Evaluation of the serum biochemistry and histopathology of kidney and bladder of dogs with Leishmania sp. in their urine / Avaliação da bioquímica sérica e histopatologia de rim e bexiga de cães com Leishmania sp. na urina

The visceral establishment of Leishmania infantum in dogs may result in kidney and bladder tissue injury, with L. infantum ending up in urine. This study therefore aimed at investigating the presence of Leishmania sp. in urinary sediments, and correlating the results with those from renal and bladder serum biochemistry and histopathology. Thirty dogs with negative Nested-Polymerase Chain Reaction (PCR) for E. canis were used in the experiment, and were divided into three groups: control group (10 dogs), neither leishmaniasis nor clinical changes; group I (15 dogs), leishmaniasis but no Leishmania sp. in urine; and group II (5 dogs), leishmaniasis, as well as Leishmania sp. in urine. All animals were submitted to clinical, serological, and parasitological diagnosis for leishmaniasis, biochemical exams, and kidney and bladder histopathology. The parasite was also detected in the bladder imprint of one group II dog. Group II dogs presented with very low albumin concentrations, low albumin/globulin ratios, and kidney and bladder lesions. In the kidneys, hydropic degeneration, thickened Bowman's capsule, and thickening of the tubular capsule were detected in all dogs with positive urinary sediment. However, no significant difference in these renal changes was observed between groups. The intensity and distribution of bladder inflammatory infiltrates were significantly (p-value < 0.05, Kruskal-Wallis' and Dunn's tests) higher in group II dogs, compared with those of the other groups. The presence of Leishmania sp.in the urine of infected dogs appeared to be related to low serum albumin concentrations and more severe bladder lesions

O estabelecimento visceral de Leishmania infantum em cães pode resultar em lesões nos tecidos dos rins e da bexiga, favorecendo a chegando do parasito até a urina. Portanto, este estudo teve como objetivo investigar a presença de Leishmania sp. em sedimentos urinários e correlacionar os resultados com os achados de quantificações bioquímicas séricas e histopatologia de rim e bexiga. Trinta cães com Nested-Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) negativa para E. canis foram utilizados no experimento e foram divididos em três grupos: grupo controle (10 cães), negativos para leishmaniose e sem alterações clínicas; grupo I (15 cães), com leishmaniose, mas sem Leishmania sp. na urina; e grupo II (5 cães), com leishmaniose e com Leishmaniasp. na urina. Todos os animais foram submetidos a diagnóstico clínico, sorológico e parasitológico para leishmaniose, exames bioquímicos e histopatologia de rim e bexiga. O parasito foi detectado no imprimt de bexiga de um cão do grupo II. Os cães do grupo II apresentaram concentrações muito baixas de albumina, baixa relação albumina/globulina e lesões nos rins e na bexiga. Nos rins, foram detectadas degeneração hidrópica, espessamento da cápsula de Bowman e espessamento da cápsula tubular, em todos os cães com sedimento urinário positivo. No entanto, nenhuma diferença significativa nessas alterações renais foi observada entre os grupos. A intensidade e a distribuição dos infiltrados inflamatórios da bexiga foram significativamente (p-valor < 0,05, testes de Kruskal-Wallis e Dunn) maiores nos cães do grupo II, em comparação com a dos outros grupos. A presença de Leishmania sp. na urina de cães infectados parece estar relacionada a baixa concentração sérica de albumina e a lesões mais graves na bexiga.

Análise sociodemográfica e ambiental para ocorrência de anticorpos antiLeptospira em cães de Teresina, Piauí, Brasil / Sociodemographic and environmental analysis for the occurrence of anti-Leptospira antibodies in dogs of Teresina, Piauí, Brazil

