Identificação laboratorial da coqueluche na região do oeste do Estado de São Paulo / Laboratory identification of pertussis in the western region of São Paulo State, Brazil

O objetivo deste estudo foi de confirmar laboratorialmente os casos suspeitos de coqueluche na região oeste do Estado de São Paulo, ocorridos entre 2010 a 2015. A cultura foi realizada no Centro de Laboratório Regional - Instituto Adolfo Lutz de Presidente Prudente e a PCR em tempo real (qPCR) foi realizada no Centro de Referência Nacional para Pertussis – Instituto Adolfo Lutz em São Paulo, SP. Foram recebidas 189 amostras, sendo 29 (15,3%) confirmadas segundo os critérios laboratoriais (cultura e/ou qPCR). A faixa etária mais acometida foi em crianças menores de seis meses de idade (82,8%), não vacinados ou com o esquema de vacinação incompleto. Provavelmente, estes resultados representam apenas uma fração do número real de casos de coqueluche que ocorrem no Brasil. O contínuo monitoramento da doença e informações da prevalência por faixa etária são importantes ferramentas para melhorar as estratégias de imunização como forma de controlar esta doença reemergente.

The aim of this study was to confirm the suspected cases of pertussis in the Western region of the Sao Paulo State from 2010 to 2015. The samples were cultured in the Instituto Adolfo Lutz - Regional Laboratory of Presidente Prudente-SP, and the qPCR was performed at the National Reference Laboratory for Pertussis – Central Instituto Adolfo Lutz, São Paulo-SP. In this period, 189 samples were received, being 29 (15.3%) confirmed by the laboratory criteria (culture and/or qPCR). The most affected group was the children less than six months old (82.8%), not vaccinated or with the incomplete vaccination. Most likely, these results only represent a fraction of the actual number of pertussis cases occurring in Brazil. The continuous disease monitoring and the prevalence data by age group are fundamental to improve the immunization strategies as a way to control this important re-emerging disease.

Identificação laboratorial da coqueluche na região do oeste do Estado de São Paulo / Laboratory identification of pertussis in the western region of São Paulo, Brasil

O objetivo deste estudo foi de confirmar laboratorialmente os casos suspeitos de coqueluchena região oeste do Estado de São Paulo, ocorridos entre 2010 a 2015. A cultura foi realizadano Centro de Laboratório Regional - Instituto Adolfo Lutz de Presidente Prudente e a PCR emtempo real (qPCR) foi realizada no Centro de Referência Nacional para Pertussis – Instituto AdolfoLutz em São Paulo, SP. Foram recebidas 189 amostras, sendo 29 (15,3%) confirmadas segundoos critérios laboratoriais (cultura e/ou qPCR). A faixa etária mais acometida foi em criançasmenores de seis meses de idade (82,8%), não vacinados ou com o esquema de vacinação incompleto.Provavelmente, estes resultados representam apenas uma fração do número real de casos decoqueluche que ocorrem no Brasil. O contínuo monitoramento da doença e informações daprevalência por faixa etária são importantes ferramentas para melhorar as estratégias de imunizaçãocomo forma de controlar esta doença reemergente.

The aim of this study was to confirm the suspected cases of pertussis in the Western region ofthe Sao Paulo State from 2010 to 2015. The samples were cultured in the Instituto Adolfo Lutz -Regional Laboratory of Presidente Prudente-SP, and the qPCR was performed at the NationalReference Laboratory for Pertussis – Central Instituto Adolfo Lutz, São Paulo-SP. In this period,189 samples were received, being 29 (15.3%) confirmed by the laboratory criteria (culture and/orqPCR). The most affected group was the children less than six months old (82.8%), not vaccinatedor with the incomplete vaccination. Most likely, these results only represent a fraction of theactual number of pertussis cases occurring in Brazil. The continuous disease monitoring and theprevalence data by age group are fundamental to improve the immunization strategies as a way tocontrol this important re-emerging disease.

