Polymorphism in cytolytic pathway genes in patients with pediatric inflammatory multisystemic syndrome temporally associated with SARS-CoV-2 / Polimorfismos em genes da via citolítica em pacientes com síndrome inflamatória multissistêmica pediátrica temporariamente associada ao SARS-CoV-2

Introduction: Pediatric inflammatory multisystem syndrome temporally associated with SARS-CoV-2 (PIMS-TS) is a systemic hyperinflammatory disease that occurs in a small number of children after being infected with SARS-CoV-2. Macrophage activation syndrome, an aggressive condition characterized by the excessive inflammation and activation of well-differentiated macrophages, has been shown to occur in patients infected by SARS-CoV-2. Considering the clinical and pathophysiological similarities between these diseases, our main objective was to determine whether gene polymorphisms associated with macrophage activation syndrome were also present in patients with PIMS-TS. Methods: DNA from 10 pediatric patients with PIMS-TS (case group) and ten COVID-19 patients without PIMS-TS (control group) were genotyped by Real-time PCR analysis (TaqMan®) for single nucleotide polymorphisms (SNP) in four genes associated with macrophage activation syndrome: perforin 1 (PRF1), granzyme B (GZMB), syntaxin 11 (STX11), and syntaxin binding protein 2 (STXBP2). The SNP analysis was performed using the additive, dominant, and recessive models. Results: A significantly higher frequency of an SNP (C wild allele in rs6573910) in the GZMB gene was observed in both the additive and dominant models in the PIMS-TS group than controls. A borderline significant difference was also observed for the G allele in rs7764017 of the STX11 gene in the PIMS-TS group in the additive model. Conclusions: This study indicated the presence of two polymorphisms in genes associated with macrophage activation syndrome (GZMB and STX11) in patients who developed PIMS-TS. If the presence of these SNPs is validated in a larger number of PIMS-TS cases, they can be used as potential biomarkers for early identification of pediatric patients with a higher probability of developing PIMS-TS associated with SARS-CoV-2 infection.

Introdução: A síndrome multissistêmica inflamatória pediátrica temporariamente associada ao SARS-CoV-2 (SIMP-TS) é uma doença hiperinflamatória sistêmica que ocorre em um pequeno número de crianças após serem infectadas pelo SARS-CoV-2. A síndrome de ativação de macrófagos (SAM), uma condição agressiva caracterizada pela inflamação excessiva e ativação de macrófagos bem diferenciados, demonstrou ocorrer em pacientes infectados por SARS-CoV-2. Considerando as semelhanças clínicas e fisiopatológicas entre essas doenças, neste estudo o nosso principal objetivo foi determinar se polimorfismos gênicos associados à SAM também estavam presentes em pacientes com SIMP-TS. Métodos: DNA de dez pacientes pediátricos com SIMP (grupo caso) e dez pacientes COVID-19 sem SIMP (grupo controle) foram genotipados por análise de PCR em tempo real (tecnologia TaqMan®) para polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) em quatro genes selecionados associados com SAM: perforina 1 (PRF1), granzima B (GZMB), sintaxina 11 (STX11) e proteína de ligação de sintaxina 2 (STXBP2). A análise dos SNPs foi realizada utilizando o modelo aditivo, dominante e recessivo. Resultados: Uma frequência significativamente maior de um SNP (alelo selvagem C em rs6573910) no gene GZMB foi observada pelos modelos aditivo e dominante no grupo SIMP quando comparado aos controles. Além disso, uma significância limítrofe foi observada para o alelo G em rs7764017 do gene STX11 no grupo SIMP pelo modelo aditivo. Conclusões: Nosso estudo indicou a presença de dois polimorfismos em genes associados à SAM (GZMB e STX11) em pacientes que desenvolveram SIMP-TS. Uma vez validada a presença desses SNPs em um número maior de casos de SIMP-TS, eles podem ser usados como potenciais biomarcadores para a identificação precoce de pacientes pediátricos com maior probabilidade de desenvolver SIMP-TS associado à infecção por SARS-CoV-2.

Role of the NF-kB/parkin/vegfr-1 pathway associated with hypoxic-ischemic insult in germinal matrix samples of newborn infants / O papel da via NF-kB/parkin/vegfr-1 associada à agressão hipóxico-isquêmica em amostras de matriz germinativa de pacientes recém-nascidos

Abstract Objective: Given the high proliferative activity of germinal matrix and its direct correlation with hypoxemia, it is necessary to investigate the possible molecular regulation pathways, to understand the existing clinical relationship between the hypoxic-ischemic insult and the biomarkers NF-kB, AKT-3, Parkin, TRK-C and VEGFR-1. Methods: A hundred and eighteen germinal matrix samples of the central nervous system of patients who died in the first 28 days of life were submitted to histological and immunohistochemistry analysis to identify the tissue immunoexpression of those biomarkers related to asphyxia, prematurity, and death events within 24h. Results: A significantly increased tissue immunoexpression of NF-kB, AKT-3 and Parkin was observed in the germinal matrix of preterm infants. In addition, significantly decreased tissue immunoexpression of VEGFR-1 and NF-kB was observed in patients who experienced asphyxia followed by death within 24 hours. Conclusions: The results suggest a direct involvement between the hypoxic-ischemic insult and NF-kB and VEGFR-1 markers since a decreased immunoexpression of these biomarkers was observed in asphyxiated patients. Furthermore, it is suggested that there was not enough time for VEGFR-1 to be transcribed, translated and expressed on the surface of the plasma membrane. This temporality can be observed in the relationship between NF-kB expression and the survival time of individuals who died within 24 hours, suggesting that this factor is essential for the production of VEGFR-1 and, therefore, to carry out the necessary remodeling effect to neovascularize the affected region.

RESUMO Objetivo: Dada a alta atividade proliferativa da matriz germinativa e sua correlação direta com a hipoxemia, é necessário investigar as possíveis vias de regulação molecular para entender a relação clínica existente entre o insulto hipóxico-isquêmico e os biomarcadores NF-kB, AKT -3, Parkina, TRK-C e VEGFR-1. Métodos: Cento e dezoito amostras de matriz germinativa do sistema nervoso central de pacientes que faleceram nos primeiros 28 dias de vida foram submetidas a análise histológica e imuno-histoquímica para identificar a imunoexpressão tecidual desses biomarcadores relacionados a eventos de asfixia, prematuridade e óbito em 24 horas. Resultados: Observou-se uma imunoexpressão tecidual significativamente aumentada de NF-kB, AKT-3 e Parkin na matriz germinativa de prematuros. Além disso, constatou-se uma imunoexpressão tecidual significativamente diminuída de VEGFR-1 e de NF-kB em pacientes que apresentaram asfixia seguida de morte em 24 horas. Conclusões: Os resultados sugerem o envolvimento direto entre o insulto hipóxico-isquêmico e os marcadores NF-kB e VEGFR-1, visto que se observou uma imunoexpressão diminuída destes biomarcadores nos pacientes asfixiados. Além disso, sugere-se que não houve tempo suficiente para que o VEGFR-1 fosse transcrito, traduzido e expresso na superfície da membrana plasmática. Essa temporalidade pode ser observada na relação entre a expressão de NF-kB e o tempo de vida dos indivíduos que morreram em 24 horas, o que sugere que esse fator é essencial para a produção do VEGFR-1 e, portanto, para realizar o efeito remodelador necessário para neovascularizar a região afetada.

