Antagonistic activity of lactic acid bacteria isolated from Minas artisanal cheeses against Brucella abortus / Atividade antagonista de bactérias lácticas isoladas de queijos Minas artesanais contra Brucella abortus

This study aimed to evaluate methods for studying the in vitro antimicrobial activity of lactic acid bacteria (LAB) against Brucella abortus and to evaluate the antagonistic effect of LAB on the viability of this pathogen. A total of 18 LAB strains (Lactobacillus plantarum, n = 11; Pediococcus acidilactici, n = 1; Lactobacillus rhamnosus, n = 4; and Lactobacillus brevis,n = 2), isolated from Minas artisanal cheeses produced in three regions (Canastra, Campos das Vertentes, and Araxá) of Minas Gerais State, Brazil, were tested for their antimicrobial activity against B. abortus using three methods: spot-on-lawn, agar well diffusion assay, and antagonistic activity of the culture supernatants. None of the tested LAB strains could inhibit B. abortus in the spot-on-lawn and agar-well diffusion assays. The supernatants produced by LAB had an acidic pH, with intensity depending on bacterial growth and strain, and could inhibit the growth of B. abortus. In contrast, pH-neutralized (pH 7.0) LAB supernatants did not suppress the growth of B. abortus. The results showed that the best technique to study the in vitro antagonism of LAB against B. abortus was the antagonistic activity of culture supernatants. The growth of B. abortus may have been inhibited by acid production.(AU)

Este estudo teve como objetivo avaliar métodos de estudo in vitro da atividade antimicrobiana de bactérias lácticas contra Brucella abortus e avaliar o efeito antagônico das mesmas sobre a viabilidade deste patógeno. Um total de 18 amostras de bactérias lácteas (Lactobacillus plantarum, n = 11; Pediococcus acidilactici, n = 1; Lactobacillus rhamnosus, n = 4; e Lactobacillus brevis, n = 2), isoladas de exemplares de Queijo Minas Artesanal produzidos em três regiões (Canastra, Campos das Vertentes e Araxá) do estado de Minas Gerais, Brasil, foram testados quanto à sua atividade antimicrobiana contra B. abortus usando três métodos: spot-on-lawn, ensaio de difusão em poço e atividade antagonista de sobrenadante de cultura. Nenhuma das cepas testadas foi capaz de inibir B. abortus nos ensaios spot-on-lawm e de difusão em poço. Os sobrenadantes produzidos pelas bactérias lácteas apresentaram pH ácido, com intensidade dependente do crescimento bacteriano e da amostra, podendo inibir o crescimento de B. abortus. Em contraste, os sobrenadantes com pH neutralizado (pH 7,0) não inibiram o crescimento de B. abortus. Os resultados mostraram que a melhor técnica para estudar o antagonismo in vitro de bactérias lácteas contra B. abortus foi a atividade antagonista de sobrenadante de cultura. O crescimento de B. abortus pode ter sido inibido pela produção de ácido.(AU)

Selection and characterization of peptides mimetic to Campylobacter fetus subsp. venerealis using phage display / Seleção e caracterização de peptídeos miméticos a Campylobacter fetus subsp. venerealis usando phage display

ABSTRACT: Bovine genital campylobacteriosis (BGC) is a venereal and subclinical disease that affects the fertility of cattle herds, and it is caused by Campylobacter fetus subsp. venerealis . This study selected peptides mimetic to the BGC-causing agent from a phage library. Phage display is a technique that applies bacteriophage libraries that reveal peptides fused to the viral capsid in biological selections against target proteins. Biopannings were performed for biological selection in the phage library using rabbit hyperimmune serum and C. fetus subsp. venerealis protein extract. Five selected heptapeptides were considered mimetic to Cfv-NCTC 10354 based on the results of bioinformatics analysis and assays with hyperimmune serum and cervicovaginal mucus obtained from heifers. ALASLPL and LSYLFPP were the most reactive peptides and considered promising as possible mimetic immunogens for C. fetus subsp. venerealis.

RESUMO: Campilobacteriose Genital Bovina (CGB) é uma doença venérea e subclínica que causa problemas reprodutivos em rebanhos, causada por Campylobacter fetus subsp. venerealis. Este trabalho teve como objetivo selecionar peptídeos miméticos ao agente da CGB de uma biblioteca de fagos. Phage display é uma técnica que aplica bibliotecas de bacteriófagos que expõem peptídeos fusionados ao capsídeo viral em seleções biológicas contra proteínas alvo. Biopannings foram realizados para seleção biológica na biblioteca de fagos por meio de soro hiperimune de coelho e extrato proteico de C. fetus subsp. venerealis. Cinco heptapeptídeos selecionados foram considerados miméticos para Cfv-NCTC 10354 a partir de análises de bioinformática e ensaios com soro hiperimune e muco cérvico-vaginal de novilhas. ALASLPL e LSYLFPP foram os peptídeos mais reativos e considerados promissores como possíveis imunógenos miméticos para C. fetus subsp. venerealis.

Seroprevalence of Brucella ovis-epididymitis, smooth-Brucella, leptospirosis, toxoplasmosis, and Maedi-Visna in sheep slaughtered in Minas Gerais State, Brazil / Soroprevalência de Brucella ovis, Brucella lisa, leptospirose, toxoplasmose e Maedi-Visna em ovinos abatidos em Minas Gerais, Brasil