Pertussis characterization in the central-west region of São Paulo state, Brazil / Caracterização da coqueluche na região centro-oeste do Estado de São Paulo, Brasil

Pertussis is a highly contagious respiratory disease caused by Bordetella pertussis. This study aimed at characterizing the B. pertussis laboratory positivity and the isolated strains inmunicipalities of the Central-West Region of São Paulo State, Brazil from 2010 to 2014. A total of 597 nasopharyngeal swabs samples were collected from suspected patients and contacts, andanalyzed by in vitro culture and Real-Time PCR (qPCR). Culture-positive B. pertussis strains were characterized by serotyping and pulsed-field gel electrophoresis. Considering culture and/or qPCR, the positivity rate was of 19.6%. Out of 117 samples with B. pertussis, 23 were detected by both methods, 89 by qPCR only and five by culture only. Strains presenting FIM3 (40%), FIM2,3 (32%) and FIM2 (28%) serotypes were found. Five pulsotypes were detected by PFGE,48% of which identified as BP.Xba.0039, being the predominant type in this study. Among the positive strains, 50% were isolated from <2 months old-children and 17% were isolated from three to six months old patients. Non-vaccinated children or with incomplete vaccination schedule were at the major risk of complications and death, highlighting the importance of a continuous monitoring of this infection for the future control strategies.

A coqueluche é uma doença respiratória altamente contagiosa causada por Bordetella pertussis. Este estudo caracterizou a positividade de B. pertussis e as cepas isoladas em municípios da Região Centro-Oeste do Estado de São Paulo de 2010 a 2014. Foram coletados 597 esfregaços nasofaríngeos de pacientes e contatos suspeitos de coqueluche, e analisados por cultura e Real-Time PCR (qPCR). Os isolados de B. pertussis obtidos de cultura foram caracterizados por sorotipagem e eletroforese em gel de campo pulsado. Considerando-se a cultura e/ou qPCR, verificou-se taxa de positividade de 19,6%. Das 117 amostras positivas para B. pertussis, 23 foram detectadas por ambos os métodos, 89 apenas por qPCR e cinco apenas na cultura. Foram detectadas cepas de sorotipos FIM3 (40%), FIM2,3 (32%) e FIM2 (28%). Cinco pulsotipos foram detectados pela PFGE, e 48% identificados como BP.Xba.0039, o tipo predominante neste estudo. Entre as cepas positivas, 50% foram isoladas de crianças menores de dois meses e 17% isoladas da faixa etária de três a seis meses. Crianças não vacinadas ou com esquema de vacinação incompleta têm maior risco de complicações e óbito, o que ressalta a importância do monitoramento contínuo desta infecção para futuras estratégias de controle.

Pertussis characterization in the central-west region of São Paulo state, Brazil / Caracterização da coqueluche na região centro-oeste do Estado de São Paulo, Brasil

Pertussis is a highly contagious respiratory disease caused by Bordetella pertussis. This study aimed at characterizing the B. pertussis laboratory positivity and the isolated strains in municipalities of the Central-West Region of São Paulo State, Brazil from 2010 to 2014. A total of 597 nasopharyngeal swabs samples were collected from suspected patients and contacts, and analyzed by in vitro culture and Real-Time PCR (qPCR). Culture-positive B. pertussis strains were characterized by serotyping and pulsed-field gel electrophoresis. Considering culture and/or qPCR, the positivity rate was of 19.6%. Out of 117 samples with B. pertussis, 23 were detected by both methods, 89 by qPCR only and five by culture only. Strains presenting FIM3 (40%), FIM2,3 (32%) and FIM2 (28%) serotypes were found. Five pulsotypes were detected by PFGE, 48% of which identified as BP.Xba.0039, being the predominant type in this study. Among the positive strains, 50% were isolated from <2 months old-children and 17% were isolated from three to six months old patients. Non-vaccinated children or with incomplete vaccination schedule were at the major risk of complications and death, highlighting the importance of a continuous monitoring of this infection for the future control strategies.