Histological evaluation of capsules formed by texturized silicone implants with and without polyester mesh coverage (Parietex®). A study on female rats

ABSTRACT Purpose To evaluate capsules formed by microtextured silicone implants with and without Parietex® mesh coverage histologically. Methods Sixty Wistar rats were divided in two groups (meshed and unmeshed). Each group was, then, divided into two subgroups for evaluation at 30 and 90 days. Capsules were analyzed based on hematoxylin and eosin (HE) and picrosirius staining. Results The number of fibroblasts, neutrophils and macrophages was similar among all subgroups. There was a higher lymphocyte reaction in the 30-day meshed group (p = 0.003). Giant cell reaction, granulation tissue and neoangiogenesis were similar among the subgroups. Synovial metaplasia was milder at 90-day in the unmeshed (p = 0.002) and meshed group (p < 0.001). Capsular thickness was significantly greater in the meshed samples (30-day p < 0.001 and 90-day p < 0.001). There was a similar amount of collagen types I and III in both groups. Conclusions The mesh-covered implants produced capsules similar to the microtextured ones when analyzing inflammatory variables. Synovial metaplasia was milder at 90 than at 30 days, and the capsular thickness was significantly greater in the meshed group. A similar amount of collagen types I and III was observed. Due to these characteristics, the mesh coverage did not seem to significantly affect the local inflammatory activity.

Lesões Plexiformes em Modelo Experimental de Hipertensão Arterial Pulmonar Induzida por Monocrotalina / Plexiform Lesions in an Experimental Model of Monocrotalin-Induced Pulmonary Arterial Hypertension

Resumo Fundamento O modelo de hipertensão arterial pulmonar induzida por monocrotalina (MCT) é um dos mais reproduzidos atualmente, apresentando como limitação a ausência de lesões plexiformes, manifestações típicas da doença grave em humanos. Objetivo Avaliar a gravidade da arteriopatia pulmonar induzida por MCT por meio dos achados anatomopatológicos pulmonares e cardíacos, evolução clínica e sobrevida em 37 dias. Métodos Foram utilizados 50 ratos machos Wistar divididos em quatro grupos, sendo um controle (n = 10). Os três grupos restantes foram submetidos à inoculação de MCT (60 mg/kg i.p.) e ficaram sob o seu efeito por 15 (n = 10), 30 (n = 10) e 37 dias (n = 20). Ao final de cada período, os animais foram sacrificados, obtendo-se tecidos pulmonar e cardíaco para análise anatomopatológica e morfométrica. Empregou-se o teste Kruskal-Wallis, considerando nível de significância de 5%. Resultados Nos pulmões dos animais MCT foram constatadas lesões referentes à arteriopatia pulmonar, incluindo muscularização das arteríolas, hipertrofia da camada média e lesões neointimais concêntricas. Lesões complexas foram observadas nos grupos MCT, descritas como plexiforme e do "tipo" plexiforme (plexiform-like). A hipertrofia do ventrículo direito foi constatada pelo aumento da espessura e diâmetro dos cardiomiócitos e pelo aumento significativo da espessura da parede do ventrículo direito (p<0,0000). Conclusão O modelo foi capaz de gerar arteriopatia pulmonar moderada-grave associada à hipertrofia do ventrículo direito secundária, com sobrevida de 50% em 37 dias. De nosso conhecimento, este estudo foi o primeiro a constatar a presença de lesões vasculares complexas, semelhantes às observadas em pacientes com hipertensão arterial pulmonar grave, em modelo isolado de MCT. (Arq Bras Cardiol. 2020; 115(3):480-490)

Abstract Background The monocrotaline (MCT)-induced pulmonary arterial hypertension model is one of the most reproduced today, presenting as a limitation the absence of plexiform lesions, typical manifestations of the severe disease in humans. Objective To evaluate the severity of MCT-induced pulmonary arteriopathy by pathological findings of lung and heart tissue samples, clinical course and 37-day survival. Methods Fifty male Wistar rats were divided into one of the four groups - control (CG) (n = 10) and three intervention (MCT) groups. The MCT groups received intraperitoneal injection (60 mg/kg) of MCT and remained exposed to the substance for 15 days (G15, n = 10), 30 days (G30, n = 10) and 37 days (G37, n = 20). At the end of each period, the animals were sacrificed, and pulmonary and cardiac tissues were collected for anatomopathological and morphometric analysis. The Kruskal-Wallis test was used, considering a level of significance of 5%. Results In the lungs of MCT animals, lesions related to pulmonary arteriopathy were found, including muscularization of the arterioles, hypertrophy of the middle layer and concentric neointimal lesions. Complex lesions were observed in MCT groups, described as plexiform and plexiform-like lesions. Right ventricular hypertrophy was evidenced by increased thickness and diameter of the cardiomyocytes and a significant increase in the right ventricular wall thickness (p <0.0000). Conclusion The MCT model was able to generate moderate-severe pulmonary arteriopathy associated with secondary right ventricular hypertrophy. The 37-day survival rate was 50%. To our knowledge, this study was the first to note the presence of complex vascular lesions, similar to those observed in patients with severe pulmonary arterial hypertension, in an isolated MCT model. (Arq Bras Cardiol. 2020; 115(3):480-490)

Effects of ultrasound and stretching on skeletal muscle contusion in rats: immunohistochemistry analysis / Efectos de ultrasonido y estiramiento en la contusión muscular esqueletal en ratas: análisis inmunohistoquímico

SUMMARY: The aim of this study was to evaluate the effects of stretching and therapeutic ultrasound (TUS) on desmin and laminin contents of rat muscle after contusion. Male Wistar rats (n = 35, 8-9 weeks of age, 271 ± 14g body weight) were divided into five groups: Control group (CG) (n= 03); Injured group (IG) (n= 8); Injured + ultrasound group (IUSG) (n= 8); Injured+stretching group (ISG) (n= 8); Injured +ultrasound + stretching group (IUSSG) (n= 8). The application of ultrasound started 72 hours after the contusion, using the 50 % pulsed mode, 0.5 W/cm2, 5 min, once a day, for five consecutive days. Passive manual stretching was started on the tenth day after injury, with four repetitions of 30 s each and 30 s rest between repetitions, once a day, five times per week, for a total of ten applications. After 22 days, the rats were euthanazied and the gastrocnemius of both limbs removed for desmin and laminin immunohistochemistry morphometric measurement. Analysis was conducted using ANOVA one way post-hoc Tukey to parametric data and Kruskall-Wallis for non-parametric data. The IUSSG animals showed a larger area of desmin than ISG (p<0.05). It was found a decrease in laminin comparing IUSG to IG. However, laminin area was higher in ISG than all groups (p<0.05). UST isolated or in combination with stretching influenced gastrocnemius regeneration in different manners. While stretching applied isolated enhanced gastrocnemius regeneration noticed by the increase in laminin area, in combination with TUS strengthened the muscle healing rising desmin area.

RESUMEN: El objetivo de este estudio fue evaluar los efectos del estiramiento y la ecografía en los contenidos de desmina y laminina del músculo de rata después de la lesión. Ratas Wistar macho (n = 35, 8-9 semanas de edad, 271 ± 14 g de peso corporal) se dividieron en cinco grupos: grupo de control (CG) (n = 03); Grupo lesionado (GL) (n = 8); Lesionado + grupo de ultrasonido (LGU) (n= 8); Lesionado + grupo de estiramiento (LGE) (n = 8); Lesionado + ultrasonido + grupo de estiramiento (LUGE) (n = 8). La aplicación de ultrasonido comenzó 72 horas después de la lesión, usando el modo pulsado al 50 %, 0,5W / cm2, 5 min, una vez al día, durante cinco días consecutivos. El estiramiento manual pasivo se inició el décimo día después de la lesión, con cuatro repeticiones de 30 seg cada una y 30 seg de descanso entre repeticiones, una vez al día, cinco veces por semana, para un total de diez aplicaciones. Las ratas fueron sacrificadas después de 22 días, y se extrajo el músculo gastrocnemio de ambos miembros para la medición morfométrica de desmina y laminina a través de inmunohistoquímica. El análisis se realizó utilizando ANOVA unidireccional Tukey post-hoc para datos paramétricos y Kruskall-Wallis para datos no paramétricos. Los animales LUGE mostraron un área mayor de desmina que LGE (p <0,05). Se encontró una disminución en la laminina comparando LGU con GL. Sin embargo, el área de laminina fue mayor en LGE que en todos los grupos (p <0,05). El tratamiento con ultrasonido aislado o en combinación con estiramiento influyó en la regeneración del músculo gastrocnemio de diferentes maneras. Si bien el estiramiento aplicado, en combinación con tratamiento de ultrasonido, fortaleció el área de desmina, la regeneración del músculo gastrocnemio mejoró por el aumento en el área de laminina aumentando la curación muscular.