The present study aimed to estimate the prevalence of antibodies against Brucella ovis-epididymitis, smooth-Brucella, leptospirosis, toxoplasmosis and Maedi-visna in sheep slaughtered in Minas Gerais, Brazil and to study their simultaneous occurrence, including caseous lymphadenitis, at sheep and flock levels. The study was conducted at a sheep slaughterhouse with Federal Inspection Service. Sera from 594 animals from 21 flocks were collected, in 2007. The agar gel immunodiffusion (AGID) was employed to detect anti-B. ovis and anti-Maedi Visna antibodies, whereas Rose Bengal (RB) and the 2-mercaptoethanol test (2ME) were used to test anti-smooth Brucella antibodies. For the detection of anti-Leptospiraantibodies, sera were examined by microscopic agglutination test (MAT), while for the detection of IgG antibodies to Toxoplasma gondii ELISA was used. Prevalence of antibodies against smooth Brucella, B. ovis-epididimitis, Leptospiraspp., toxoplasmosis and Maedi-Visna found in sheep from Minas Gerais was 0.00%, 24.04%, 25.96%, 10.46% and 3.08%, respectively; whereas the seroprevalence in flocks was 0.00%, 80.95%, 90.48%, 71.43% and 23.81%, respectively. Moreover, when data on antibodies anti-Corynebacterium pseudotuberculosis, previously obtained, were included, about 60% of the flocks showed animals that were exposed to four or more of the studied agents. However, only 25.47% of the sheep exhibited simultaneously antibodies against more than one pathogen. Thus, data from the present study on sheep slaughtered in Minas Gerais, Brazil, showed no antibodies to smooth-Brucella and a low frequency of antibodies anti-Maedi Visna lentivirus, and a high and widespread seroprevalence of B. ovis, Leptospira spp., and T. gondii among animals and flocks.(AU)

O presente estudo teve como objetivo estimar a prevalência de anticorpos contra Brucella ovis (epididimite ovina), Brucellalisa, leptospirose, toxoplasmose e Maedi-visna em ovinos abatidos em Minas Gerais, Brasil, e estudar sua ocorrência simultânea, incluindo linfadenite caseosa, nos ovinos e nos rebanhos. O estudo foi realizado em um abatedouro de ovinos com Serviço de Inspeção Federal. Soros de 594 animais de 21 rebanhos foram coletados, em 2007. A imunodifusão em gel de ágar (IDGA) foi empregada para detectar anticorpos anti-B. ovis e anticorpos anti-Maedi Visna, enquanto o teste do antígeno acidificado tamponado (AAT) e o teste de 2-mercaptoetanol (2ME) foram utilizados para testar anticorpos anti-Brucella lisa. Para a detecção de anticorpos anti-Leptospira, os soros foram examinados pelo teste de aglutinação microscópica (MAT), enquanto que para a detecção de anticorpos IgG para Toxoplasma gondii, foi usado o ELISA. A prevalência de anticorpos anti-Brucella lisa, B. ovis, Leptospira spp., toxoplasmose e Maedi-Visna encontrados em ovinos de Minas Gerais foi de 0,00%, 24,04%, 25,96%, 10,46% e 3,08%, respectivamente; enquanto a soroprevalência em rebanhos foi de 0,00%, 80,95%, 90,48%, 71,43% e 23,81%, respectivamente. Além disso, quando dados de anticorpos anti-Corynebacterium pseudotuberculosis, previamente obtidos, foram incluídos, cerca de 60% dos rebanhos apresentaram animais expostos a quatro ou mais dos agentes estudados. No entanto, apenas 25,47% dos ovinos exibiram simultaneamente anticorpos contra mais de um patógeno. Assim, os dados do presente estudo sobre ovinos abatidos em Minas Gerais, Brasil, mostram que ausência de anticorpos anti-Brucella lisa e baixa frequência de anticorpos anti-Maedi Visna, e uma soroprevalência alta e generalizada de B. ovis, Leptospira spp. e T. gondii entre animais e rebanhos.(AU)

Antimicrobial resistance in bacteria isolated from pigs with respiratory clinical signs in Brazil / Resistência a antimicrobianos em bactérias isoladas de suínos com sinais clínicos respiratórios no Brasil

Antimicrobial resistance is a current and important issue to public health, and it is usually associated with the indiscriminate use of antimicrobials in animal production. This study aimed to evaluate the antimicrobial susceptibility profile in bacterial isolates from pigs with clinical respiratory signs in Brazil. One hundred sixty bacterial strains isolated from pigs from 51 pig farms in Brazil were studied. In vitro disk-diffusion method was employed using 14 antimicrobial agents: amoxicillin, penicillin, ceftiofur, ciprofloxacin, enrofloxacin, chlortetracycline, doxycycline, oxytetracycline, tetracycline, erythromycin, tilmicosin, florfenicol, lincomycin, and sulfadiazine/trimethoprim. The majority of isolates were resistant to at least one antimicrobial agent (98.75%; 158/160), while 31.25% (50/160) of the strains were multidrug resistant. Streptococcus suis and Bordetella bronchiseptica were the pathogens that showed higher resistance levels. Haemophilus parasuis showed high resistance levels to sulfadiazine/trimethoprim (9/18=50%). We observed that isolates from the midwestern and southern regions exhibited four times greater chance of being multidrug resistant than the isolates from the southeastern region studied. Overall, the results of the present study showed a great level of resistance to lincomycin, erythromycin, sulfadiazine/trimethoprim, and tetracycline among bacterial respiratory pathogens isolated from pigs in Brazil. The high levels of antimicrobial resistance in swine respiratory bacterial pathogens highlight the need for the proper use of antimicrobials in Brazilian pig farms.(AU)

