Determinación de la mutación S315T del gen katG en aislados resistentes a Isoniacida de Mycobacterium tuberculosis mediante PCR-RFLP / Determination of S315T mutation within the katG gene in isoniazid-resistant Mycobacterium tuberculosis isolate by PCR-RFLP

Objetivo: determinar la mutación S315T del gen katG en aislados de Mycobacterium tuberculosis resistentes a isoniacida mediante la técnica PCR-RFLP. Materiales y métodos: A partir de 68 aislados de Mycobacterium tuberculosis se realizó el análisis de polimorfismo en productos de amplificación de 1054 y 630 pb que contenían la mutación S315T del gen katG mediante PCR-RFLP empleando las enzimas de restricción MspI y SatI. Mediante SPSS se determinó sensibilidad, especificidad, valores predictivo positivo y negativo, coeficientes de probabilidad positivo y negativo. Resultados: El 74,46% de aislados fenotípicamente resistentes y 4,76% fenotípicamente sensibles presentaron la mutación del gen katG S315T. La PCR-RFLP para S315T del gen katG presentó 85,4% de sensibilidad y 95,2% de especificidad con MspI y 85,4% de sensibilidad y 94,4% de especificidad con SatI. Discusión: La PCR-RFLP tiene una alta capacidad resolutiva que depende de la enzima que se emplee como se observó en estudios previos. La presencia de la mutación S315T en pacientes vírgenes al tratamiento sugiere la circulación de aislados resistentes a Isoniacida. Conclusión: La PCR-RFLP resultó una alternativa válida y rápida para el diagnóstico de la resistencia a isoniacida, mediante la detección de la mutación S315T del gen katG en comparación con el método convencional de las proporciones.

Objetive: To determine the S315T mutation of the katG gene in Mycobacterium tuberculosis isoniazid-resistant isolates by PCR-RFLP. Materials and Methods: Polymorphism analysis of 1054 and 630 bp products containing the S315T mutation of the katG gene was performed by PCR-RFLP using the MspI and SatI restriction enzymes from 68 Mycobacterium tuberculosis isolates. Sensitivity, specificity, positive and negative predictive values, positive and negative likelihood ratio were determined using SPSS. Results: 74.46% of isoniazid-resistant and 4.76% of isoniazid-sensitive isolates showed the S315T mutation in katG gene. The PCR-RFLP for S315T of the katG gene had 85.4% sensitivity and 95.2% specificity with MspI and 85.4% sensitivity and 94.4% specificity with SatI. Discussion: The PCR-RFLP has a high resolutive capacity that depends on the enzyme that is used as it was observed in previous studies. The presence of the S315T mutation in treatment-naive patients suggests the circulation of isolates resistant to isoniazid. Conclusion: PCR-RFLP is a valid and rapid alternative for the diagnosis of isoniazid resistance, by detection of S315T mutation in the katG gene compared to the conventional method of proportions.

Análisis genético de la resistencia a isoniacida en cepas de Mycobacterium tuberculosis / Genetic analysis of isoniazid resistance in strains of Mycobacterium tuberculosis

Objetivo: Analizar genéticamente la resistencia a Isoniacida en cepas de Mycobacterium tuberculosis mediante PCR-RFLP de la región S315T del gen katG. Materiales y métodos: El estudio se realizó a partir de cultivos positivos de Mycobacterium tuberculosis receptados en el Centro de Referencia Nacional de Micobacterias, durante el período 2013 ­ 2014. El ADN extraído fue cuantificado y evaluada su pureza, por espectrofotometría. Para determinar el polimorfismo en la región 315 del gen katG a partir de un producto de amplificación de 630 pb se realizó digestiones con las enzimas de restricción MspI y SatI. Resultados: Del total de 498 cepas analizadas, 215 cepas presentaron características fenotípicas de resistencia a isoniacida (32,6 % monorresistencia, 19,5 % MDR y 47,9 % polirresistencia), 283 cepas eran sensibles. 251 cepas correspondieron a pacientes vírgenes al tratamiento (VT); 174 fueron pacientes antes tratados (AT) y 73 fueron pacientes se encontraban con tratamiento (CT). La mayoría de los casos provenía de la provincia del Guayas (77,2 %). La PCR-RFLP-SatI presentó alto porcentaje de sensibilidad (98,6 %) y especificidad (98,2 %), mientras que con la enzima MspI el porcentaje de sensibilidad fue 88,8 % y 7,4 % de especificidad. Conclusión: La PCR-RFLP-SatI demostró ser específica y económica para la detección de resistencia a isoniacida, proporcionando resultados de forma rápida, la aplicación de esta técnica como apoyo para el diagnóstico permitiría al paciente acceder a un tratamiento más oportuno.