Effects of chronic stretching on soleus muscle of Wistar female rats / Efectos del estiramiento crónico en el músculo sóleo de ratas hembras Wistar

The purpose of this study was to evaluate the chronic effects of stretching exercise on soleus muscle histomorphology and histomorphometry of young and aged rats. Thirty-eight female rats were divided into young control group (YCG, n=10;274±50 g); young stretching group (YSG, n=8;274±12 g); aged control group (ACG, n=10;335±39 g); and aged stretching group (ASG, n=10;321±32g). A mechanical apparatus was used to stretch muscle in 4 repetitions, 60 s each, 30 s interval between repetitions in each session, 3 times a week for 3 weeks. Twenty-four hours after the last stretching session, soleus muscle was removed for micromorphology and immunostaining analysis. Data analyses were performed with one-way ANOVA, post-hoc Tukey, or Kruskal-Wallis tests for parametric and nonparametric, respectively (p≤0.05). Muscle fiber cross-sectional area (MFCSA) of ACG was lower (18 %) compared to the YCG. Stretching increased MFCSA comparing YSG to YCG (5,681.15± 1,943.61 µm2 vs 5,119.84±1,857.73 µm2, p=0.00), but decreased comparing ASG to ACG (3,919.54± 1,694.65 µm2 vs 4,172.82±1,446.08 µm2, p=0.00). More serial sarcomere numbers were found in the YSG than YCG (12,062.91±1,564.68 vs 10,070.39±1,072.38, p=0.03). Collagen I and collagen III were higher in YSG than ASG (7.44±7.18 % vs 0.07±0.09 %, p=0.04) and (14.37 %± 9.54 % vs 5.51 %±5.52 %, p=0.00), respectively. TNF-a was greater in ASG than YSG (43.42 %±40.19 % vs 1.72 ± 2.02 %, p=0.00). Epimysium was larger in the YSG compared to YCG (201.83±132.07 % vs 181.09±147.04 %, p=0.00). After 3-week stretching the soleus muscles from aged rats were smaller than their younger counter-parts. Interestingly, while stretching appeared to positively affect young soleus muscle, the opposite was detected in the muscle of the aged rats.

El propósito de este estudio fue evaluar los efectos crónicos del ejercicio de estiramiento sobre la histomorfología e histomorfometría del músculo sóleo de ratas jóvenes y envejecidas. Se dividieron 38 ratas hembras en un grupo control joven (YCG, n = 10; 274 ± 50 g); grupo de estiramiento joven (YSG, n = 8; 274 ± 12 g); grupo control de edad (ACG, n = 10; 335 ± 39 g); y grupo estiramiento envejecido (ASG, n = 10; 321 ± 32 g). Se usó un aparato mecánico para estirar el músculo en 4 repeticiones, 60 s cada una, intervalo de 30 s entre repeticiones en cada sesión, 3 veces por semana, durante 3 semanas. Veinticuatro horas después de la última sesión de estiramiento, se extrajo el músculo sóleo para análisis de micromorfología e inmunotinción. Los análisis de datos se realizaron con pruebas ANOVA de una vía, Tukey post-hoc o Kruskal-Wallis para pruebas paramétricas y no paramétricas, respectivamente (p≤0,05). El área de la sección transversal de fibra muscular (MFCSA) de GCE fue menor (18 %) en comparación con el GCJ. El estiramiento aumentó ASTFM comparando GEJ con GCJ (5.681,15 ± 1.943,61 µm2 vs 5.119,84 ± 1.857,73 µm2, p = 0,00), pero disminuyó comparando GEE con GCE (3.919,54 ± 1.694,65 µm2 vs 4.172,82 ± 1.446,08 µm2, p = 0,00). Se encontraron más sarcómeros en serie en el GEJ que en el GCJ (12.062,91 ± 1.564,68 vs 10.070,39 ± 1,072.38, p = 0,03). El colágeno I y el colágeno III fueron más numerosos en GEJ que en GEE (7,44 ± 7.18 % vs 0,07 ± 0,09 %, p = 0,04) y (14,37 % ± 9,54 % vs 5,51 % ± 5,52 %, p = 0,00), respectivamente. TNF-α fue mayor en GEE que GEJ (43,42 % ± 40,19 % vs 1,72 ± 2,02 %, p = 0,00). El epimisio fue mayor en el GEJ en comparación con el GCJ (201,83 ± 132,07 % vs 181,09 ± 147,04 %, p = 0,00). Después de 3 semanas de estiramiento, los músculos sóleo de las ratas envejecidas eran más pequeños que sus contrapartes más jóvenes. Curiosamente, si bien el estiramiento pareció afectar positivamente el músculo sóleo joven, se detectó lo contrario en el músculo de las ratas envejecidas.

Conservation of both hematocrit and liver regeneration in hepatectomies: a vascular occlusion approach in rats / Hepatectomia hemoconservadora no rato: preservação do hematócrito e da regeneração hepática

ABSTRACT Background: Hepatectomies promote considerable amount of blood loss and the need to administrate blood products, which are directly linked to higher morbimortality rates. The blood-conserving hepatectomy (BCH) is a modification of the selective vascular occlusion technique. It could be a surgical maneuver in order to avoid or to reduce the blood products utilization in the perioperative period. Aim: To evaluate in rats the BCH effects on the hematocrit (HT) variation, hemoglobin serum concentration (HB), and on liver regeneration. Methods: Twelve Wistar rats were divided into two groups: control (n=6) and intervention (n=6). The ones in the control group had their livers partially removed according to the Higgins and Anderson technique, while the rats in the treatment group were submitted to BCH technique. HT and HB levels were measured at day D0, D1 and D7. The rate between the liver and rat weights was calculated in D0 and D7. Liver regeneration was quantitatively and qualitatively evaluated. Results: The HT and HB levels were lower in the control group as of D1 onwards, reaching an 18% gap at D7 (p=0.01 and p=0.008, respectively); BCH resulted in the preservation of HT and HB levels to the intervention group rats. BCH did not alter liver regeneration in rats. Conclusion: The BCH led to beneficial effects over the postoperative HT and serum HB levels with no setbacks to liver regeneration. These data are the necessary proof of evidence for translational research into the surgical practice.

RESUMO Racional: As hepatectomias compreendem considerável perda sanguínea e utilização de hemoderivados, o que diretamente estão relacionados com maior morbimortalidade. A hepatectomia hemoconservadora (HH) é modificação da técnica de oclusão vascular seletiva em hepatectomia. Ela pode ser alternativa cirúrgica para evitar ou diminuir o uso de hemoderivados no perioperatório. Objetivo: Avaliar os efeitos da HH sobre o volume globular (VG), concentração de hemoglobina (HB) e sobre a regeneração hepática em ratos. Métodos: Dois grupos de ratos Wistar foram constituídos: controle (n=6) e intervenção (n=6). Os do grupo controle foram submetidos à hepatectomia parcial de Higgins e Anderson e os do grupo Intervenção à HH. VG e HB foram medidos nos dias D0, D1 e D7. A relação peso do fígado/peso do rato foi calculada em D0 e D7. A regeneração hepática foi analisada qualitativamente e quantitativamente. Resultados: Houve diminuição dos níveis de VG e HB nos ratos do grupo controle a partir de D1, atingindo decréscimo de 18% em D7 (p=0,01 e p=0,008 respectivamente); a HH permitiu a manutenção dos níveis de VG e HB nos ratos do grupo intervenção. A HH não alterou a regeneração hepática. Conclusão: HH resultou em níveis maiores de VG e HB pós-operatórios sem alterar a regeneração hepática. Pode-se considerar estes dados como a prova necessária para a translação à pesquisa clinicocirúrgica.