A resistência antimicrobiana é uma questão atual e muito importante para a saúde pública, geralmente associada ao uso indiscriminado de antimicrobianos na produção animal. Diante disso, foi investigado o perfil de sensibilidade-antimicrobiana em isolados bacterianos de suínos com sinais clínicos respiratórios no Brasil. Foram estudadas 96 isolados provenientes de 51 granjas de suínos do Brasil. O método de disco-difusão foi empregado usando 14 antimicrobianos: amoxicilina, penicilina, ceftiofur, ciprofloxacina, enrofloxacina, clortetraciclina, doxiciclina, oxitetraciclina, tetraciclina, eritromicina, tilmicosina, florfenicol, lincomicina e sulfadiazina/trimetoprim. Streptococcus suis e Bordetella bronchiseptica foram os patógenos que apresentaram maiores níveis de resistência. Haemophilus parasuis apresentou altos níveis de resistência à sulfadiazina/trimetoprim (9/18=50%). Observou-se que isolados das regiões Centro-Oeste e Sul apresentaram quatro vezes mais chance de serem multirresistentes do que os isolados da região Sudeste. A maioria foi resistente a pelo menos um agente antimicrobiano (98,75%; 158/160) e 31,25% (50/160) das estirpes isoladas eram multirresistentes. No geral, os resultados do presente estudo mostraram grande nível de resistência à lincomicina, eritromicina, sulfadiazina/trimetoprim e tetraciclina entre patógenos respiratórios bacterianos isolados de suínos no Brasil. Os altos níveis de resistência antimicrobiana em patógenos bacterianos respiratórios em suínos reforçam a necessidade do uso criterioso de antimicrobianos na suinocultura brasileira.(AU)

Virulence factors and phylotyping of Escherichia coli isolated from non-diarrheic and diarrheic water buffalo calves / Caracterização dos fatores de virulência e filogrupos de Escherichia coli isoladas de bezerros bubalinos sem diarreia e diarréicos

ABSTRACT: This study aimed to determine the virulence factors, phylogenetic groups, and the relationships between pathovars and phylogenetic groups of E. coli strains isolated from feces of buffalo calves. A total of 217 E. coli strains were obtained from feces after culture and were screened by PCR for detection of virulence factors EAST-1, enterohemolysin, Saa, CNF2, F41, F5, STa, intimin, Stx1 and Stx2. One hundred and thirty-four isolates were positive for one or more virulence factors: eighty-four from diarrheic animals, and fifty from non-diarrheic calves. The pathovars of E. coli identified in diarrheic feces were ETEC (F5+) (2/84), NTEC (16/84), STEC (20/84), EPEC (3/84), EHEC (3/84), and EAEC (EAST-1+) (33/84). Pathovars identified in non-diarrheic animals were NTEC (21/50), STEC (17/50), EHEC (1/50) and EAEC (7/50). E. coli strains positive for EAST-1 (P=0.008) and phylogroup C (P = 0.05) were associated with the presence of diarrhea. Phylogenetic analysis showed that 58.95% of the isolates belonged to phylogroup B1, followed by E (9.70%), B2 (5.90%), C (5.90%), D (5.22%), A (2.24%), and F (1.50%). Phylogroup B1 predominated in pathogenic E. coli isolated from water buffalo, and phylogroup C constituted an enteropathogenic E. coli for water buffalo calves.

RESUMO: O objetivo foi determinar os fatores de virulência, os grupos filogenéticos e as possíveis relações entre os patovares e os grupos filogenéticos identificados de cepas de Escherichia coli isoladas de fezes de bezerros bubalinos. Um total de 217 amostras de E. coli foram identificadas a partir de cultura das fezes e submetidas a reação em cadeia da polimerase (PCR) para detecção dos fatores de virulência EAST-1, enterohemolisina, Saa, CNF2, F41, F5, STa, intimina, Stx1 e Stx2. Foram identificadas 134 cepas positivas para um ou mais fatores de virulência: 84isoladas de bezerros bubalinos diarreicos e 50 de bezerros bubalinos saudáveis. Os patovares de E. coli obtidos de fezes diarreicas foram ETEC (F5+) (2/84), NTEC (16/84), STEC (20/84), EPEC (3/84), EHEC (3/84), e EAEC (EAST-1+) (33/84). Os patovares isolados de fezes não diarreicas foram NTEC (21/50), STEC (17/50), EHEC (1/50) e EAEC (7/50). Cepas de E. coli positivas para EAST-1 (P = 0,008) e filogrupo C (P = 0,05) foram associadas com a presença de diarreia. A análise de filogrupos revelou que 58,95% dos isolados pertencem ao filogrupo B1, seguido por E (9,70%), B2 (5,90%), C (5,90%), D (5,22%), A (2,24%) e F (1,50%). O filogrupo B1 predomina em cepas de E. coli patogênicas isoladas de bezerros búfalos e o filogrupo C constitui um filogrupo de E. coli patogênica entérica para bezerros.

Productive profile of cattle-rearing farms in the state of Minas Gerais, Brazil, 2002 / Perfil produtivo de propriedades produtoras de bovinos do Estado de Minas Gerais, Brasil, 2002

A descriptive cross-sectional study was conducted in the state of Minas Gerais, Brazil, with the aim to assess aspects of cattle production. A multistage clustering model was used to select 2,202 farms in seven cattle production strata in the state, and a questionnaire was applied to obtain information related to the characterization of the farms and their management of animal reproduction and production. The study showed that livestock-rearing in Minas Gerais continues to be unspecialized. Triângulo Mineiro and North were the regions that used most technology and had highest beef cattle activity. The Zona da Mata region showed the least use of technology and had the smallest farms. Milk production in this state was distributed among all strata, but was concentrated among a few producers in the stratum of highest production, especially in the region of Alto Paranaíba. This study showed a great heterogeneity among the strata regarding the characteristics of type of exploitation, type of rearing, herd size, specialization and milk production. Thus, it validated the stratification established by the Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento ­ MAPA (Brazilian Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply), thereby suggesting that these strata should be maintained for further epidemiological studies.(AU)