Resumo A leptospirose é uma zoonose mundial cuja transmissão está interligada por múltiplos fatores na interface homem-animal-ecossistema. Objetivou-se com este estudo avaliar os fatores de risco para a ocorrência de anticorpos antiLeptospira em cães na capital Teresina (PI), e determinar sua distribuição espacial. Amostras sanguíneas de 558 cães foram submetidas à prova de Soroaglutinação Microscópica (SAM). Aplicou-se questionários semiestruturados para os proprietários dos cães e obteve-se a localização geográfica da residência para a sua projeção em mapas geográficos. A soroprevalência foi de 13,8%, no qual o sorogrupo mais frequente foi o Icterohaemorrhagiae com 49,2%. Foram considerados fatores de risco os cães com acesso à rua, o não recolhimento da vasilha de alimento e a baixa renda dos proprietários. Foi observado maior número de cães soropositivos no período chuvoso com 87,1%, sendo um possível fator de risco para a ocorrência de casos. A distribuição dos cães soropositivos na cidade se apresentou de forma dispersa, com predominância dos casos em área antropizada. Esses fatores de risco favorecem a ocorrência de anticorpos antiLeptospiraem cães, os quais podem ser fontes de manutenção do agente na cidade e reforça a necessidade de vigilância epidemiológica e ambiental na prevenção da leptospirose.

Abstract Leptospirosis is a worldwide zoonosis whose transmission is interlinked by multiple factors in the man-animal-ecosystem interface. This study aimed to evaluate the risk factors for the occurrence of anti-Leptospira antibodies in dogs in the capital Teresina (PI), and to determine their spatial distribution. Five hundred fifty-eight dog blood samples were submitted to the Microscopic Serum Agglutination (MSA) test. We applied semi-structured questionnaires to dog owners and obtained the area of residence for projection in geographical maps. Serum prevalence was 13.8%, in which the most common serovar was icterohaemorrhagiae, with 49.2%. Dogs with street access, failure to collect food bowl and low income of owners were risk factors. There was a higher number of seropositive dogs in the rainy season, with 87.1%, which is a probable risk factor for the occurrence of cases. The distribution of seropositive dogs was widely spread in the city, with predominance of cases in anthropized areas. These risk factors favor the occurrence of anti-Leptospira antibodies in dogs that are agent maintenance sources in the city and reinforce the need for epidemiological and environmental surveillance to prevent leptospirosis.

Occurrence of antibodies against Leptospira spp in dogs from Teresina, Piauí, Brazil / Ocorrência de anticorpos contra Leptospira spp em cães de Teresina, Piauí, Brasil

Leptospirosis is a systemic disease caused by the species of bacteria Leptospira spp., which affects human beings, domestic and wild animals. The present study searched the presence of antibodies against Leptospira spp. in the canine population of the city Teresina, Piauí, and the most common serovars. Blood samples from 425 stray dogs were collected in the local zoonosis center in Teresina from July 2010 to January 2012 and submitted to the Microscopic Seroagglutination Test (MAT). This study found an average infection rate of 17.41% (IC 95%; 13,8 ­ 21,0) by 11 different serovars; the four most frequent were Canicola (18.9%), Autumnalis (16.2%), Icterohaemorrhagiae (12.1%), and Butembo (12.1%). The questions raised in this study indicated the occurrence of Leptospira spp infection in dogs of Terezina- Piaui, Brazil.(AU)

A leptospirose é uma doença sistêmica causada por bactéria Leptospira spp. que afeta seres humanos, animais domésticos e selvagens. O presente trabalho investigou a presença de anticorpos anti-Leptospira spp. na população canina da cidade de Teresina-Piauí, e os respectivos sorovares predominantes. Amostras de sangue de 425 cães foram coletadas no Centro de Controle de Zoonoses de Teresina, no período de julho de 2010 a janeiro de 2012, e submetidas à prova de Soroaglutinação Microscópica (SAM). Este estudo encontrou uma taxa de infecção média com 17,41% (IC 95%; 13,8 ­ 21,0) e 11 sorovares reagentes, sendo os prevalentes Canicola (18,9%), Autumnalis (16,2%), Icterohaemorrhagiae (12,1%) e Butembo (12,1%). As questões levantadas neste estudo indicam a ocorrência de infecção por Leptospira spp em cães da cidade de Teresina-Piauí, Brasil.(AU)