Effects of probiotics supplementation on skin wound healing in diabetic rats / Suplementação perioperatória com probióticos na cicatrização de feridas cutâneas em ratos diabéticos

ABSTRACT Background: Chronic wounds in patients with Diabetes Mellitus often become incurable due to prolonged and excessive production of inflammatory cytokines. The use of probiotics modifies the intestinal microbiota and modulates inflammatory reactions. Aim: To evaluate the influence of perioperative supplementation with probiotics in the cutaneous healing process in diabetic rats. Methods: Forty-six rats were divided into four groups (C3, P3, C10, P10) according to the treatment (P=probiotic or C=control, both orally administered) and day of euthanasia, 3rd or 10th postoperative days. All rats were induced to Diabetes Mellitus 72 h before starting the experiment with alloxan. Supplementation was initiated five days before the incision and maintained until euthanasia. Scalpel incision was guided by a 2x2 cm mold and the wounds were left to heal per second-intention. The wounds were digitally measured. Collagen densitometry was done with Picrosirius Red staining. Histological parameters were analyzed by staining by H&E. Results: The contraction of the wound was faster in the P10 group which resulted in a smaller scar area (p=0.011). There was an increase in type I collagen deposition from the 3rd to the 10th postoperative day in the probiotic groups (p=0.016), which did not occur in the control group (p=0.487). The histological analysis showed a better degree of healing in the P10 group (p=0.005), with fewer polymorphonuclear (p<0.001) and more neovessels (p=0.001). Conclusions: Perioperative supplementation of probiotics stimulates skin wound healing in diabetic rats, possibly due to attenuation of the inflammatory response and increased neovascularization and type I collagen deposition.

RESUMO Racional: Feridas crônicas em pacientes diabéticos muitas vezes se tornam incuráveis devido à produção prolongada e excessiva de citocinas inflamatórias. A utilização de probióticos modifica a microbiota intestinal e modula reações inflamatórias. Objetivo: Avaliar a influência da suplementação perioperatória com probióticos no processo de cicatrização cutânea em ratos diabéticos. Método: Quarenta e seis ratos foram divididos em quatro grupos (C3, P3, C10, P10) conforme tratamento (P=probiótico ou C=controle, via oral) e dia de eutanásia: 3o ou 10o dia de pós-operatório. Todos os ratos foram induzidos ao diabete melito 72 h antes de iniciar o experimento com aloxana. A suplementação foi iniciada cinco dias antes da operação e mantida até a eutanásia. Foi realizada incisão com bisturi guiada por molde de 2x2 cm e a ferida foi deixada para cicatrizar por segunda intenção. As feridas foram medidas digitalmente. A densitometria de colágeno foi determinada com coloração picrosirius red. A histologia foi avaliada por coloração com H&E. Resultados: A contração da ferida foi maior no grupo P10, o que resultou em menor área cruenta (p=0,011). Houve aumento do colágeno tipo I do 3o para o 10o dia de pós-operatório no grupo P10 (p=0,016), o que não ocorreu no grupo controle (p=0,487). A análise histológica mostrou melhor grau de cicatrização no grupo P10 (p=0,005), com menos polimorfonucleares (p<0,001) e mais neovasos (p=0,001). Conclusões: A suplementação perioperatória de probióticos promove aceleração da cicatrização cutânea em ratos diabéticos, possivelmente por atenuar a resposta inflamatória e aumentar a neovascularização e a deposição de colágeno tipo I.

Alterações cardíacas em idosos com Chikungunya: revisão integrativa / Heart changes in elderly Chikungunya: integration review / Alteraciones cardíacas en idosos con Chikungunya: revisión integrativa

Objetivo: identificar, avaliar e transmitir novos dados e recomendações aos profissionais de saúde. Método: trata-se de uma revisão integrativa da literatura realizada nas bases Scopus, Cinahl, Ibecs, Medline e Lilacs. Resultados: inicialmente foram encontrados 248 artigos, após exclusão dos artigos que não se enquadraram nos critérios de inclusão foram selecionados 6. Conclusão: Concluímos que existe um alto índice de mortalidade em idosos por alterações cardíacas, associação elevada de comorbidades e recursos simples de diagnóstico nas fases das alterações cardíacas por Chikungunya. Torna-se necessário garantir uma maior atenção ao atendimento inicial e acompanhamento do idoso com esta arbovirose envolvendo melhores práticas na rotina da assistência clínica, ampliação do uso de exames cardiológicos de imagem e laboratoriais em unidades de saúde e de pesquisas científicas por parte dos profissionais de saúde

Objective: To identify, evaluate and transmit new data and recommendations to health professionals. Method: this is an integrative review of the literature performed in the bases Scopus, Cinahl, Ibecs, Medline and Lilacs. Results: 248 articles were initially found, after exclusion of the articles that did not meet the inclusion criteria, 6 were selected. Conclusion: We conclude that there is a high mortality rate in elderly patients due to cardiac alterations, a high association of comorbidities and simple diagnostic resources in the phases of cardiac changes by Chikungunya. It is necessary to ensure greater attention to the initial care and follow-up of the elderly with this arbovirose involving better practices in the routine of clinical care, expansion of the use of imaging and laboratory cardiology exams in health units and scientific research by the professionals of Cheers

Objetivo: identificar, evaluar y transmitir nuevos datos y recomendaciones a los profesionales de la salud. Método: se trata de una revisión integrativa de la literatura realizada en las bases Scopus, Cinahl, Ibecs, Medline y Lilacs. Resultados: inicialmente se encontraron 248 artículos, después de la exclusión de los artículos que no se encuadrar en los criterios de inclusión fueron seleccionados 6. Conclusión: Concluimos que existe un alto índice de mortalidad en ancianos por alteraciones cardíacas, asociación elevada de comorbilidades y recursos simples de diagnóstico en las las fases de las alteraciones del corazón por Chikungunya. Se hace necesario garantizar una mayor atención a la atención inicial y acompañamiento del anciano con esta arbovirosa involucrando mejores prácticas en la rutina de la asistencia clínica, ampliación del uso de exámenes cardiológicos de imagen y de laboratorio en unidades de salud y de investigaciones científicas por parte de los profesionales de la salud salud

Morphometric and molecular muscle remodeling after passive stretching in elderly female rats

OBJECTIVES: To determine the effects of three sessions of a passive stretching exercise protocol on the muscles of elderly female rats. METHODS: The effects of the stretching exercises on the soleus muscle were analyzed using immunohistochemistry [tissue inhibitors of matrix metalloproteinases (TIMP), the tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), and the gene expression levels using real-time PCR of the transforming growth factor-beta 1 (TGF-β1), collagen type 1 (COL1), and collagen type 3 (COL3)]. Fifteen 26-month-old female Wistar rats were randomly divided into two groups, namely, Stretching (SG, n=8) and Control (CG, n=7). The passive mechanical stretching protocol consisted of a set of 4 1-minute repetitions, with 30 seconds between each repetition (total treatment of 4 minutes), three times a week for 1 week. RESULTS: Immunohistochemical analysis revealed an increase of 71.4% in the TNF-α (p=0.04) gene expression levels for the SG and a 58% decrease in the TGF-β1 gene expression levels (p=0.005) in the SG compared to that in the CG. No significant differences were observed between the groups for the immunostaining of TIMP-1 or the gene expression levels of COL1 and COL3. CONCLUSION: Three sessions of static stretching reduced the gene expression level of TGF-β1, which, owing to its anti-fibrotic role, might contribute to the remodeling of the intramuscular connective tissue of the aging muscle. In addition, immunostaining revealed that TNF-α levels increased in the aging muscle tissue in response to stretching, indicating its effect on stimulating extracellular matrix degradation. These outcomes have important clinical implications in reinforcing the use of stretching exercises in the elderly, considering that the aging muscle presents an infiltration of connective tissue.