Com o objetivo de avaliar os aspectos da produção de bovinos no Estado de Minas Gerais, realizou-se um estudo transversal descritivo. Foram selecionadas, pelo método de conglomerados multiestágios, 2.202 propriedades distribuídas em sete estratos produtores de bovinos do estado, nas quais foram aplicados questionários visando obter informações relacionadas à caracterização da propriedade e do manejo produtivo e reprodutivo dos animais. A pecuária bovina em Minas Gerais ainda é pouco especializada, sendo a Região do Triângulo Mineiro considerada a mais tecnificada e com maior expressão na exploração de animais de corte, juntamente com a Região Norte de Minas. A Zona da Mata foi considerada a menos tecnificada e constituída pelas menores propriedades. A produção de leite no estado está distribuída por todos os estratos, no entanto é concentrada em poucos produtores das faixas de maior produção, com destaque para a Região do Alto Paranaíba. O estudo mostrou que há grande heterogeneidade entre os estratos no que se refere às características tipo de exploração, tipo de criação, tamanho de rebanho, especialização e produção de leite, validando a estratificação estabelecida pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA) e sugerindo sua manutenção em futuros estudos epidemiológicos.(AU)

Detection of virulence genes and the phylogenetic groups of Escherichia coli isolated from dogs in Brazil / Detecção de genes de virulência e grupos filogenéticos de amostras Escherichia coli isoladas de cães no Brasil

ABSTRACT: This study identified the virulence genes, pathovars, and phylogenetic groups of Escherichia coli strains obtained from the feces of dogs with and without diarrhea. Virulence genes and phylogenetic group identification were studied using polymerase chain reaction. Thirty-seven E. coli isolates were positive for at least one virulence factor gene. Twenty-one (57.8%) of the positive isolates were isolated from diarrheal feces and sixteen (43.2%) were from the feces of non-diarrheic dogs. Enteropathogenic E. coli (EPEC) were the most frequently (62.2%) detected pathovar in dog feces and were mainly from phylogroup B1 and E. Necrotoxigenic E. coli were detected in 16.2% of the virulence-positive isolates and these contained the cytotoxic necrotizing factor 1 (cnf1) gene and were classified into phylogroups B2 and D. All E. coli strains were negative for the presence of enterotoxigenic E. coli (ETEC) enterotoxin genes, but four strains were positive for ETEC-related fimbriae 987P and F18. Two isolates were Shiga toxin-producing E. coli strains and contained the toxin genesStx2 or Stx2e, both from phylogroup B1. Our data showed that EPEC was the most frequent pathovar and B1 and E were the most common phylogroups detected in E. coli isolated from the feces of diarrheic and non-diarrheic dogs.

RESUMO: Este estudo pesquisou genes de virulência, patovares e grupos filogenéticos de amostras de E. coli isoladas de fezes de cães com e sem diarreia. Os genes de virulência e a identificação de grupos filogenéticos foram estudados pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR). 37 isolados de E. coli foram positivos para pelo menos um fator de virulência na análise de PCR. Destes, 21 (57,8%) foram isolados de fezes de cães com diarreia e 16 (43,2%) de fezes de cães não diarreicos. E. coli enteropatogênica (EPEC) (23/37, 62,2%) foi o patovar mais frequente detectado em fezes de cães e foram classificados principalmente como filogrupos B1 e E. E. coli necrotoxigênica (NTEC) positivos para CNF1 foram detectados (6/37, 16,2%) e classificados como B2 e D. Todas as amostras de E. coli foram negativas quanto à presença de genes de enterotoxinas de E. coli enterotoxigênica (ETEC), mas quatro amostras foram positivas para fimbrias relacionadas ao ETEC, 987P (2) e F18 (2). As amostras de E. coli (STEC) produtora de toxina Shiga foram positivas para a toxina Stx2 (1/37) e Stx2e (1/37), ambas do filogrupo B1. Nossos resultados indicaram que EPEC foi o patovar mais frequente e B1 e E foram os filogrupos mais comuns detectados em amostras E. coli isoladas de fezes de cães diarreicos e não diarreicos.

Detection of Campylobacter spp. in chilled and frozen broiler carcasses comparing immunoassay, PCR and real time PCR methods / Detecção de Campylobacter spp. em carcaças de frango de corte resfriadas e congeladas pelos métodos imunoenzimático, PCR e PCR em tempo real

ABSTRACT: In order to detect and identify Campylobacter spp. in broiler chicken carcasses, and to compare detection methods, 43 chilled and 43 frozen carcasses were collected and analyzed. Three methodologies were evaluated: an automated Enzyme Linked Fluorescent Assay (ELFA) VIDAS®30, Polymerase Chain Reaction (PCR) and real-time PCR. Only four chilled carcasses (4.6%) were considered positive for Campylobacter spp. by VIDAS®30 and no sample was positive when the conventional PCR technique was used. However, real-time PCR showed a higher incidence of contamination by Campylobacter spp. in broiler carcasses, with 45 (52.3%) positive samples. C. jejuni was the species most frequently reported in the samples (88.8%). No differences in the frequencies of Campylobacter spp. were observed between the chilled and frozen broiler carcasses. In conclusion, real-time PCR was the most sensitive method for the detection of Campylobacter spp. in chilled or frozen broiler carcasses, which were mainly contaminated by C. jejuni.

RESUMO: Com o objetivo de detectar e identificar Campylobacter spp. em carcaças de frango de corte utilizando três metodologias distintas - ensaio imunoenzimático VIDAS®30, Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e PCR em tempo real - foram coletadas e analisadas 43 carcaças de frango resfriadas e 43 congeladas. Quatro carcaças refrigeradas (4,6%) foram consideradas positivas para Campylobacter spp. pelo VIDAS®30 e nenhuma amostra positiva foi identificada quando utilizada a técnica de PCR. Porém, ao analisar as carcaças pela metodologia da PCR em tempo real, foi observada uma maior incidência de Campylobacter spp., com 45 amostras (52,3%) positivas, sendo que Campylobacter jejuni foi a espécie mais frequentemente encontrada nas amostras (88,8%). Não foi observada diferença na frequência do micro-organismo entre carcaças de frangos resfriadas e congeladas. Concluiu-se que a técnica de PCR em tempo real apresentou maior sensibilidade na detecção de Campylobacter spp. em carcaças de frangos de corte e que foi encontrada elevada presença de carcaças contaminadas, especialmente por C. jejuni.