Equídeos infectados por Leishmania (Leishmania) Infantum na área endêmica de Teresina, Piauí, Brasil / Equines infected by Leishmania (Leishmania) Infantum in the endemic area of Teresina, Piauí, Brazil

Objetivou-se com este estudo pesquisar infecção natural de equídeos por Leishmania sp em área endêmica de leishmaniose tegumentar americana de Teresina, Piauí, Brasil. As leishmanioses são causadas por protozoário hemoflagelado, intracelular integrante do gênero Leishmania. Clinicamente observa-se uma variedade de sinais desde lesões cutâneas até formas viscerotrópicas que são mais graves e potencialmente fatais. Constituem grande problema de saúde pública mundial. O cão é considerado o principal reservatório doméstico de leishmaniose visceral americana (LVA). No peridomicílio de moradias rurais, os equídeos, embora com menor relevância que os canídeos, podem se transformar em importante hospedeiro para este parasito. Coletou-se sangue periférico de 42 equídeos para pesquisa de DNA de leishmânia spp através da técnica de "nested" reação em cadeia de polimerase (PCR) com oligonucleotídeos flanqueando a região ribossomal internal transcribed spacer 1 (ITS'1). A confirmação da espécie foi realizada pela digestão do produto amplificado com enzima de restrição Hae III. Os animais não apresentavam sinal clínico sugestivo de nenhuma patologia, entretanto 21 (50%) foram PCR positivos para leishmaniose (14 equinos, quatro asininos e três muares). A digestão do produto da "nested" PCR permitiu identificar sequências de DNA de Leishmania (Leishmania) infantum, caracterizando a infecção como leishmaniose visceral americana (LVA). A presença de equídeos infectados com Leishmania (Leishmania) infantum sugere sua participação no ciclo de transmissão da leishmaniose visceral em Teresina, Piauí, Brasil.

This study aims to research natural Leishmania sp equine infection in an endemic American Tegumentary Leishmaniasis area of Teresina City, Piauí State, Brazil. Leishmania are caused by intracellular hemoflagellate protozoa of the gender Leishmania. Clinically we can observe a variety of signals since cutaneous injuries until viscerotropic types which are more severe and potentially fatal. They constitute a great worldwide public health problem. The dog is considered the main domestic reservoir of American Visceral Leishmaniasis (AVL). In the peridomicile of rural abodes, the equines, although with less relevance than canines, may become an important host for this parasite. Peripheral blood was collected from 42 equines for DNA research of leishmania spp through the technique of "nested" PCR with oligonucleotides flanking the region ITS'1. The confirmation of the species was performed by the digestion of the amplified product with restriction enzyme Hae III. The animals did not present any suggestive clinical pathology signal, however, 21 (50%) were PCR positive for Leishmaniasis (14 equines, four donkeys and three mules). The digestion of the product from "nested" PCR permitted to identify DNA sequences of Leishmania (Leishmania) infantum, characterizing the infection as American Visceral Leishmaniasis (AVL). The presence of infected equines with Leishmania (Leishmania) infantun suggests their participation in the cycle of visceral Leishmaniasis transmission in Teresina City, Piauí State, Brazil.

THE SERO-CONVERSION AND EVALUATION OF RENAL ALTERATIONS IN DOGS INFECTED BY Leishmania (Infantum) chagasi / Soro-conversão e avaliação das alterações renais em cães infectados por Leishmania (Infantum) chagasi