The first central nervous system autopsy in Southern Brazil / Primeira autópsia do sistema nervoso central no sul do Brasil

ABSTRACT Objective: The history of Anatomical Pathology in the state of Paraná, in southern Brazil, is closely linked with the foundation of the Universidade Federal do Paraná (UFPR). This study identified the first central nervous system (CNS) clinical autopsy performed by the Department of Anatomical Pathology of the UFPR. Methods: This study reviewed the autopsy report archives of the Hospital de Clínicas-UFPR from 1951 onward. The clinical anatomy interpretations of the autopsy report and possible etiologic agents were discussed. Result: The first adult clinical autopsy with CNS study was performed on April 23, 1952 on a 45-year-old man with lobar pneumonia with abscesses complicated by bacterial meningitis. Conclusion: This case was the first CNS clinical autopsy performed in the state of Paraná and, possibly, in southern Brazil. The death was due to an infectious disease, which was the main cause of death in Brazil in the 1950s.

RESUMO Objetivo: A história da Anatomia Patológica no Estado do Paraná, sul do Brasil, está ligada com a fundação da Universidade Federal do Paraná (UFPR). Este estudo identificou a primeira autópsia clínica do sistema nervoso central (SNC) realizada pelo Departamento de Anatomia Patológica da UFPR. Métodos: Foi realizada revisão dos arquivos dos relatórios de autópsia do HC-UFPR, desde 1951. As interpretações anátomo-clínicas do laudo da autópsia e os possíveis agentes etiológicos foram discutidas. Resultado: A primeira autópsia clínica em adulto com estudo do SNC foi realizada em 23 de abril de 1952. Um homem de 45 anos com pneumonia lobar com abscessos pulmonares, complicada com meningite bacteriana. Conclusão: Este caso é a primeira autópsia clínica em adulto com estudo do SNC do estado do Paraná e possivelmente do Sul do Brasil. A causa da morte foi devido a uma doença infecciosa, as principais causas de óbito no Brasil nos anos 50.

Comparative analysis of the histopathological and epidemiological profile of ductal and lobular breast carcinomas diagnosed at the Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná during the period 2008-2013 / Análise comparativa do perfil histopatológico e epidemiológico dos carcinomas ductal e lobular da mama diagnosticados no Hospital de Clínicas da Universidade Federal do Paraná entre 2008 e 2013

ABSTRACT Introduction: Breast cancer is the second leading cause of cancer death among women worldwide, and epidemiological studies may help understanding its mechanisms. Objective: To carry out a survey of the number of breast cancer cases diagnosed in a period of six years. Methods: The profile of breast cancers diagnosed in a tertiary hospital in Curitiba was compared with the literature, using a retrospective analysis of ductal/special types and lobular breast carcinoma reports issued between 2008 and 2013. Results: Three hundred twenty-seven (91.6%) cases of ductal/special types carcinoma and 30 (8.4%) cases of lobular carcinoma were diagnosed, totaling 357 samples. From these cases, 27 (7.5%) were carcinoma in situ (20 ductal and seven lobular) and 330 (92.4%) were invasive carcinoma (307 invasive ductal/special types and 23 lobular). The prevalence of breast cancer among women was 991% and the majority of patients were older than 50 years of age (67.2%). Regarding the União Internacional de Controle do Câncer/American Joint Committee on Cancer (UICC/AJCC) staging, 49.2% of the ductal/special types tumors were diagnosed in Stages I or II, while 56.6% of lobular carcinomas were diagnosed in Stages II or III/IV. Regarding the Nottingham score, most cases were intermediate grade (43.9%). A total of 61% of the tumors were estrogen receptor positive (ER+) and 54% were progesterone receptor positive (PR+). Moreover, 36.1% presented positive human epidermal growth factor receptor 2 (HER2+), a rate higher than that indicated by the literature. Conclusion: The breast carcinomas evaluated in this study presented a profile similar to that reported in the literature, with some peculiarities inherent to the local pathology service. Nevertheless, the low frequency of in situ cases indicates failure in early diagnosis.

RESUMEN Introducción: El cáncer de mama es la segunda causa de muerte por cáncer entre mujeres alrededor del mundo, y estudios epidemiológicospueden contribuir al entendimiento de sus mecanismos. Objetivos: Determinar el número de casos de carcinoma de mama diagnosticados en un período de seis anos. Método: El perfil de los carcinomas de mama diagnosticados en un hospital terciario de Curitiba ha sido comparado con aquel de la literatura, a través de análisis retrospectivo de historias de carcinoma de mama ductal/tipos especialesy lobulillar de pacientes atendidos entre los anos de 2008y 2013. Resultados: Se han diagnosticado 327 (91,6%) casos de carcinoma ductal/tipos especiales y 30 (8,4%) de carcinoma lobulillar, totalizando 357 muestras. De estos casos, 27 (7,5%) eran de carcinoma in situ (20 ductaly siete lobulillar) y 330 (92,4%), invasores (307 ductal invasor +tipos especialesy 23 lobulillar). La incidencia de tumores de mama en mujeres fue de 99,1%, siendo los pacientes, en su generalidad, mayores de50 anos (67,2%). Con respecto a la estadificación de Unión Internacional Contra el Cáncer/American Joint Committee on Cancer (UICC/AJCC), 49,2% de los tumores ductales + tipos especiales fueron diagnosticados en los estadios I o II, mientras 56,6% de los tumores lobulillares se concentraron en los estadios II o III/IV. En cuanto al sistema de Nottingham, gran parte de los casos era de grado intermediario (43,9%). Un total de 61% de los tumores era receptor de estrógeno positivo (RE+) y 54%, receptor de progesterona positivo (RP+). Por otro lado, 36,1% presentaron el receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano positivo (HER2+), tasa superior a la indicada en la literatura. Conclusión: Los carcinomas de mama evaluados en este estudio presentaron perfil semejante al expuesto en la literatura, con algunaspeculiaridades inherentes al servicio local. Sin embargo, la baja frecuencia de casos in situ indica fracaso en el diagnóstico precoz.

RESUMO Introdução: O câncer da mama éa segunda causa de morte por câncer entre as mulheres em todo o mundo, e estuáis epidemiológicos podem auxiliar no entendimento dos seus mecanismos. Objetivos: Realizar um levantamento do número de casos dos carcinomas da mama diagnosticados em um período de seis anos. Método: Foi comparado com a literatura o perfil dos carcinomas da mama diagnosticados em um hospital terciário de Curitiba, por meio da análise retrospectiva dos laudos de carcinomas da mama ductal/ tipos especiais e lobular de pacientes atendidos entre os anos de 2008 e 2013. Resultados: Foram diagnosticados 327 (91,6%) casos de carcinoma ductal/tipos especiais e30 (8,4%) de carcinoma lobular, totalizando 357 amostras. Desses casos, 27 (7,5%) eram de carcinoma in situ (20 ductal esete lobular) e330 (92,4%), invasores (307ductal invasor + tipos especiais e 23 lobular). Aprevalência de tumores da mama nas mulheres foi de 99,1%, tendo os pacientes, na sua maioria, mais de 50 anos (67,2%). Em relação ao estadiamento da União Internacional de Controle do Câncer/American Joint Committee on Cancer (UICC/AJCC), 49,2% dos tumores ductal + tipos especiais foram diagnosticados em estadio Iou II, enquanto 56,6% dos tumores lobular concentraram-se nos estadios II ou III/IV Quanto à escala de Nottingham, grande parte dos casos era de grau intermediário (43,9%). Um total de 61% dos tumores eram receptor de estrogênio positivo (RE+) e 54%, receptor de progesterona positivo (RP+). Por outro lado, 36,1% apresentaram receptor 2 de fator de crescimento epidermal humano positivo (HER2+), taxa superior à indicada pela literatura. Conclusão: Os carcinomas da mama avaliados neste estudo apresentaram perfil semelhante ao exposto na literatura, com algumas peculiaridades inerentes ao serviço local. Entretanto, a baixa frequência de casos in situ indica falha no diagnóstico precoce.

