Immunological analysis of allergenic cross-reactivity between Cheyletus malaccensis and Dermatophagoides farinae, Dermatophagoides pteronyssinus and Blomia tropicalis / Análise imunológica da reatividade cruzada alergênica entre Cheyletus malaccensis e Dermatophagoides farinae, Dermatophagoides pteronyssinus e Blomia tropicalis

Objective: The mite Cheyletus malaccensis is cited in the literature as a predator of other mite species. Little is known about its protein composition, and few studies have evaluated its ability to trigger atopic respiratory allergic reactions. The present study aims to investigate the protein profile fingerprint present in Cheyletus malaccensis extract and to evaluate its immunologic reactivity in the presence of specific immunoglobulins (IgE) from the serum of individuals diagnosed with allergy to the mites Dermatophagoides farinae, Dermatophagoides pteronyssinus and Blomia tropicalis. These three species carry proteins responsible for the most cases of atopic respiratory allergies, hence the interest in comparing them to Cheyletus malaccensis. Methods: Samples of aspirated dust containing Cheyletus malaccensis were collected from households in the city of Rio de Janeiro, Brazil. From the collected mass of this mite, extracts were prepared for analysis. Proteins present in the extracts were identified by electrophoresis under denaturing conditions. Results: Proteins with a molecular mass of 24 kDa, 26 kDa, 12 kDa, 45 kDa and 70 kDa were visualized. The immunoblotting assay showed positive cross-reactivity for proteins of molecular mass ranging from 20 kDa to 45 kDa. These results indicate that specific links were established between IgE present in the serum of individuals allergic to the comparator mite and proteins from Cheyletus malaccensis. Conclusions: These findings are relevant for their potential clinical and immunotherapeutic applications, as well as information base for further studies.

Objetivo: O ácaro Cheyletus malaccensis é referido na literatura como um predador de outras espécies de ácaro. Pouco se sabe sobre sua composição proteica, e poucos estudos avaliaram sua habilidade de desencadear reações alérgicas respiratórias atópicas. O objetivo do presente estudo é investigar a impressão digital do perfil proteico presente em um extrato de Cheyletus malaccensis e avaliar sua reatividade imunológica na presença de imunoglobulinas (IgE) específicas do soro de indivíduos diagnosticados com alergia aos ácaros Dermatophagoides farinae, Dermatophagoides pteronyssinus e Blomia tropicalis. Essas três espécies carregam proteínas responsáveis pela maioria dos casos de alergias respiratórias atópicas, o que justifica o interesse em compará-las ao Cheyletus malaccensis. Métodos: Amostras de poeira aspirada contendo Cheyletus malaccensis foram coletadas de domicílios na cidade do Rio de Janeiro, no Brasil. A partir da massa coletada desse ácaro, extratos foram preparados para análise. As proteínas presentes nos extratos foram identificadas por eletroforese sob condições desnaturantes. Resultados: Proteínas com massa molecular de 24 kDa, 26 kDa, 12 kDa, 45 kDa e 70 kDa foram visualizadas. O ensaio imunoenzimático mostrou reatividade cruzada positiva para proteínas de massa molecular variando de 20 kDa a 45 kDa. Esses resultados indicam que ligações específicas foram estabelecidas entre a IgE presente no soro de indivíduos alérgicos ao ácaro usado como comparador e proteínas de Cheyletus malaccensis. Conclusões: Os achados são relevantes por seu potencial clínico e aplicações imunoterapêuticas, bem como sua base de informações para futuros estudos.

Study of protein profile and immunochemical reactivity for extracts of D. farinae, D. pteronyssinus and B. tropicalis mites in the city of Rio de Janeiro, Brazil / Estudo do perfil proteico e reatividade imunoquímica dos extratos dos ácaros D. farinae, D. pteronyssinus e B. tropicalis na cidade do Rio de Janeiro, Brasil

Objective: In tropical countries like Brazil, the mapping of protein constituents of mite extracts becomes relevant in the context of therapeutic evaluations of respiratory allergic diseases. In addition, this allows to set up an internal national database of the population's sensitization profile. Extracts are complex mixtures containing different proportions of biological materials, and the determination of their protein profile is necessary for an improved performance in diagnosis and therapy. Therefore, in this study, we used electrophoresis to characterize the protein constituents of B. tropicalis, D. farinae and D. pteronyssinus extracts, and evaluated the reactivity of specific immunoglobulins from atopic volunteers from the city of Rio de Janeiro, Brazil. Methods: Samples of the extracts were subjected to precipitation with acetone and applied to polyacrylamide gel 12.5%. After the electrophoretic run, samples were transferred to a 0.45 µm nitrocellulose membrane, followed by incubation with the serum pool. Bands related to antigenantibody reactivity were obtained by the colorimetric method, using peroxidase conjugated to secondary antibody. Results: The results obtained showed that protein precipitation favored the visualization of bands in the polyacrylamide gel; homogeneity was evidenced by experiment reproducibility and low standard deviation values. With regard to electrophoretic profile, the extracts showed specific proteins in their composition, with positive reactivity to the immunochemical test. Conclusion: One may infer that mite extracts in Brazil present different allergens when compared to extracts described in the American and European literature, warranting the development of new, specific criteria for extract standardization.

Objetivo: Em países tropicais, como o Brasil, o mapeamento dos constituintes proteicos de extratos de ácaros torna-se informação relevante quando se pretende fazer avaliações terapêuticas de doenças alérgicas respiratórias, além de contribuir para a construção de um banco de dados interno do país. Os extratos apresentam-se como misturas complexas contendo diferentes composições de material biológico, sendo necessária a determinação do seu perfil proteico para um melhor desempenho em diagnóstico e terapia. Assim, este estudo analisou a eletroforese das proteínas constituintes dos extratos de B. tropicalis, D. farinae e D. pteronyssinus e avaliou a reatividade das imunoglobulinas específicas de soros de voluntários atópicos da cidade do Rio de Janeiro, Brasil. Métodos: Amostras dos extratos foram submetidas a precipitação com acetona e aplicadas em gel de poliacrilamida 12,5%. Após a corrida eletroforética, as amostras foram transferidas para membrana de nitrocelulose de 0,45 µm, seguido da etapa de incubação com pool de soros. As bandas referentes à reatividade antígeno-anticorpo foram obtidas pelo método colorimétrico, utilizando-se a peroxidase conjugada a anticorpo secundário. Resultados: Os resultados obtidos mostraram que a precipitação proteica favoreceu a visualização das bandas no gel, mostrando sua homogeneidade pela reprodutibilidade dos experimentos e seu baixo desvio padrão. Também quanto ao perfil eletroforético, os extratos apresentaram proteínas específicas em sua constituição, tendo reatividade positiva ao teste imunoquímico. Conclusão: Pode-se inferir que os extratos de ácaros obtidos no Brasil apresentam alérgenos diferentes quando comparados com extratos proteicos apresentados na literatura americana e europeia, o que torna necessária a criação de critérios próprios de avaliação para padronização dos extratos.