This study investigated the sero-conversion period in which dogs from endemic areas test positive for visceral leishmaniasis (VL) as well as the early post-infection period in which renal alterations are observed. Dogs that were initially negative for Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) were clinically evaluated every three months by serological, parasitological and biochemical tests until sero-conversion was confirmed, and six months later a subsequent evaluation was performed. Samples of kidney tissues were processed and stained with Hematoxylin and Eosin (H&E), Periodic Acid Schiff (PAS) and Masson’s trichrome stain and lesions were classified based on the WHO criteria. Of the 40 dogs that initially tested negative for VL, 25 (62.5%) exhibited positive serological tests during the study period. Of these 25 dogs, 15 (60%) tested positive within three months, five (20%) tested positive within six months and five (20%) tested positive within nine months. The dogs exhibited antibody titers between 1:40 and 1:80 and 72% of the dogs exhibited clinical symptoms. The Leishmania antigen was present in the kidneys of recently infected dogs. We found higher levels of total protein and globulin as well as lower levels of albumin in the infected dogs when compared to the control dogs. Additionally, infected dogs presented levels of urea and creatinine that were higher than those of the uninfected dogs. Glomerulonephritis was detected in some of the dogs examined in this study. These data suggest that in Teresina, the sero-conversion for VL occurs quickly and showed that the infected dogs presented abnormal serum proteins, as well as structural and functional alterations in the kidneys during the early post-infection period.

Este estudo investigou o período em que o cão torna-se positivo para leishmaniose visceral (VL) em área endêmica e as alterações renais no período recente pós-infecção. Cães negativos para VL foram avaliados clinicamente a cada três meses por testes sorológicos, parasitológicos e bioquímicos até a soro-conversão e seis meses após. Foram colhidos tecido renal de seis cães, submetidos a processamento de rotina e corados com HE, PAS e Masson e as lesões foram classificadas com base nos critérios da OMS. Dos 40 cães nagativos para VL, 25 (62,5%) apresentaram sorologia positiva durante o estudo. Desses, 15 (60%) tornaram-se positiva nos primeiros três meses, cinco (20%) tornaram-se positivas dentro de seis meses e cinco (20%) tornaram-se positivas dentro de nove meses. Os cães apresentavam títulos de anticorpos entre 1:40 e 1:80, e 72% mostraram sinais clínicos. Antígeno de Leishmania estava presente no rim. Foram encontrados níveis mais elevados de proteína total e globulina, e menores níveis de albumina em cães infectados quando comparados aos controles. Além disso, os cães infectados apresentaram níveis de uréia e creatinina maior do que os cães controles. Glomerulonefrite foi observada em cinco cães. Os resultados sugerem que em Teresina a soro-conversão para VL ocorre rapidamente e os cães apresentam proteínas séricas anormais e alterações na estrutura e função dos rins em um período recente pós-infecção.

Immunoactivation and immunopathogeny during active visceral leishmaniasis / Imunoativação e imunopatogenia durante leishmaniose visceral ativa

Visceral leishmaniasis is caused by protozoan parasites of the Leishmania donovani complex. During active disease in humans, high levels of IFN-γ and TNF-α detected in blood serum, and high expression of IFN-γ mRNA in samples of the lymphoid organs suggest that the immune system is highly activated. However, studies using peripheral blood mononuclear cells have found immunosuppression specific to Leishmania antigens; this poor immune response probably results from Leishmania antigen-engaged lymphocytes being trapped in the lymphoid organs. To allow the parasites to multiply, deactivating cytokines IL-10 and TGF-β may be acting on macrophages as well as anti-Leishmania antibodies that opsonize amastigotes and induce IL-10 production in macrophages. These high activation and deactivation processes are likely to occur mainly in the spleen and liver and can be confirmed through the examination of organ samples. However, an analysis of sequential data from studies of visceral leishmaniasis in hamsters suggests that factors outside of the immune system are responsible for the early inactivation of inducible nitric oxide synthase, which occurs before the expression of deactivating cytokines. In active visceral leishmaniasis, the immune system actively participates in non-lymphoid organ lesioning. While current views only consider immunocomplex deposition, macrophages, T cells, cytokines, and immunoglobulins by diverse mechanism also play important roles in the pathogenesis.

