Ancho (µm), Área (µm2), Perímetro (µm) y función Largo/Ancho. El efecto del proceso de refrigeración sobre las variables de calidad seminal y morfometría, se analizaron utilizando el GLM (SAS®) y para identificar las subpoblaciones espermáticas, se utilizó el procedimiento FASTCLUS (SAS®). La refrigeración a 16°C por 24 horas no afectó las características de calidad seminal de los eyaculados, pero si afectó las características morfométricas. La longitud de la cabeza disminuyó de 8,82 a 8,71 mm, así como el perímetro de 30,08 a 29,05 µm, mientras que aumentaron los valores de ancho (4,36 a 4,45 µm) y área (33,13 a 33,14 µm2). Se identificaron tres subpoblaciones espermáticas, con valores de distribución de 28,45 por ciento para la subpoblación 1 (espermatozoides grandes), 51,20 por ciento para la subpoblación 2 (medianos) y 20,35 por ciento para la subpoblación 3 (pequeños), las cuales se ven alteradas significativamente durante el proceso de refrigeración a 16°C.

To determine the morphometric parameters of the sperm head, and identify the presence of separate sperm subpopulations in boar semen were evaluated 20 ejaculate samples of 10 boars. Sperm motility, viability, acrosome integrity and morphological abnormalities were evaluated on fresh and cooling semen samples. By means Assisted Sperm Morphometry Analysis (ASMA), in slides stained by Hemacolor®, were determined the morphometric dimensions: Length (µm), Width (µm), Area (µm2), Perimeter (µm), and function Length/Width. Effect of cooling procedure on variables of semen quality and morphometric parameters were analyzed using GLM (SAS®). For identify the sperm subpopulations was used FASTCLUS procedure (SAS®). Cooling at 16°C for 24 hours did not affect the parameters of semen quality, but affected morphometric characteristics. Sperm head length decreased of 8.82 to 8.71 µm, and the sperm head perimeter of 30.08 to 29.05 µm, however, the width (from 4.36 to 4.45 mm) and area sperm head increased (33.13 to 33.14 µm2). Our results demonstrated that three separate sperm subpopulations coexist in boar ejaculates, 28.45% in the subpopulation 1 (larges), 51.20% in the subpopulation 2 (average), and 20.35% in the subpopulation 3 (small). These sperm subpopulation changed their distribution during cooling process.

Head dimensions of Brahman and their crossbred bull spermatozoa are affected by cryopreservation

El objetivo de este estudio fue determinar el efecto de la criopreservación sobre las características morfométricas de las cabezas de espermatozoides de toros Brahman y sus mestizos. Cinco eyaculados fueron colectados de 4 toros y diluidos a 30°C en una solución de leche descremada-yema de huevo. Por cada muestra se hicieron dos frotis: uno del semen diluido, antes de su congelación en vapores de nitrógeno líquido, y otro de semen descongelado una semana después de la congelación. Todos los frotis fueron secados al aire y coloreados con Hemacolor®. Se analizaron las dimensiones de la cabeza espermática para un mínimo de 150 espermatozoides por muestra mediante el Sperm Class Analyser® (SCA). El procedimiento GLM se realizó para evaluar el efecto de la criopreservación sobre las dimensiones morfométricas de las cabezas espermáticas. Las cabezas espermáticas de los toros fueron significativamente (P<0,001) menores en los espermatozoides criopreservados que en las muestras frescas para la longitud (9,00 µm vs. 9,43 µm), el ancho (4,82 µm vs. 5,13 µm), el perímetro (32,46 µm vs. 33,69 µm) y el área (36,20 µm²vs. 39,97 µm²) para todos los toros. Así mismo, se encontraron diferencias (P<0,001) de todos los parámetros morfométricos de los toros evaluados, encontrándose dimensiones de cabeza menores en las muestras descongeladas. La variabilidad individual (CV) de las medidas de cabeza espermática de los toros osciló entre el 5,9 y el 10,2 por ciento para las muestras frescas y descongeladas, respectivamente. En conclusión, este estudio indica que el proceso de criopreservación de semen de toro afecta la morfometría, al reducir las dimensiones de la cabeza espermática de toros Brahman y sus cruces. Las diferencias entre los toros evaluados puede ser indicativo de diferencias individuales al proceso de criopreservación.

The objective of this study was to determine the effect of cryopreservation on morphometrics characteristic of Brahman and their crossbred bull sperm heads. Five ejaculates were collected from 4 bulls and diluted at 30°C in a skim milk-egg yolk extender. Two microscope slides were prepared from single extended sperm samples prior to freezing in nitrogen vapors, and another one after thawing, sperm smears were prepared as described above. All slides were air dried and stained with Hemacolor®. Sperm-head dimensions for a minimum of 150 sperm heads/samples were analysed from each sample by means of the Sperm-Class Analyser® (SCA), and the mean measurements recorded. A GLM procedure was performed to evaluate the effect of cryopreservation on sperm head morphometric dimensions. Bull sperm heads were significantly (P<0.001) smaller in frozen-thawed spermatozoa than in the extended samples for length (9.00 µm vs. 9.43 µm), width (4.82 µm vs. 5.13 µm), perimeter (32.46 µm vs. 33.69 µm) and area (36.20 µm2 vs. 39.97 µm2) for all bulls. Also, differences (P<0.001) were found within all bulls for whole morphometric parameters. The individual variability of sperm head measurements across all bulls ranged from 5.9% to 10.2% for fresh and thawed samples, respectively. In conclusion, the present study indicate that cryopreservation of bull semen did affect the morphometry to reduce the dimensions of Brahman and crossbred bull sperm heads. The differences among bulls may be indicative of the individual bull resistance to the cryopreservation process.