HER2-expressing breast tumors are associated with breast cancer stem-cell phenotype CD44+/CD24- / Tumores de mama que superexpressam HER2 estão associados ao fenótipo de células-tronco tumorais CD44+/CD24-

ABSTRACT INTRODUCTION: According to the cancer stem-cell theory, tumors originate from a small population of cancer stem cells, which lose the mechanism of self-regulation and begin to differentiate and proliferate indefinitely. The CD44+/CD24- phenotype may be considered a stem-cell marker in breast cancer. OBJECTIVE: To evaluate the correlation between CD44+/CD24- phenotype and different molecular subtypes of breast cancer in invasive ductal carcinoma samples. METHODS: The expression of CD44, CD44v6, and CD24 markers was investigated in 133 cases of invasive mammary carcinoma with immunohistochemistry. CD44+/CD24- phenotype was identified and correlated with the molecular subtypes and classical prognostic factors such as age, histological grade, tumor size, and lymph node status. RESULTS: Eighteen (14%) cases were positive for CD44+/CD24- (CD44+/CD24- or CD44v6+/CD24-) phenotype; among these, 11.1%, 27.8%, 38.9%, and 22.2% were luminal, luminal B-human epidermal growth factor receptor 2 (HER2), HER2, and triple-negative subtype, respectively. CD44+/ CD24- phenotype was more common in HER2 subgroup (p = 0.0197). CONCLUSION: CD44+/CD24- phenotype was correlated with molecular subtypes of breast cancer. The highest expression of CD44+/CD24- phenotype was reported in patients with HER2+ disease, a molecular subtype associated with more aggressive behavior and worse prognosis.

RESUMO INTRODUÇÃO: De acordo com a teoria das células-tronco tumorais, os tumores são originários de uma pequena população de células-tronco que perdem o mecanismo de autorregulação e começam a se diferenciar e proliferar indefinidamente. O fenótipo CD44+/CD24- pode ser considerado um marcador de células-tronco tumorais no câncer de mama. OBJETIVO: Avaliar a correlação entre o fenótipo CD44+/CD24- e os diferentes subtipos moleculares do câncer de mama em amostras de carcinoma ductal invasor. MÉTODOS: A expressão dos marcadores CD44, CD44v6 e CD24 foi investigada em 133 casos de carcinoma mamário invasor por meio de imuno-histoquímica. O fenótipo CD44+/CD24- foi identificado e correlacionado com os subtipos moleculares e os fatores prognósticos clássicos, como idade, grau histológico, tamanho do tumor e status do linfonodo. RESULTADOS: Dezoito (14%) casos foram positivos para o fenótipo CD44+/CD24- (CD44+/CD24- ou CD44v6+/CD24-), sendo 11, 1%, 27, 8%, 38, 9% e 22, 2% dos subtipos luminal, luminal B-human epidermal growth factor receptor 2 (HER2), HER2 e triplo negativo, respectivamente. O fenótipo CD44+/CD24- foi mais comum no subgrupo HER2 (p = 0, 0197). CONCLUSÃO: O fenótipo CD44+/CD24- foi correlacionado com os subtipos moleculares do câncer de mama. A maior expressão do fenótipo CD44+/CD24- foi encontrada em pacientes com doença HER2+, subtipo molecular associado a um comportamento mais agressivo e a um pior prognóstico.

Reduced immunohistochemical expression of CCN3 in vitiligo

Background: Defective adhesion seems to be involved in the chronic loss of melanocytes observed in vitiligo. Recent findings showed an association of genetic variants of an adhesion gene with vitiligo and reduced immunohistochemical expression of some adhesion molecules in vitiligo skin. Aims: To compare CCN3 immunohistochemical expression in lesional and non-lesional epidermis of individuals with vitiligo. Methods: A total of 66 skin specimens from 33 volunteers with vitiligo were analyzed by immunohistochemistry using anti-CCN3 antibodies. Absence of topical or systemic treatment for vitiligo over the previous 30 days and availability of an area of non-lesional skin for biopsy at least 15 cm away from any vitiliginous macules were the main inclusion criteria. Results: A significant reduction of CCN3 expression was observed in lesional skin as compared to non-lesional skin (P = 0.001). Limitations: Paraffin embedded skin samples do not allow investigation by molecular biology methods. Not all samples allowed analysis due to the lamina preparation technique. Complete clinical data was not available for all patients. Conclusion: Our results support the hypothesis of impaired cell adhesion in vitiligo suggested by genetic studies. The pattern of immunohistochemical expression suggests that vitiligo might be an epithelial disease and not just a melanocyte disorder.

Elaboração de um instrumento de avaliação cardíaca para pacientes idosos com chikungunya / Elaboration of a cardiac evaluation instrument for elderly patients with chikungunya

A infecção viral denominada Chikungunya, conhecida pelos africanos "aqueles que se dobram" antes caracterizada predominantemente por febre e artralgias severas tem, no entanto, apresentado manifestações atípicas graves e os fatores de risco, como comorbidades e idade superior a sessenta anos, determinam a gravidade da doença. Alterações graves seriam uma ou mais síndrome sistêmica requerendo monitoramento das funções vitais. Complicações cardíacas são apontadas como causas primeiras de óbito, independente de antecedentes de doenças cardiovasculares. A identificação de um perfil clínico e laboratorial relacionado às formas atípicas e graves constitui uma ferramenta de prognóstico fundamental para o reconhecimento precoce e manejo dos pacientes idosos

Biomarkers of cardio-renal syndrome in uremic myocardiopathy animal model / Biomarcadores de síndrome cardiorrenal em modelo animal de miocardiopatia urêmica

ABSTRACT Introduction: Cardio-renal syndrome subtype 4 (CRS4) is a condition of primary chronic kidney disease that leads to reduction of cardiac function, ventricular hypertrophy, and risk of cardiovascular events. Objective: Our aim was to understand the mechanisms involved on the onset of CRS4. Methods: We used the nephrectomy 5/6 (CKD) animal model and compared to control (SHAM). Serum biomarkers were analyzed at baseline, 4, and 8 weeks. After euthanasia, histology and immunohistochemistry were performed in the myocardium. Results: Troponin I (TnI) was increased at 4 weeks (W) and 8W, but nt-proBNP showed no difference. The greater diameter of cardiomyocytes indicated left ventricular hypertrophy and the highest levels of TNF-α were found at 4W declining in 8W while fibrosis was more intense in 8W. Angiotensin expression showed an increase at 8W. Conclusions: TnI seems to reflect cardiac injury as a consequence of the CKD however nt-proBNP did not change because it reflects stretching. TNF-α characterized an inflammatory peak and fibrosis increased over time in a process connecting heart and kidneys. The angiotensin showed increased activity of the renin-angiotensin axis and corroborates the hypothesis that the inflammatory process and its involvement with CRS4. Therefore, this animal study reinforces the need for renin-angiotensin blockade strategies and the control of CKD to avoid the development of CRS4.