Objective: Genetically analyze the Isoniazid resistance in Mycobacterium tuberculosis cultures by PCR-RFLP of the S315T region of the atG. Materials and methods: The study was carried out in positive cultures of Mycobacterium tuberculosis, received at the National Reference Center of Mycobacteria, during the period 2013-2014. The DNA extracted was quantified and its purity was evaluated by spectrophotometry. To determine the polymorphism in the 315 region of the at G gene, digestions were made with the restriction enzymes MspI and SatI from a 630 bp amplification product. Results: Of 498 culture strains analyzed, 215 strains showed phenotypic characteristics of resistance to Isoniazid (32,6 % monoresistance, 19,5 % MDR and 47,9 % polyresistance) and 283 strains were sensitive. 251 strains corresponded to virgin patients to treatment (VT); 174 were patients before treated (AT) and 73 were patients treated (CT). The majority of cases came from the province of Guayas (77,2 %). The PCR-RFLP- SatI presented a high percentage of sensitivity (98,6 %) and specificity (98,2 %), while with the MspI enzyme the sensitivity percentage was 88,8 % and 7,4 % specificity. Conclusion: The PCR-RFLP SatI proved to be specific and economical for the detection of resistance to isoniazid, providing results quickly, the application of this technique as a support for the diagnosis would allow the patient to access a more timely treatment.

Utilidad de la Proteína Epididimal Humana 4 (HE4) en la detección de Cáncer de ovario / Usefulness of the Human Epididymis protein 4 (HE4) in the detection of ovarian cancer

Introducción: El cáncer de ovario epitelial aunque tiene baja prevalencia está considerado entre las malignidades ginecológicas más letales por su alta mortalidad. El interés en la detección temprana del cáncer de ovario como mecanismo para lograr la reducción de la mortalidad ha crecido con el descubrimiento de biomarcadores tumorales séricos asociados a tumores malignos. El presente estudio plantea determinar la eficacia del uso del biomarcador HE4 para la detección precoz de cáncer epitelial de ovario en estadios tempranos. Métodos: Se evaluaron pacientes con masas pélvicas entre abril de 2015 y marzo de 2016. Valores de sensibilidad, especificidad, predictivo positivo y negativo, razón de probabilidad positiva y negativa, y pruebas estadísticas fueron calculados para determinar la relación entre los estados menopáusicos, y los grupos de acuerdo con el resultado histológico (benigno, maligno y control) de HE4, CA125 y ROMA. Resultados: Ingresaron al estudio 53 pacientes. La proteína epididimal humana 4 - HE4 presentó un valor medio diferenciable que permite distinguir masas pélvicas malignas (HE4:7,19 (maligno) vs. 5,71 (benigno)), igualmente la combinación HE4 + ROMA presentan mayor sensibilidad y especificidad (S: 100 %; E: 94.29 %) que las combinaciones CA125 + HE4 y CA125 + ROMA (S: 80 % y 88.89 %; E: 75.76 % y 77.14 %). Conclusión: Los resultados sugieren que HE4 serviría como un biomarcador eficiente para la diferenciación de masas pélvicas en estadios tempranos y si se adiciona el estatus menopaúsico, e índice ROMA afianzaría los resultados, permitiendo la diferenciación del cáncer de ovario epitelial en estadios tempranos en el país.

Introduction: Although epithelial ovarian cancer (EOC) has a low prevalence, it is considered among the most lethal gynecological malignancies due to its high mortality. The interest in the early detection of ovarian cancer as a mechanism to achieve the reduction of mortality has grown with the discovery of serum tumor biomarkers associated with malignant tumors. The present study proposes to determine the efficacy of the use of the HE4 biomarker for the early detection of ovarian epithelial cancer in early stages. Methods: We evaluated 53 patients with pelvic masses between April 2015 and March 2016. Sensitivity, specificity, positive and negative predictive values, positive and negative likelihood ratio, and statistical tests were calculated to determine the relationship between menopausal states, and groups according to the histological result (benign, malignant and control) of HE4, CA125 and ROMA. Results: The human epididymal protein 4 - HE4 presented a differentiable mean value that allows to distinguish malignant pelvic masses (HE4: 7.19 (malignant) vs. 5.71 (benign)), likewise the combination HE4 + ROMA present greater sensitivity and specificity (S: 100%; E: 94.29 %) than combinations CA125 + HE4 and CA125 + ROMA (S: 80% and 88.89 %; E: 75.76 % and 77.14 %). Conclusion: The results suggest that HE4 would serve as an efficient biomarker for the differentiation of pelvic masses in early stages and if menopausal status is added, and ROMA index would strengthen the results, allowing the differentiation of epithelial ovarian cancer in early stages in the country.