ABSTRACT
El desorden linfoproliferativo postrasplante es una de las complicaciones más importantes producidas por el virus Epstein Barr (EBV) en pacientes trasplantados de órganos sólidos y de médula ósea ya que afecta la sobrevida del paciente y del injerto. En estos pacientes se han reportado altos niveles de carga viral en sangre periférica que preceden al desarrollo del desorden linfoproliferativo postrasplante. Por esto el monitoreo de la carga viral (CV) permite detectar pacientes en riesgo a desarrollar esta patología para iniciar una terapia preventiva. El objetivo de este trabajo fue desarrollar una técnica de PCR en tiempo real cualitativa (RT PCR) que permitiera ser utilizada como prueba de tamizaje previo a la determinación de CV EBV. De esta manera se podrían minimizar el costo que implicaría la utilización de un método cuantitativo comercial para todas las muestras que ingresaran al monitoreo viral. Teniendo en cuenta el desempeño de la RT PCR desarrollada, se estableció Ct ≤ 37 como valor límite para evitar amplificación inespecífica y seleccionar las muestras candidatas a la determinación de CV EBV. Dicho punto de corte presentó una sensibilidad diagnóstica relativa de 80%, una especificidad diagnóstica relativa de 85%, un valor predictivo positivo (VPP) de 53% y un valor predictivo negativo (VPN) de 95%. Para ello se consideró que valores de CV EBV< 4000 copias/ml sangre eran bajas o no presentaban riesgo de desarrollar complicaciones. El límite de detección LoD 95% fue de 280 copias de EBV/ml sangre (66 1184, IC 95%). Esta técnica demostró tener una buena performance analítica, ser de fácil implementación y el punto de corte seleccionado nos permitió realizar un buen tamizaje de muestras de pacientes trasplantados que resultaban ser candidatas a la determinación de CV, con la consiguiente disminución de costos (AU)
Post-transplant lymphoproliferative disorder is one of the main complications caused by the Epstein Barr virus (EBV) in solidorgan and bone-marrow transplantation patients affecting survival of both the patient and the graft. High levels of viral load (VL) in peripheral blood preceding the development of posttransplant lymphoproliferative disorder have been reported in these patients. Therefore, VL monitoring allows detection of patients who are at risk of developing this disease to start preventive treatment. The aim of this study was to develop a qualitative real-time PCR technique to use as an early screening test to determine EBV VL. This test may minimize costs related to the use of a commercial quantitative method for all the samples that enter for viral screening. Considering the performance of the RT PCR method developed, a Ct ≤ 37 was established as the cut-off limit to avoid unspecific amplification and select the samples that are candidates for EBV VL determination. This cut-off point had a relative diagnostic sensitivity of 80%, a relative diagnostic specificity of 85%, a positive predictive value (PPV) of 53% and a negative predictive value (NPV) of 95%. Thus, an EBV VL< 4000 copies/ml blood was considered to be low and not to be a risk for developing complications. The 95% limit of detection was 280 copies of EBV/ml blood (661184, 95%CI). The technique showed to be of good analytical performance and easy implementation. The cut-off point allowed a good screening of the samples of transplanted patients to detect those who are candidates for VL determination at a lower cost (AU)