Antimicrobial susceptibility profile of Campylobacter spp. isolated from different animal species in Minas Gerais / Perfil de suscetibilidade a antimicrobianos de amostras Campylobacter spp isoladas de diferentes espécies animais em Minas Gerais

Susceptibility pattern of 45 Campylobacter spp.isolates ­ 16 C. jejuni, eight C. coli, and 21 C. fetus isolated from different animal species in Brazil ­ to twelve antimicrobial agents was determined. All Campylobacter spp. isolates were susceptible to gentamicin, sulfadiazine, and sulfamethoxazole. C. jejuni and C. coli were also sensitive to chloramphenicol, whereas all C. fetus strains were susceptible to kanamycin. Cefoperazone showed the highest percentage of resistance among C. jejuni (68.75%), followed by nalidixic acid (31.25%), ampicillin (37.50%), tetracycline (37.50%), erythromycin (12.50%), and kanamycin (6.25%). Likewise, cefoperazone exhibited the highest percentage of resistance among C. coli (75.00%), followed by nalidixic acid (50.00%), tetracycline (50.00%), erythromycin (37.50%), ampicillin (12.50%), and kanamycin (12.50%). Among C. fetus strains, nalidixic acid showed the highest resistance rate (85.71%), followed by cefoperazone (71.43%), tetracycline (42.86%), ampicillin (19.05%), chloramphenicol (9.52%), and erythromycin (4.76%). Therefore, it was found that the majority of Campylobacter spp. isolated from animals was sensitive to gentamycin, chloramphenicol, kanamacyn, and sulfonamides; however, a high proportion of the strains showed reduced susceptibility to nalidixic acid, ampicillin, cefoperazone, and tetracycline. Moreover, C. coli and C. fetus isolates showed a high percentage of multidrug resistant strains.(AU)

O padrão de sensibilidade de 45 amostras de Campylobacter spp, incluindo 16 amostras de C. jejuni, 8 de C. coli e 21 C. fetus, isoladas de diferentes espécies de animais do Brasil, foi determinado para doze antimicrobianos. Todas as amostras de Campylobacter spp foram sensíveis à gentamicina, sulfadiazina e sulfametoxazol. C. jejuni e C. coli foram também sensíveis ao cloranfenicol, enquanto todas as amostras de C. fetus foram sensíveis à canamicina. Cefoperazona mostrou o maior percentual de resistência entre C. jejuni (68,75%), seguido pelo ácido nalidíxico (31,25%), ampicilina (37,50%), tetraciclina (37,50%), eritromicina (12,50%) e canamicina (6,25%). Similarmente, cefoperazona também exibiu o maior percentual de resistência entre as amostras de C. coli (75,00%), seguido pelo ácido nalidíxico (50,00%), tetraciclina (50,00%), eritromicina (37,50%), ampicilina (12,50%) e canamicina (12,50%). Entre os isolados de C. fetus, ácido nalidíxico apresentou maior taxa de resistência (85,71%), seguido de cefoperazona (71,43%), tetraciclina (42,86%), ampicilina (19,05%), cloranfenicol (9,52%) e eritromicina (4,76%). Assim, os nossos resultados mostraram que a maioria das amostras de Campylobacter spp isolados de animais foram sensíveis à gentamicina, cloranfenicol, canamicina e sulfonamidas. No entanto, uma proporção elevada das amostras apresentou susceptibilidade reduzida ao ácido nalidíxico, ampicilina, cefoperazona e tetraciclina. Além disso, C. coli e C. fetus mostraram uma alta porcentagem de amostras resistentes a múltiplas drogas.(AU)

Validation of a real-time PCR assay for the molecular identification of Mycobacterium tuberculosis

Mycobacterium tuberculosis is the major cause of tuberculosis in humans. This bacillus gained prominence with the occurrence of HIV, presenting itself as an important opportunistic infection associated with acquired immunodeficiency syndrome (AIDS). The current study aimed to develop a real-time PCR using Eva Green technology for molecular identification of M. tuberculosis isolates. The primers were designed to Rv1510 gene. Ninety nine samples of M. tuberculosis and sixty samples of M. bovis were tested and no sample of the bovine bacillus was detected by the qPCR. Statistical tests showed no difference between the qPCR and biochemical tests used to identify the Mycobacterium tuberculosis. The correlation between tests was perfect with Kappa index of 1.0 (p < 0.001, CI = 0.84 - 1.0). The diagnostic sensitivity and specificity were 100% (CI = 95.94% - 100%) and 100% (CI = 93.98% - 100%). This qPCR was developed with the goal of diagnosing the bacillus M. tuberculosis in samples of bacterial suspension. TB reference laboratories (health and agriculture sectors), public health programs and epidemiological studies probably may benefit from such method.

Spoligotyping and variable number tandem repeat analysis of Mycobacterium bovis isolates from cattle in Brazil

We performed spoligotyping and 12-mycobacterial interspersed repetitive unit-variable number tandem repeats (MIRU-VNTRs) typing to characterise Mycobacterium bovis isolates collected from tissue samples of bovines with lesions suggestive for tuberculosis during slaughter inspection procedures in abattoirs in Brazil. High-quality genotypes were obtained with both procedures for 61 isolates that were obtained from 185 bovine tissue samples and all of these isolates were identified as M. bovis by conventional identification procedures. On the basis of the spoligotyping, 53 isolates were grouped into nine clusters and the remaining eight isolates were unique types, resulting in 17 spoligotypes. The majority of the Brazilian M. bovis isolates displayed spoligotype patterns that have been previously observed in strains isolated from cattle in other countries. MIRU-VNTR typing produced 16 distinct genotypes, with 53 isolates forming eight of the groups, and individual isolates with unique VNTR profiles forming the remaining eight groups. The allelic diversity of each VNTR locus was calculated and only two of the 12-MIRU-VNTR loci presented scores with either a moderate (0.4, MIRU16) or high (0.6, MIRU26) discriminatory index (h). Both typing methods produced similar discriminatory indexes (spoligotyping h = 0.85; MIRU-VNTR h = 0.86) and the combination of the two methods increased the h value to 0.94, resulting in 29 distinct patterns. These results confirm that spoligotyping and VNTR analysis are valuable tools for studying the molecular epidemiology of M. bovis infections in Brazil.