A coqueluche é uma doença respiratória altamente contagiosa causada por Bordetella pertussis. Este estudo caracterizou a positividade de B. pertussis e as cepas isoladas em municípios da Região Centro-Oeste do Estado de São Paulo de 2010 a 2014. Foram coletados 597 esfregaços nasofaríngeos de pacientes e contatos suspeitos de coqueluche, e analisados por cultura e Real-TimePCR (qPCR). Os isolados de B. pertussis obtidos de cultura foram caracterizados por sorotipagem e eletroforese em gel de campo pulsado. Considerando-se a cultura e/ou qPCR, verificou-se taxa de positividade de 19,6%. Das 117 amostras positivas para B. pertussis, 23 foram detectadas por ambos os métodos, 89 apenas por qPCR e cinco apenas na cultura. Foram detectadas cepas de sorotipos FIM3 (40%), FIM2,3 (32%) e FIM2 (28%). Cinco pulsotipos foram detectados pela PFGE, e 48% identificados como BP.Xba.0039, o tipo predominante neste estudo. Entre as cepas positivas, 50% foram isoladas de crianças menores de dois meses e 17% isoladas da faixa etária de três a seis meses. Crianças não vacinadas ou com esquema de vacinação incompleta têm maior risco de complicações e óbito, o que ressalta a importância do monitoramento contínuo desta infecção para futuras estratégias de controle.

Plesiomonas shigelloides exports a lethal cytotoxic-enterotoxin (LCE) by membrane vesicles

ABSTRACT Plesiomonas shigelloides isolated from water in Brazil was previously described as a hemorrhagic heat-labile cytotoxic-enterotoxin producer. We purified this toxin from culture supernatants using ion metallic affinity chromatography (IMAC) followed by molecular exclusion chromatography. The pure toxin presented molecular mass of 50 kDa and isoelectric point (pI) around 6.9 by 2D electrophoresis. When injected intravenously, the purified cytotoxic-enterotoxin induced also severe spasms followed by sudden death of mice. Hence, we entitled it as lethal cytotoxic-enterotoxin (LCE). The presence of membrane vesicles (MVs) on cell surfaces of P. shigelloides was observed by scan electron microscopy (SEM). From these MVs the LCE toxin was extracted and confirmed by biological and serological assays. These data suggest that P. shigelloides also exports this cytotoxic-enterotoxin by membrane vesicles, a different mechanism of delivering extra cellular virulence factors, so far not described in this bacterium.

Diarrhea outbreak in Pernambuco, Brazil, associated with a heat-stable cytotoxic enterotoxin produced by Aeromonas caviae / O surto de diarreia em Pernambuco, Brasil é associado com uma enterotoxina citotóxica termo-estável produzida por Aeromonas caviae

SUMMARYIn the present study enterotoxic and cytotoxic activities of twenty Aeromonas caviaestrains were examined. They originated from fecal specimens of patients with acute diarrhea during an outbreak in Brazil in 2004. Culture supernatants of fourteen strains (70%) caused fluid accumulation in rabbit ileal intestinal loops and in suckling mice assays, and also showed a cytotoxic activity in Vero and Caco-2 cells. The enterotoxic and cytotoxic factors were heat-stable after culture supernatants treatment at 100 ºC. The results revealed that A. caviaestrains produce a putative diarrheagenic virulence factor, a heat-stable cytotoxic enterotoxin that could be linked to the diarrhea outbreak that took place in Brazil.

RESUMOEm 2004 ocorreu um surto de diarreia aguda no Estado de Pernambuco, Brasil. Setenta por cento (14 dos 20) dos sobrenadantes de cultura de Aeromonas caviae,isoladas neste episódio induziram acúmulo de líquido em testes de alça ligada de intestino de coelhos, assim como em teste em camundongos recém-nascidos. Os mesmos sobrenadantes mostraram também atividade citotóxica em células de Vero e Caco-2, mas não em células HeLa e HEp2. As atividades enterotóxicas e citotóxicas mantiveram-se mesmo após o aquecimento a 100 ºC dos sobrenadantes de cultura. Este trabalho revela a expressão de um provável fator diarreiogênico: uma enterotoxina-citotóxica termo-estável, produzida por A. caviaeque pode ser associada ao surto de diarreia ocorrido no Brasil. Atualmente estamos purificando esta enterotoxina termo-estável, com o objetivo de elucidar seu papel como fator de virulência na diarreia causada por A. caviae.