RESUMO Introdução: A síndrome cardiorrenal (SCR) tipo 4 é uma afecção da doença renal crônica primária que leva a redução da função cardíaca, hipertrofia ventricular e risco de eventos cardiovasculares. Objetivo: O objetivo do presente estudo foi compreender os mecanismos envolvidos no surgimento da SCR tipo 4. Métodos: Um modelo animal de nefrectomia 5/6 (DRC) foi comparado a animais de controle (Placebo). Biomarcadores séricos foram analisados no início do estudo e com quatro e oito semanas de estudo. Após eutanásia, foram realizados exames histológicos e de imunoistoquímica no tecido miocárdico. Resultados: Troponina I (TnI) estava aumentada nas semanas quatro (S4) e oito (S8), mas o NT-proBNP não apresentou diferenças. O diâmetro maior dos cardiomiócitos indicava hipertrofia ventricular esquerda. Os níveis mais elevados de TNF-α foram identificados na S4 com redução na S8, enquanto fibrose foi mais intensa na S8. A expressão de angiotensina mostrou elevação na S8. Conclusões: TnI parece sugerir lesões cardíacas em consequência da DRC, porém o NT-proBNP não sofreu alterações por refletir alongamento. O TNF-α evidenciou um pico inflamatório e a fibrose aumentou ao longo do tempo devido ao processo de conexão entre rins e coração. A angiotensina mostrou aumento da atividade do eixo renina-angiotensina, corroborando a hipótese do processo inflamatório e seu envolvimento com SCR tipo 4. Portanto, o presente estudo em modelo animal reforça a necessidade de em adotar estratégias com bloqueadores de renina-angiotensina e controle da DRC para evitar o desenvolvimento de SCR tipo 4.

The role of Phosphatidylinositol 3 kinase (PI3K) and Cycloxygenase-2 (COX2) in carcinogenesis of colorectal polyps / O papel de PI3K e COX2 na carcinogênese de pólipos colorretais

ABSTRACT Objectives: Determine immunohistochemical expression of Phosphatase and tensin homolog (PTEN), Phosphatidylinositol 3 kinase (PI3K), Cycloxygenase-2 (COX2) and one proliferation marker (Ki67) in colorectal polyps and correlate with clinical and pathological data in search of carcinogenic pathways. Methods: The reports of 297 polyps diagnosed through endoscopy were reviewed for parameters including age, gender, prior colorectal cancer, the presence of multiple polyps, and polyps' location, appearance and size. Was conducted a microscopic morphometric computerized analysis of immunohistochemical expression using, the selected antibodies and correlated with clinical and pathological variables. Results: The tissue immunohistochemical expression was higher in right colon polyps for the proliferation marker and Phosphatidylinositol 3 kinase (p ≤ 0.0001 and 0.057 respectively). Cycloxygenase-2 and Phosphatase and tensin homolog demonstrated higher tissue immunoexpression in pedunculated polyps (p = 0.009 and 0.002 respectively). Cycloxygenase-2 exhibited higher immunoexpression in larger polyps (p = 0.005). Phosphatidylinositol 3 kinase, Cycloxygenase-2, Phosphatase and tensin homolog and the proliferation marker exhibited higher immunoexpression in high-grade dysplastic polyps (p = 0.031, 0.013, 0.044 and <0.001 respectively). Phosphatase and tensin homolog labeling was higher in polyps with high-grade dysplasia and lower in some of serrated lesions (p = 0.044). Conclusions: The greater expression of the proliferation marker and Phosphatidylinositol 3 kinase in the right colon may be related to right-sided colorectal carcinogenesis. The proliferation marker, Cycloxygenase-2 and Phosphatidylinositol 3 kinase results can be associated with progression of polyps to colorectal cancer. The higher Phosphatase and tensin homolog expression suggests its attempt to control the cell cycle.

RESUMO Objetivos: Determinar a expressão imuno-histoquímica de Fosfatase homóloga a tensina (PTEN), Fosfatidilinositol-3-cinase (PI3K), Ciclooxigenase-2 (COX2) e um marcador de proliferação (Ki67) em pólipos colorretais e correlacionar com dados clínicos e patológicos buscando sua correspondência na carcinogênese. Métodos: Revisados 297 pólipos diagnosticados através de endoscopia quanto a idade, gênero, história de câncer colorretal, número, localização, aparência e tamanho dos pólipos. Realizadas as avaliações morfométricas computadorizadas das expressões imuno-histoquímicas dos marcadores selecionados, que foram correlacionadas com variáveis clínicas e patológicas. Resultados: A expressão do marcador de proliferação e da Fosfatidilinositol-3-cinase foi maior nos pólipos do cólon direito (p = <0,0001 e 0.057 respectivamente). Ciclooxigenase-2 e Fosfatase homóloga a tensina demonstraram maior imunoexpressão em pólipos pediculados (p = 0,009 e 0,002, respectivamente). Ciclooxigenase-2 expressou mais em pólipos maiores (p = 0,005). Fosfatidilinositol-3-cinase, Ciclooxigenase-2, Fosfatase homóloga a tensina e o marcador de proliferação expressaram mais em pólipos com displasia de alto grau (p = 0,031, 0,013, 0,044 e <0,001, respectivamente). Fosfatase homóloga a tensina marcou mais pólipos com displasia de alto grau que lesões serrilhadas (p = 0,044). Conclusões: A maior expressão do marcador de proliferação e Fosfatidilinositol-3-cinase à direita pode estar relacionada à carcinogênese do lado direito do cólon. Os resultados do marcador de proliferação, Ciclooxigenase-2 e Fosfatidilinositol-3-cinase podem ser associados à progressão dos pólipos para câncer. A expressão aumentada de Fosfatase homóloga a tensina sugere tentativa de controle do ciclo celular.

The Effect of Mesenchymal Stem Cells on Fertility in Experimental Retrocervical Endometriosis / O efeito das células-tronco mesenquimais na fertilidade em endometriose retrocervical experimental

Abstract Purpose To evaluate the effect of mesenchymal stem cells (MSCs) on fertility in experimental retrocervical endometriosis. Methods A total of 27 New Zealand rabbits were divided into three groups: endometriosis, in which endometrial implants were created; mesenchymal, in which MSCs were applied in addition to the creation of endometrial implants; and control, the group without endometriosis. Fisher's exact test was performed to compare the dichotomous qualitative variables among the groups. The quantitative variables were compared by the nonparametric Mann-Whitney and Kruskal-Wallis tests. The MannWhitney test was used for post-hoc multiple comparison with Boniferroni correction. Results Regarding the beginning of the fertile period, the three groups had medians of 14±12.7, 40±5, and 33±8.9 days respectively (p = 0.005). With regard to fertility (number of pregnancies), the endometriosis and control groups showed a rate of 77.78%, whereas the mesenchymal group showed a rate of 11.20% (p = 0.015). No differences in Keenan's histological classification were observed among the groups (p = 0.730). With regard to the macroscopic appearance of the lesions, the mesenchymal group showed the most pelvic adhesions. Conclusion The use of MSCs in endometriosis negatively contributed to fertility, suggesting the role of these cells in the development of this disease.

Resumo Objetivo Avaliar o efeito das células-tronco mesenquimais sobre a fertilidade na endometriose retrocervical experimental. Métodos Um total de 27 coelhas da raça Nova Zelândia foram divididas em três grupos: endometriose, em que os implantes endometriais foram criados; mesenquimal, em que as células-tronco mesenquimais foram aplicadas complementarmente à criação implantes endometriais; e controle, sem endometriose. O teste exato de Fisher foi realizado para comparar variáveis dicotômicas qualitativas entre os grupos. As variáveis quantitativas foram comparadas pelos testes não paramétricos de MannWhitney e Kruskal-Wallis. O teste de Mann-Whitney foi utilizado para a comparação múltipla pós-hoc com correção de Boniferroni. Resultados em relação ao início do período fértil, os grupos endometriose, mesenquimal e controle tiveram medianas de 14±12,7; 40±5; e 33±8,9 dias, respectivamente (p = 0,005). Sobre a taxa de fertilidade (número de gravidezes), os grupos endometriose e controle mostraram uma taxa de 77,78%, enquanto o grupo mesenquimal mostrou uma taxa de 11,20% (p = 0,015). Não foram observadas diferenças na classificação histológica de Keenan entre os grupos (p = 0,730). No que diz respeito à aparência macroscópica das lesões, o grupo mesenquimal mostrou maiores adesões pélvicas. Conclusão O uso de células-tronco mesenquimais na endometriose contribuiu negativamente para a fertilidade, sugerindo o papel dessas células no desenvolvimento da doença.