Anticorpos anti-Brucella canis e anti-Brucella abortus emcães de Araguaína, Tocantins / Antibodies anti-Brucella canis and anti-Brucella abortus in dogs from Araguaína, Tocantins,Brazil

Os objetivos deste estudo foram determinar a soroprevalência da infecção por Brucella canis e Brucella abortus e avaliaros possíveis fatores de risco associados à infecção em cães no município de Araguaína, Tocantins. Soros de 374 cães,pertencentes à zona urbana do município de Araguaína-Tocantins, foram analisados pelas técnicas de imunodifusãoem ágar gel (IDGA), para pesquisa de anticorpos contra Brucella canis, e antígeno acidificado tamponado (AAT)e polarização fluorescente (FPA) para detecção de anticorpos contra Brucella abortus. Dos 374 soros testados parapresença de anticorpos contra B. abortus, 21 foram reagentes no AAT, entretanto todos foram negativos pela FPA. Àprova do IDGA 167 animais foram reagentes resultando em uma prevalência para B. canis de 44,53% (IC 95%; 39,43 a49,72). A avaliação de possíveis fatores de risco associados à soropositividade para B. canis não revelou a existência derelação entre a infecção e as variáveis individuais estudadas. Assim, o presente estudo permite concluir que não houveanimais infectados por B. abortus e que a infecção por B. canis está disseminada nos cães do município de Araguaína,Tocantins.

The aims of the present study were to determine the seroprevalence of infection by Brucella canis and Brucella abortusand to evaluate possible risk factors for infection in dogs from Araguaína, Tocantins, Brazil. Sera from 374 dogs, of theurban zones of the municipality, from both sexes, were submitted to the agar-gel immunodiffusion for Brucella canisantibodiesand to rose Bengal test (AAT) and fluorescence polarization assay (FPA) for Brucella abortus-antibodies.From the 374 tested dogs, 21 reacted in the AAT, but no one was positive in the FPA. The seroprevalence of B. canisinfection found in Araguaína, Tocantins, Brazil, was 44.53% (95% IC; 39.43 to 49.72). No association was found amongseropositivity for B. canis and the risk factors studied. Thus, data from the present study showed that there was noinfection by B. abortus among dogs in the sample and that infection by B. canis is widespread and at high prevalence inAraguaína, Tocantins, Brazil.

Equilíbrio eletrolítico e ácido-base em bovinos / Eletroctrolyte and acid-base balance in bovines

O conhecimento sobre a fisiologia e regulação dos eletrólitos e do equilíbrio ácido-base é necessário, pois a saúde do animal depende diretamente da composição normal dos fluídos nos diversos compartimentos corporais. Esta regulação está intimamente entrelaçada em um rigoroso e preciso controle, de modo que uma anormalidade em um destes compartimentos reflete na alteração dos demais. A avaliação do equilíbrio eletrolítico e ácido-base pode fornecer informações fundamentais para o diagnóstico, prognóstico e decisão terapêutica de diversas enfermidades nos bovinos, tais como diarreias neonatais, hemoparasitoses (anaplasmose e a babesiose), deslocamento de abomaso e processos de sépticos. As correções destas alterações com medidas terapêuticas adequadas são pontos chave para minimizar as perdas por mortalidade causadas por estas enfermidades.

The knowledge of the physiology and regulation of electrolytes and blood gas parameters is necessary because the health of the animal depends directly on the normal composition of fluid in body compartments. The regulation of these is closely intertwined with a rigorous and precise control so that an abnormality in one of these compartments reflects the change in the other. The evaluation of electrolyte and acid-base balance can provide key information for diagnosis, prognosis and therapeutic decision for several diseases in animals such as neonatal diarrhea, anaplasmosis and babesiosis, displacement of abomasum and septic processes. The corrections of these changes with appropriate treatment are key to minimizing losses due to mortality in these diseases.

Etiologic diagnosis of bovine infectious abortion by PCR / Diagnóstico etiológico de aborto infeccioso bovino por PCR

Infectious abortion is a significant cause of reproductive failure and economic losses in cattle. The goal of this study was to detect nucleic acids of several infectious agents known to cause abortion including Arcanobacterium pyogenes, Bovine Herpesvirus 1, Brucella abortus, Campylobacter fetus subsp. venerealis, Chlamydophila abortus, Leptospira sp., Listeria monocytogenes, Salmonella sp., Mycoplasma bovis, Mycoplasma bovigenitalium, Neospora caninum, and Tritrichomonas foetus. Tissue homogenates from 42 fetuses and paraffin-embedded tissues from 28 fetuses and 14 placentas/endometrium were included in this study. Brucella abortus was detected in 14.2 percent (12/84) of the samples. Salmonella sp. DNA was amplified from 2 fetuses, and there was one positive for Neospora caninum, and another for Listeria monocytogenes. This PCR-based approach resulted in identification of the etiology in 19 percent of samples, or 20 percent if considered fetal tissues only.

Aborto infeccioso é uma causa significativa de falhas reprodutivas e perdas econômicas na bovinocultura. O objetivo deste estudo foi detectar ácidos nucleicos de vários agentes infecciosos reconhecidos como causadores de aborto, incluindo-se Arcanobacterium pyogenes, Herpesvirus bovino tipo 1, Brucella abortus, Campylobacter fetus subsp. venerealis, Chlamydophila abortus, Leptospira sp., Listeria monocytogenes, Salmonella sp., Mycoplasma bovis, Mycoplasma bovigenitalium, Neospora caninum e Tritrichomonas foetus. Homogenados de tecidos de 42 fetos e tecidos incluídos em parafina de 28 fetos e 14 placentas/endométrio foram incluídos neste estudo. Brucella abortus foi detectada em 14,2 por cento (12/84) das amostras. DNA de Salmonella sp. foi amplificado de dois fetos e houve um feto positivo para Neospora caninum e outro para Listeria monocytogenes. Essa metodologia baseada em PCR resultou na identificação da etiologia em 19 por cento das amostras ou 20 por cento se considerados somente os tecidos fetais.

