House dust mite fauna characterization in the city of Rio de Janeiro and its importance in allergy diagnosis / Caracterização da fauna dos ácaros de poeira na cidade do Rio de Janeiro e sua importância em diagnósticos de alergias

Introduction: The home environment is one of the most favorable spaces for the development of mites because of its low light, humidity, and temperature. Thus, it contributes to the growing cases of allergies among atopic individuals. Objective: To investigate the faunal profile of house dust mites in the city of Rio de Janeiro and the allergenic potential in this region. Methods: Thirty dust samples were collected from homes in the city of Rio de Janeiro, and the species found were classified according to their morphology, family, and genus by classification key. For the collection region, the total protein level was assessed by the Lowry method and electrophoresis under denaturing conditions (SDSPAGE). Results: There was a predominance of Pyroglyphidae mites, accounting for 84.9% of samples; Tyrophagus putrescentiae accounted for 8%, Blomia tropicalis for 6%, Cheyletus malaccensis for 1%, and Acarus siro for 0.1%. The allergen protein content of the samples was the following: group 1 ­ 25 kDa (Der 1, Der p 1, and Blo t 1), group 2 ­ 15 kDa (Der f 2, Der 2, Tyr p 2, and Blo t 2), and group 3 ­ 29-30 kDa (Der f 3 and Blo t 3), which indicates that people in this region are susceptible to sensitization to these mites. Conclusion: Knowledge of the mite fauna in the region under study allows the guidance of health care professionals to perform skin tests for specific mites and conduct treatment according to the pool of mite extracts containing antigens, making immunotherapy more effective.

Introdução: O ambiente domiciliar é um dos espaços favoráveis para o desenvolvimento de ácaros, tendo em vista a baixa luminosidade, umidade e temperatura, o que contribui para os crescentes casos de alergias em indivíduos atópicos. Objetivo: Investigar o perfil faunístico dos ácaros na cidade do Rio de Janeiro e o potencial alergêncio para essa região. Métodos: Foram coletadas 30 amostras de poeira em residências na cidade do Rio de Janeiro, e as espécies encontradas foram classificadas quanto à morfologia, família e o gênero por chave de classificação. Para as regiões das coletas, a carga total de proteínas contendo os alérgenos foi determinada pelo método de Lowry e eletroforese em condições desnaturantes (SDS-PAGE). Resultados: Os resultados mostram a predominância de 84,9% de ácaros da família Pyroglyphidae; para os demais ácaros o percentual corresponde a 8% Tyrophagus putrescentiae, 6% Blomia tropicalis, 1% Cheyletus malaccensis, e 0,1% de Acarus siro. O conteúdo proteico alergêncio constituinte das amostras foram, grupo 1: 25 kDa (Der 1, Der p 1 e Blo t 1); grupo 2: 15 kDa (Der f 2, Der 2, Tyr p 2 e Blo t 2); e para o grupo 3: 29-30 kDa (Der f 3 e Blo t 3), o que indica uma região passível à sensibilização de indivíduos por estes ácaros. Conclusão: O conhecimento da acarofauna nas regiões em estudo permite orientar a comunidade médica quanto à realização de testes cutâneos, além da terapêutica a partir do pool de extratos de ácaros contendo os antígenos, a fim de tornar a imunoterapia mais eficaz.

Evaluation of the action of precipitating agents to obtain allergenic proteins from crude mite extracts / Avaliação da ação de agentes precipitantes na obtenção de proteínas alergênicas presentes em extratos brutos de ácaros

Introduction: Allergen proteins found in dust mite extracts, such as Dermatophagoides farinae (DF), Dermatophagoides pteronyssinus (DP) and Tyrophagus putrescentiae (TP), are relevant for scientific studies in the allergy and immunotherapy fields. The precipitation/concentration of protein extracts may favor the aggregation of the allergens in homogenates. Objective and method: This paper investigates the precipitation process by submitting crude mite extracts to compounds such as ammonium sulfate (NH4)2SO4, trichloroacetic acid (TCA) and acetone. Results: The best results were obtained by fractionation with (NH4)2SO4 at 80% (w/v) saturation (~0° C), observing the protein markings on the electrophoresis gel. Major allergens were identified by immunoblot at 25 kDa (cysteine protease) for Der f and Der p; and 25 kDa, 30 kDa (tropomyosin) and Try p 3, near 26 kDa. For this percentage the total protein contents were 12.83 mg mL-1 for Der f, 24.78 mg mL-1 for Der p and 27.35 mg mL-1 for Try. Conclusion: An advantage of precipitation with (NH4)2SO4 over precipitation with acetone was the possibility of gradually obtaining protein fractions, which does not happen when using the latter. The addition of 80% (v/v) acetone to the mite extracts favored total protein precipitation in the concentrations 16.42 mg mL-1, 28.47 mg mL-1 and 13.41 mg mL-1. The use of TCA in concentrations above 20% (w/v) forms peptides that are not retained in the gel under the established experimental conditions, and dilute solutions of this acid are more efficient.