A leishmaniose visceral é causada por protozoários do gênero do complexo Leishmania donovani. Durante a doença ativa no homem são detectados altos níveis de IFN-γ e de TNF-α no soro, e elevada expressão de mRNA de IFN-γ em amostras de órgãos linfóides sugerindo um estado intensamente ativado do sistema imunológico. A visão atual, no entanto, refere-se à imunossupressão específica aos antígenos de Leishmania com base em estudos utilizando células mononucleares do sangue periférico; a explicação para sua resposta deficiente seria provavelmente porque os linfócitos compometidos com antígeno de Leishmania são sequestrados nos órgãos linfóides. Para permitir a proliferação do parasito, citocinas desativadoras IL-10 e TGF-β atuariam nos macrófagos, bem como os anticorpos anti-Leishmania opsonizando amastigotas e induzindo a produção IL-10 pelos macrófagos. Estes processos de intensa ativação e desativação provavelmente ocorreriam no baço e fígado, principalmente, e confirmados com amostras de órgãos. No entanto, analisando dados seqüenciais obtidos na leishmaniose visceral no hamster, sugere-se provável presença de fatores fora do sistema imunológico como responsável pela inativação inicial de sintase induzível do óxido nítrico que ocorre antes da expressão de citocinas desativadoras. Na leishmaniose visceral ativa o sistema imunológico participa ativamente na lesão de órgãos não linfóides. Contrária à visão existente que considera somente mecanismos de deposição de imunocomplexos, observa-se na patogenia a participação de macrófagos, células T, citocinas e imunoglobulinas por mecanismo alternativo.

Desenvolvimento e patogenia da glomerulonefrite na leishmaniose visceral em camundongo / Development and pathogeny of glomerulonephritis in visceral leishmaniasis in mouse

Foi estudado desenvolvimento e patogenia da glomerulonefrite em camundongos BALB/c infectados intraperitonealmente com Leishmania (L.) chagasi. Nós observamos hipercelaridade glomerular dos 7 aos 30 dias pós-infecção (PI). Foram observados depósitos de IgG no glomérulo aos 7 dias PI. A presença de células CD11+ e F4/80+ e a expressão de caspase 3 clivada aumentou progressivamente em glomérulos dos 7 aos 15 dias PI. As células T CD4+ e CD8+ foram detectadas em glomérulos no mesmo período. Os resultados sugerem que IgG e vários elementos celulares assim como um processo apoptótico ativo contribuem na patogenia da glomerulonefrite na leishmaniose visceral em camundongo / Development and pathogenesis of glomerulonephritis in BALB/c mice infected intraperitoneally with Leishmania (L.) chagasi were studied. We observed glomerular hipercellularity from 7 through 30 days post-infection (PI). IgG deposits were observed in glomeruli at 7 days PI. Presence of CD11+ and F4/80+ cells and cleaved caspase 3 expression increased progressivelly in glomeruli from 7 through 15 days PI. CD4+ and CD8+ T cells were detected in glomeruli in the same period. The results suggest that IgG and various cellular elements besides an active apoptotic process contribute in the pathogenesis of glomerulonephrisis in murine visceral leishmaniasis...

Imunomapeamento no diagnóstico das epidermólises bolhosas hereditárias distróficas / Immunomapping in the diagnosis of hereditary epidermolysis bullosa dystrophica

O objetivo deste estudo é mostrar as vantagens da técnica de imunomapeamento no diagnóstico das epidermólises bolhosas distróficas. Dos 37 doentes estudados realizou-se 28 exames anatomopatológicos, 23 exames de microscopia eletrônica de transmissão e 37 imunomapeamentos. Dos exames histopatológicos 3 foram compatíveis com epidermólise bolhosa simples (EBS) e 25 com os grupos das epidermólises bolhosas juncionais (EBJ) e das epidermólises bolhosas distróficas (EBD). Dos 19 exames de microscopia eletrônica de transmissão representativos, 2 foram compatíveis com EBS, 1 com EBJ e 16 com EBD. Nos imunomapeamentos 3 foram compatíveis com EBS, 3 com EBJ, 14 com EBD dominante (EBBD) e 17 com EBD recessiva (EBDR). O imunomapeamento pôde fazer a diferenciação dos dois grupos das EBD de forma mais fácil e de custo inferior ao da MET. Sabe-se que essa diferenciação pode ser feita pela MET, no entanto exige avaliação morfológica e quantificação das fibrilas de ancoragem, tornando esta técnica difícil, demorada e sujeita e erros por trabalhar com área restrita da zona da membrana basal