Epidemiologia molecular de Haemophilus parasuis / Molecular epidemiology of Haemophilus parasuis

A maioria dos estudos epidemiológicos envolvendo Haemophilus parasuis isolados de rebanhos suínos brasileiros se baseia em sorotipagem. Entretanto, uma alta porcentagem de amostras não é sorotipável. Técnicas moleculares têm sido utilizadas com sucesso para caracterizar a diversidade dos isolados de H. parasuis e a epidemiologia das infecções por esse agente dentro e entre rebanhos. Esta revisão enfoca aspectos gerais da infecção por H. parasuis, principalmente em relação às técnicas de epidemiologia molecular.

The majority of epidemiological studies involving Haemophilus parasuis from Brazilian herds are based on serotyping. However, a high percentage of isolates are non-typable. Recently, molecular-based techniques were successfully used to characterize the diversity of H. parasuis isolates and the epidemiology of H. parasuis infections within and among herds. This review tackles general aspects of H. parasuis infection, mainly regarding to techniques of molecular epidemiology.

Antimicrobial susceptibility of Campylobacter sp strains isolated from calves with and without diarrhea in Minas Gerais state, Brazil

The antimicrobial susceptibility of 25 Campylobacter sp strains isolated from calves with and without diarrhea - 7 C. coli, 16 C. fetus and 2 C. jejuni was studied by the disk diffusion method. Eleven antimicrobial agents were tested amikacin, ampicillin, kanamycin, chloramphenicol, erythromycin, gentamicin, neomycin, nitrofurantoin, penicillin G, tetracycline and sulfamethoxazole-trimethoprim. All Campylobacter sp strains were susceptible to amikacin, ampicillin, chloramphenicol, erythromycin, gentamicin, neomycin and nitrofurantoin. Three strains were moderately susceptible to kanamycin (2 C. coli and 1 C. fetus). All the strains were resistant to penicillin G. Two C. fetus strains were moderately susceptible to sulfamethoxazole-trimethoprim and 1 C. coli, 9 C. fetus and 2 C. jejuni strains were resistant. Two C. fetus strains were moderately susceptible to tetracycline and 3 C. coli, 2 C. fetus and 1 C. jejuni strains were resistant. Eleven strains showed multidrug resistance (2 C. coli, 8 C. fetus and 1 C. jejuni). There was no correlation between resistance of Campylobacter sp strains to antimicrobials and the occurrence of diarrhea in calves. The frequency of resistance and, most importantly, multi drug resistance found among Campylobacter sp strains isolated from calves in Minas Gerais, Brazil, were high and the patterns of resistance observed are related to the antimicrobials agents most largely used in cattle in Brazil.

Foi estudado o perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos de 25 amostras de Campylobacter sp isoladas de bezerros com e sem diarréia (7 C. coli, 16 C. fetus e 2 C. jejuni). Foram testados pelo método de difusão 11 agentes antimicrobianos: amicacina, ampicilina, canamicina, cloranfenicol, eritromicina, gentamicina, neomicina, nitrofurantoína, penicilina G, tetraciclina e sulfametoxazole-trimetoprim. Todas as amostras de Campylobacter sp foram susceptíveis a amicacina, ampicilina, cloranfenicol, eritromicina, gentamicina, neomicina e nitrofurantoína. Três amostras foram moderadamente sensíveis à canamicina (2 C. coli e 1 C. fetus). Todas as amostras foram resistentes à penicilina G. Duas amostras de C. fetus foram moderadamente sensíveis a sulfametoxazole-trimetoprim e 1 C. coli, 9 C. fetus e 2 C. jejuni foram resistentes. Duas amostras de C. fetus foram moderadamente sensíveis à tetraciclina e 3 de C. coli, 2 de C. fetus e 1 de C. jejuni foram resistentes. Onze amostras apresentaram multirresistência (2 C. coli, 8 C. fetus e 1 C. jejuni). Não houve correlação entre resistência de amostras de Campylobacter sp aos antimicrobianos e a ocorrência de diarréia nos bezerros. A frequência de resistência e, principalmente, a multirresistência encontradas nas amostras Campylobacter sp isoladas de bezerros em Minas Gerais, Brasil, foram altas. O perfil de resistência de amostras de Campylobacter sp observado está relacionado aos agentes antimicrobianos mais utilizados em bovinos no Brasil.

Evaluation of adenosine deaminase seric activity in the diagnosis of bovine tuberculosis

Determination of seric levels of adenosine deaminase (ADA), an enzyme produced by monocytes/macrophages and lymphocytes, has been used in the diagnosis of human tuberculosis (TB). In the present study, ADA seric activity was evaluated comparatively to the comparative tuberculin test in the diagnosis of bovine tuberculosis. Two hundred fifty-six cattle were classified by origin and by the comparative tuberculin test as TB-positive animals (n = 52, from herds where the Mycobacterium bovis had previously been isolated), and TB-negative animals (n = 204, TB-free herds). The mean ADA seric value from the TB-positive group (4.45 ± 2.33 U/L) was significantly lower (p = 0.008) than that observed in sera from the TB-negative group (6.12 ± 4.47 U/L). When animals from a herd with clinical cases of enzootic bovine leukosis of TB-negative group were withdrawn from analysis, the mean ADA seric values of TB-negative group (5.12 ± 3.75 U/L) was not significantly different anymore from that of the TB-positive group (p = 0.28). There was no agreement in the diagnosis of bovine TB between comparative tuberculin test and determination of ADA seric values, using two different cutoff points, being 6.12 U/L and 15.0 U/L, (kappa = -0.086 and kappa = -0.082, respectively). In conclusion, the determination of ADA seric activity was not a good auxiliary test for bovine TB, because it was not able to distinguish between TB-positive and TB-negative animals.