Introdução: As proteínas alergênicas presentes nos extratos dos ácaros de poeira, tais como Dermatofagoides farinae (DF), Dermatofagoides pteronyssinus (DP) e Tyrophagus putrescentiae (TP) são relevantes para estudos científicos na área de alergias e aplicação em imunoterapias. A precipitação/concentração desses extratos proteicos pode favorecer a agregação de alérgenos nos homogenatos. Objetivo e método: O trabalho investiga o processo de precipitação, submetendo os extratos brutos de ácaros de poeira a compostos como sulfato de amônio (NH4)2SO4, ácido tricloroacético (ATC) e acetona. Resultados: Os melhores resultados foram obtidos por fracionamento com (NH4)2SO4 em 80% (m/v) de saturação (~ 0°C), observando as marcações proteicas no gel de eletroforese. Os alérgenos principais foram identificados por immunoblot em 25 kDa (cisteína protease) para Der f 1 e Der p 1; e 25 kDa, 33 kDa (tropomyosin), 11 kDa para Tyr. Para esse percentual, os teores de proteína total foram de 12.83 mg mL-1 para DF; 24,78 mg mL-1 para DP; e 27,35 mg mL-1 para TP. Conclusão: A vantagem da precipitação com (NH4)2SO4 frente à precipitação com acetona foi a possibilidade de gradativamente se obter frações proteicas, o que não acontece quando utilizado esse solvente. A adição de 80% (v/v) de acetona aos extratos de ácaros favoreceu a precipitação total de proteína nas concentrações 16,42 mg mL-1; 28,47 mg mL-1; e 13,41 mg mL-1. O uso de ATC em concentrações acima de 20% (m/v) forma peptídeos que não são retidos no gel nas condições experimentais estabelecidas, sendo eficiente soluções mais diluídas desse ácido.

Immunological analysis of allergenic cross-reactivity between Cheyletus malaccensis and Dermatophagoides farinae, Dermatophagoides pteronyssinus and Blomia tropicalis / Análise imunológica da reatividade cruzada alergênica entre Cheyletus malaccensis e Dermatophagoides farinae, Dermatophagoides pteronyssinus e Blomia tropicalis

Objective: The mite Cheyletus malaccensis is cited in the literature as a predator of other mite species. Little is known about its protein composition, and few studies have evaluated its ability to trigger atopic respiratory allergic reactions. The present study aims to investigate the protein profile fingerprint present in Cheyletus malaccensis extract and to evaluate its immunologic reactivity in the presence of specific immunoglobulins (IgE) from the serum of individuals diagnosed with allergy to the mites Dermatophagoides farinae, Dermatophagoides pteronyssinus and Blomia tropicalis. These three species carry proteins responsible for the most cases of atopic respiratory allergies, hence the interest in comparing them to Cheyletus malaccensis. Methods: Samples of aspirated dust containing Cheyletus malaccensis were collected from households in the city of Rio de Janeiro, Brazil. From the collected mass of this mite, extracts were prepared for analysis. Proteins present in the extracts were identified by electrophoresis under denaturing conditions. Results: Proteins with a molecular mass of 24 kDa, 26 kDa, 12 kDa, 45 kDa and 70 kDa were visualized. The immunoblotting assay showed positive cross-reactivity for proteins of molecular mass ranging from 20 kDa to 45 kDa. These results indicate that specific links were established between IgE present in the serum of individuals allergic to the comparator mite and proteins from Cheyletus malaccensis. Conclusions: These findings are relevant for their potential clinical and immunotherapeutic applications, as well as information base for further studies.

Objetivo: O ácaro Cheyletus malaccensis é referido na literatura como um predador de outras espécies de ácaro. Pouco se sabe sobre sua composição proteica, e poucos estudos avaliaram sua habilidade de desencadear reações alérgicas respiratórias atópicas. O objetivo do presente estudo é investigar a impressão digital do perfil proteico presente em um extrato de Cheyletus malaccensis e avaliar sua reatividade imunológica na presença de imunoglobulinas (IgE) específicas do soro de indivíduos diagnosticados com alergia aos ácaros Dermatophagoides farinae, Dermatophagoides pteronyssinus e Blomia tropicalis. Essas três espécies carregam proteínas responsáveis pela maioria dos casos de alergias respiratórias atópicas, o que justifica o interesse em compará-las ao Cheyletus malaccensis. Métodos: Amostras de poeira aspirada contendo Cheyletus malaccensis foram coletadas de domicílios na cidade do Rio de Janeiro, no Brasil. A partir da massa coletada desse ácaro, extratos foram preparados para análise. As proteínas presentes nos extratos foram identificadas por eletroforese sob condições desnaturantes. Resultados: Proteínas com massa molecular de 24 kDa, 26 kDa, 12 kDa, 45 kDa e 70 kDa foram visualizadas. O ensaio imunoenzimático mostrou reatividade cruzada positiva para proteínas de massa molecular variando de 20 kDa a 45 kDa. Esses resultados indicam que ligações específicas foram estabelecidas entre a IgE presente no soro de indivíduos alérgicos ao ácaro usado como comparador e proteínas de Cheyletus malaccensis. Conclusões: Os achados são relevantes por seu potencial clínico e aplicações imunoterapêuticas, bem como sua base de informações para futuros estudos.