Tissue immunostaining of growth, pro- and anti-apoptotic biomarkers in myocardial samples from newborns with hypoxic injury / Imunoexpressão tecidual de biomarcadores de crescimento, pró e antiapoptóticos, em amostras de miocárdio de recém-nascidos com lesão hipóxica

ABSTRACT Introduction: Despite the importance of cardiovascular diseases to population health, there is limited knowledge about how neonatal hypoxia, related or not with prematurity, may cause cell injury to cardiomyocytes in the neonatal period and what the consequences to adult life are. Objective: To analyze the tissue immunostaining of biomarkers involved in the process of cell death and growth in the myocardium of hypoxic newborns. Method: Human myocardium samples (left ventricle) from necropsies of hypoxic newborns were organized in multi-sample blocks and submitted to immunohistochemical reactions by the immunoperoxidase technique. The primary antibodies used were anti-B-cell lymphoma 2 (Bcl2)-associated X protein (BAX), anti-mitofusin-2 (Mfn2), anti-tumor necrosis factor receptor-associated protein 1 (TRAP1), anti-Bcl2, anti-angiotensin II, anti-serine/threonine (Akt) 1, anti-Akt2 and anti-Akt3. Tissue immunostaining data were correlated with clinical data (gender, weight, gestational age, first-minute and fifth-minute Apgar score, arterial blood pH and survival time) and pathological data (death cause and primary disease). Results: The average tissue immunostaining of BAX was 25.61%; TRAP1 was 7.86%, angiotensin II was 1.24%, Akt2 was 16.35% and Akt3 was 20.61%. The biomarkers Akt1, Mfn2 and Bcl2 presented very low or absent tissue immunostaining in most cases of this study. There was no correlation between the average biomarker tissue immunostaining and the survival time or any other clinical or pathological factor studied. Conclusion: These data seem to strengthen the coordinated action of the pro-apoptotic, anti-apoptotic and cell growth biomarkers in the myocardium of hypoxic newborns in order to determine the degree of lesion or cell death and the tissue recovery capacity.

RESUMO Introdução: Apesar da importância de novas descobertas em patofisiologia das doenças cardiovasculares para a saúde da população, ainda existe pouco conhecimento sobre como a hipóxia neonatal, relacionada ou não com a prematuridade, pode causar lesão celular nos cardiomiócitos no período perinatal e quais são as consequências para a vida adulta. Objetivo: Analisar a imunoexpressão tecidual de biomarcadores envolvidos no processo de morte e crescimento celular em miocárdio de recém-nascidos hipoxemiados. Método: Amostras de miocárdio humano (ventrículo esquerdo), provenientes de necrópsias de neonatos hipoxemiados, foram organizadas em blocos multiamostrais e submetidas a reações imuno-histoquímicas pela técnica da imunoperoxidase. Os anticorpos primários utilizados foram antilinfoma de células B tipo 2 (Bcl2), antiproteína X associada ao Bcl2 (BAX), antimitofusina 2 (Mfn2), antiproteína 1 relacionada com o receptor ao fator de necrose tumoral (TRAP1), antiangiotensina II, antiproteína quinase 1 (Akt1), antiproteína quinase 2 (Akt2) e antiproteína quinase 3 (Akt3). Os dados de imunoexpressão tecidual foram correlacionados com os dados clínicos (gênero, peso, idade gestacional, índice de Apgar do primeiro e quinto minuto, pH do sangue arterial e sobrevida) e anatomopatológicos (causa da morte e doença de base). Resultados: A média de imunoexpressão tecidual do BAX foi 25,61%; do TRAP1, 7,86%; da angiotensina II, 1,24%; do Akt2, 16,35%; e do Akt3, 20,61%. Os biomarcadores Akt1, Mfn2 e Bcl2 apresentaram imunoexpressão tecidual muito baixa ou ausente na maioria dos casos deste estudo. Não houve correlação da média de imunoexpressão tecidual dos biomarcadores com o tempo de sobrevida ou outro fator clínico ou anatomopatológico estudado. Conclusão: Esses dados parecem fortalecer a ação coordenada de biomarcadores pró e antiapoptóticos e de crescimento celular em miocárdio de recém-nascidos hipoxemiados a fim de determinar o grau de lesão ou morte celular e a capacidade de recuperação tecidual.

Immunohistochemical analysis of apoptosis and cell proliferation in lungs of premature infants with chronic lung disease (bronchopulmonary dysplasia) / Análise imuno-histoquímica da apoptose e proliferação celular em pulmões de prematuros com doença pulmonar crônica (displasia broncopulmonar)

ABSTRACT Introduction: The pathophisiology of chronic lung disease (CLD), clinically known as bronchopulmonary dysplasia is not clear. It is believed that protective mechanisms, such as the release of inflammatory mediators and the activation of apoptotic and/or proliferative processes are activated in the lung tissue of premature infants in an attempt to repair tissue injury caused by exposure to oxygen and mechanical ventilation. Objective: Assess the presence of apoptosis and cell proliferation in the lungs of premature infants with CLD, exposed to oxygen and/or mechanical ventilation, by analyzing the proteins expression: proliferating cell nuclear antigen (PCNA), phosphatase and tensin homolog (PTEN), B-cell lymphoma 2 (Bcl-2), tumor necrosis factor receptor family member (Fas), fas-associated protein with death domain (FADD), tumor necrosis factor receptor type 1-associated death domain protein (TRADD), Caspase 3 and Caspase 8. Material and methods: We analyzed 32 infants autopsies at gestational age of less than 34 weeks exposed to oxygen therapy. The study was divided into three groups: "classic" CLD, "new" CLD and "without" CLD. Immunohistochemical analysis was performed. Results and discussion: A higher proliferation rate was observed in infants with CLD suggesting that longer exposure to mechanical ventilation may stimulates cell proliferation. The PTEN and Caspase 8 expressions were higher in the "new" CLD group, compared to the "without" CLD group, indicating that the "new" CLD form is more susceptible to apoptosis. Conclusion: Apoptosis and cell proliferation are involved in the pathophisiology of CLD. The "new" CLD form is more susceptible to apoptosis, while cell proliferation is more evident in the groups with CLD.

RESUMO Introdução: A fisiopatologia da doença pulmonar crônica, clinicamente conhecida como displasia broncopulmonar (DBP), ainda é incerta. Acredita-se que mecanismos de proteção, como liberação de mediadores inflamatórios e ativação de processos apoptóticos e/ou proliferativos, são acionados no tecido pulmonar de prematuros na tentativa de reparar os danos teciduais causados pela exposição ao oxigênio e à ventilação mecânica. Objetivo: Avaliar a existência de apoptose e proliferação celular em pulmões de neonatos prematuros com DBP, expostos ao oxigênio e/ou à ventilação mecânica, por meio do estudo da expressão das proteínas: antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA), homólogo da fosfatase e tensina (PTEN), linfoma de células B 2 (Bcl-2), membro da família de receptor do fator de necrose tumoral (Fas), proteína de domínio de morte associada ao Fas (FADD), proteína do domínio de morte associada ao receptor do fator de necrose tumoral (TRADD), Caspase 3 e Caspase 8. Material e método: Foram analisadas 32 autópsias de recém-nascidos, com idade gestacional inferior a 34 semanas, expostos ao oxigênio. O estudo foi dividido em três grupos: DBP "clássica", DBP "nova" e "sem" DBP; realizou-se estudo imuno-histoquímico. Resultados e discussão: Um índice de proliferação mais elevado foi observado nos recém-nascidos com DBP, sugerindo que o maior tempo de exposição à ventilação mecânica pode estimular a proliferação celular. A expressão das proteínas PTEN e Caspase 8 foram maiores no grupo da DBP "nova" em relação ao grupo sem DBP, indicando que a DBP "nova" é mais suscetível à apoptose. Conclusão: A apoptose e a proliferação celular estão envolvidas na fisiopatologia da DBP, sendo a apoptose mais evidente no grupo com DBP "nova".