Soroprevalência de aglutininas anti-Leptospira spp. em ovinos nas Mesorregiões Sudeste e Sudoeste do Estado Rio Grande do Sul, Brasil / Seroprevalence of agglutinins anti-Leptospira spp. in sheep from the Southeast and Southwest Mesoregions of the State of Rio Grande do Sul, Brazil

A presença de aglutininas anti-Leptospira spp. em 1360 amostras soros de ovinos, clinicamente sadios com mais de um ano de idade, criados extensivamente em 136 fazendas de 18 municípios; 10 na Mesorregião Sudeste e 8 na Mesorregião Sudoeste do Estado do Rio Grande do Sul, entre os meses de janeiro a março de 1999. Foi determinado pela Técnica de Aglutinação Microscópica (MAT), das 1360 amostras de soros testados, 466 (34,26 por cento) animais foram reagentes e os títulos de aglutininas anti-Leptospira spp. variavam de 100 a 3200. As sorovariedades encontradas foram: hardjo (Norma), 210 (28,4 por cento), sentot, 152 (16,8 por cento); hardjoprajitno, 133 (14,5 por cento); fortbragg 73 (6,3 por cento), wolffi, 39 (4,7 por cento); pyrogenes, 25 (1,8 por cento); australis, 21 (1,6 por cento); pomona, 20 (1,6 por cento); sejroe, 19 (2,2 por cento); castellonis, 18(1,8 por cento); hebdomadis, 17 (1,3 por cento); icterohaemorrhagiae, 16 (0,5 por cento); grippotyphosa, 9 (0,7 por cento); canicola, 8 (0,6 por cento); tarassovi, 7 (0,6 por cento), bratislava, 4 (0,29 por cento), autumnalis, 3 (0,2 por cento). Os resultados mostraram que as Leptospira spp. estão disseminadas na maioria das fazendas que criam ovinos nas Mesorregiões Sudeste e Sudoeste do Rio Grande do Sul.

A random sample survey of bovine Brucellosis in the State of Paraíba, Brazil

A serosurvey was conducted to estimate the prevalence of bovine brucellosis in the State of Paraíba, Brazil. A random sample of six municipalities was selected from each of three ecoregions of the State: the Agreste/Litoral region (1), the Cariri/Curimatau region (2) and the Sertão region (3). These 18 municipalities were divided in quadrants and one herd was selected at random from each quadrant. The sampling scheme included herds with more than 50 bovines, which excludes small-holder subsistence livestock production. At least 32 animals were sampled within each herd, stratified in four age categories, as follows: (1) at least 8 animals under 6 months of age, (2) at least 8 animals of 7 to 18 months of age, (3) at least 8 animals of 19 to 30 months of age and (4) at least 8 animals over 30 months of age. Antibodies to Brucella abortus were observed in 8 out of 18 municipalities (44.44 percent),in 8 out of 72 herds included in this study (11.11 percent) and in 8 animals out of 2343 samples collected (0.34 percent). The prevalence of test positive cattle by ecoregion/cattle production regions in the state showed no significant differences of risk among them. Likewise, there was no significant difference of risk among the different age categories studied. It was observed that brucellosis is widely spread across the state albeit with low animal prevalence. These results may be used in the design of a strategy for controlling bovine brucellosis in the State of Paraíba.

Foi realizado um estudo para a determinação da prevalência sorológica de brucelose bovina no Estado da Paraíba. Seis municípios foram selecionados aleatoriamente em cada uma das três ecorregiões do Estado: a região do Agreste/Litoral (1), a região do Cariri/Curimatau (2) e a região do Sertão (3). Estes 18 municípios foram divididos em quadrantes e uma propriedade foi selecionada em cada quadrante. Foram amostradas propriedades com mais de 50 animais, o que exclui as pequenas propriedades de subsistência. Pelo menos 32 animais foram amostrados de cada rebanho, estratificados nas quatro faixas etárias seguintes: (1) no mínimo 8 animais até 6 meses de idade, (2) no mínimo 8 animais com 7 a 18 meses de idade, (3) no mínimo 8 animais com 19 a 30 meses de idade e (4) no mínimo 8 animais com mais de 30 meses de idade. Anticorpos anti-B. abortus foram observados em 8 de 18 municípios (44,44 por cento), em 8 de 72 rebanhos (11,11 por cento) e em 8 animais dos 2343 amostrados (0,34 por cento). A análise dos resultados de prevalência por ecorregião do Estado não revelou diferença significativa de risco entre elas. A análise dos resultados por categorias de faixa etária também não evidenciaram diferença significativa de risco entre as mesmas. Foi observado que a brucelose está amplamente disseminada no estado embora com uma baixa prevalência animal. Estes resultados podem ser úteis no delineamento de estratégias de controle da brucelose bovina no estado da Paraíba.

Rotavírus do grupo A em bezerros lactentes no Estado de Minas Gerais / Group A rotavirus in calves in Minas Gerais State, Brazil

A freqüência de rotavírus do grupo A foi avaliada em 194 amostras de fezes de bezerros, com idade entre 2 e 60 dias, provenientes de 33 propriedades da bacia leiteira de Pará de Minas, Minas Gerais. Utilizando um sistema de ELISA monoclonal direto, 33 (17 porcento)destas amostras foram positivas para rotavírus do grupo A. Do total de animais positivos para rotavírus do grupo A, 60,6 porcento apresentavem diarréia no momento da coleta. Das 33 propriedades amostradas, a presença de rotavírus foi detectada em 19 (57,6 porcento). Dentre todas as amostras examinadas, somente 7 apresentaram simultaneamente rotavírus e Cryptosporidium spp