Study of protein profile and immunochemical reactivity for extracts of D. farinae, D. pteronyssinus and B. tropicalis mites in the city of Rio de Janeiro, Brazil / Estudo do perfil proteico e reatividade imunoquímica dos extratos dos ácaros D. farinae, D. pteronyssinus e B. tropicalis na cidade do Rio de Janeiro, Brasil

Objective: In tropical countries like Brazil, the mapping of protein constituents of mite extracts becomes relevant in the context of therapeutic evaluations of respiratory allergic diseases. In addition, this allows to set up an internal national database of the population's sensitization profile. Extracts are complex mixtures containing different proportions of biological materials, and the determination of their protein profile is necessary for an improved performance in diagnosis and therapy. Therefore, in this study, we used electrophoresis to characterize the protein constituents of B. tropicalis, D. farinae and D. pteronyssinus extracts, and evaluated the reactivity of specific immunoglobulins from atopic volunteers from the city of Rio de Janeiro, Brazil. Methods: Samples of the extracts were subjected to precipitation with acetone and applied to polyacrylamide gel 12.5%. After the electrophoretic run, samples were transferred to a 0.45 µm nitrocellulose membrane, followed by incubation with the serum pool. Bands related to antigenantibody reactivity were obtained by the colorimetric method, using peroxidase conjugated to secondary antibody. Results: The results obtained showed that protein precipitation favored the visualization of bands in the polyacrylamide gel; homogeneity was evidenced by experiment reproducibility and low standard deviation values. With regard to electrophoretic profile, the extracts showed specific proteins in their composition, with positive reactivity to the immunochemical test. Conclusion: One may infer that mite extracts in Brazil present different allergens when compared to extracts described in the American and European literature, warranting the development of new, specific criteria for extract standardization.

Objetivo: Em países tropicais, como o Brasil, o mapeamento dos constituintes proteicos de extratos de ácaros torna-se informação relevante quando se pretende fazer avaliações terapêuticas de doenças alérgicas respiratórias, além de contribuir para a construção de um banco de dados interno do país. Os extratos apresentam-se como misturas complexas contendo diferentes composições de material biológico, sendo necessária a determinação do seu perfil proteico para um melhor desempenho em diagnóstico e terapia. Assim, este estudo analisou a eletroforese das proteínas constituintes dos extratos de B. tropicalis, D. farinae e D. pteronyssinus e avaliou a reatividade das imunoglobulinas específicas de soros de voluntários atópicos da cidade do Rio de Janeiro, Brasil. Métodos: Amostras dos extratos foram submetidas a precipitação com acetona e aplicadas em gel de poliacrilamida 12,5%. Após a corrida eletroforética, as amostras foram transferidas para membrana de nitrocelulose de 0,45 µm, seguido da etapa de incubação com pool de soros. As bandas referentes à reatividade antígeno-anticorpo foram obtidas pelo método colorimétrico, utilizando-se a peroxidase conjugada a anticorpo secundário. Resultados: Os resultados obtidos mostraram que a precipitação proteica favoreceu a visualização das bandas no gel, mostrando sua homogeneidade pela reprodutibilidade dos experimentos e seu baixo desvio padrão. Também quanto ao perfil eletroforético, os extratos apresentaram proteínas específicas em sua constituição, tendo reatividade positiva ao teste imunoquímico. Conclusão: Pode-se inferir que os extratos de ácaros obtidos no Brasil apresentam alérgenos diferentes quando comparados com extratos proteicos apresentados na literatura americana e europeia, o que torna necessária a criação de critérios próprios de avaliação para padronização dos extratos.

Direct Intraoperative Reduction of Basilar Invagination Associated with Atlantoaxial Subluxation ­ Technical Note

In the present article, we describe a technique of direct intraoperative reduction of congenital atlantoaxial subluxation associated with severe basilar invagination and atlas assimilation. It consists of a wide dissection of the craniovertebral junction, exposing the region between the superior facet of C2 and the occiput (described as a "pseudoarticulation" by some authors). After exposure, a self-rotating small dissector or Kobe is used bilaterally, pushing C2 anteriorly and inferiorly, with reduction of the dislocation, followed by craniovertebral fixation. The technique is safe and eliminates the need for an anterior approach to the odontoid reduction, as well as the need to dissect the C1­2 joint.

Neste artigo, descrevemos a técnica de redução intraoperatória direta de subluxação atlantoaxial congênita associada a invaginação basilar grave e assimilação do atlas. Ela consiste em ampla dissecção da junção craniovertebral, expondo a região entre a face superior da C2 e o osso occipital (descrita como uma "pseudoarticulação" por alguns autores). Após exposição, um descolador pequeno ou Kobe é usado bilateralmente com rotação própria, deslocando C2 anterior e inferiormente, com redução da luxação, seguido de fixação craniovertebral. A técnica é segura e elimina a necessidade de uma abordagem anterior para a ressecção do odontoide, além de evitar a dissecação da junta C1­C2.