Uso de PCR Duplex para detecção dos genes femA e mecA e determinação da concentração inibitória mínima (CIM) em Staphylococcus aureus isolados de leite cru / Detection of femA and mecA genes in Staphylococcus aureus isolated from bovine raw milk using duplex PCR and determination of the minimum inhibitory concentration of the isolates

O objetivo deste trabalho foi de identificar Staphylococcus aureus e as linhagens resistentes à meticilina(MRSA) em amostras de leite cru bovino, por meio de métodos moleculares, e de determinar a concentração inibitória mínima (CIM) dos isolados. S. aureus pode apresentar linhagens resistentes à meticilina e a outros antimicrobianos utilizados na prática médico-veterinária. Foram analisadas 251 amostras de leite cru de tanques de expansão, procedentes de cinco mesorregiões produtoras de leite de Minas Gerais – Brasil. Por meio de PCR foi identificada a presença do gene femA em 278 isolados deS. aureus; e as linhagens MRSA foram determinadas pela presença do gene mecA. Os ensaios de PCR foram positivos para gene femA em 100 % dos isolados testados; e entre essas amostras 11 (3,95 %) apresentaram produto amplificado de 533 pb correspondente ao gene mecA. Para analisar a susceptibilidade dos isolados foi realizado o teste de CIM para nove substâncias antimicrobianas. Foram identificados 149 isolados deS. aureus que apresentaram CIM≤ 4 μg/mL para enrofloxacina, com 92,54 % de susceptibilidade, e 55 isolados testados para sulfametoxazol+trimetoprima, apresentaram CIM ≤ 2 μg/mL com 83,33 % de susceptibilidade. Estes antimicrobianos foram considerados os mais eficazes...

Antimicrobial resistance in Staphylococcus aureus isolated from mastitis in dairy herds from the state of Minas Gerais, Brazil / Resistência a antimicrobianos em Staphylococcus aureus isolados de mastite em bovinos leiteiros de Minas Gerais, Brasil

Staphylococcus aureus (S. aureus) stands out as one of the most common etiological agents of bovine mastitis, currently causing major economic losses to dairy farming. In order to evaluate the sensitivity of this micro-organism to antimicrobials, 352 isolates from 35 dairy herds located in the state of Minas Gerais were submitted to antibiogram tests, using the disc diffusion technique. Nitrofurantoin and the Associations of neomycin, bacitracin and tetracycline (NBT), as well as penicillin, nafcillin and dihydrostreptomycin (PND), showed 100% efficiency in vitro. There were low resistance rates in the group of cephalosporins, with values of 0, 0.28 and 0.40% for cefquimona, cephalothin, and ceftiofur, respectively. Among the aminoglycosides, there was 1.69% resistance to gentamicin and 3.35% for neomycin. The highest resistance was observed for polymyxin B (82%), followed by betalactams, ampicillin and penicillin, with resistance rates of 80.92 and 80.45%, respectively. Moderate levels of resistance were observed for tetracycline, lincomycin, cefoperazone and sulfazotrim. Among the tested isolates, 65 (18.15%), coming from 24 of the 35 herds studied, showed multidrug resistance (MAR index 5; 0.2). The results pointed out to high variation in antimicrobial resistance profiles and the occcurrence of multidrug resistance among some studied strains, highlighting the importance of [...]

Staphylococcus aureus (S. aureus) destaca-se como um dos agentes etiológicos mais frequentes da mastite bovina, que causa os maiores prejuízos econômicos à pecuária leiteira brasileira. Visando avaliar o perfil de sensibilidade deste agente aos antimicrobianos, 352 isolados provenientes de 35 rebanhos leiteiros localizados em Minas Gerais foram submetidos a testes de antibiograma, utilizando-se a técnica de difusão em disco. Nitrofurantoína, bem como as associações de neomicina, bacitracina e tetraciclina (NBT) e penicilina, nafcilina e dihidroestreptomicina (PND), apresentaram 100% de eficiência in vitro. Foram verificados baixos índices de resistência no grupo das cefalosporinas, com valores de 0, 0,28 e 0,40% para cefquimona, cefalotina e ceftiofur, respectivamente. Entre os aminoglicosídeos, observou-se 1,69% de resistência para gentamicina e 3,35% para a neomicina. O maior índice de resistência foi observado para polimixina B (82%), seguido pelos betalactâmicos, ampicilina e penicilina, com índices de resistência de 80,92 e 80,45%, respectivamente. Níveis intermediários de resistência foram observados para tetraciclina, lincomicina, cefoperazona e sulfazotrim. Entre os isolados testados, 65 (18,15%), oriundos de 24 dentre os 35 rebanhos estudados, apresentaram multirresistência (índice MAR 5; 0,2). Os resultados apontaram grande variação nos perfis de resistência aos [...]

Yeast mastite outbreak in a Brazilian dairy herd / Surto de mastite causado por leveduras em um rebanho brasileiro

This study aimed to describe an outbreak of bovine mastitis caused by yeast in a dairy herd located in the state of Minas Gerais, Brazil. Microbiological analysis of milk samples (106) of the infected mammary quarters of lactating cows showed that Corynebacterium bovis (43.48%) and yeasts from the genus Candida (29.35%) were the main agents isolated in the herd. C. albicans(33.34%), C. catenulate (22.23%) and C. glabrata (18.52%) were the species most commonly isolated. The high prevalence of yeast mastitis was associated with lack of training formilkers, repetitive intramammary treatment and poor teat hygiene prior to the intramammary infusion. Appropriate management measures, specific treatment with antifungal drugs and removal of chronically infected animals were effective for the control of mastitis outbreak.

O objetivo deste estudo foi descrever um surto de mastite bovina causada por leveduras em um rebanho leiteiro localizado no Estado de Minas Gerais, Brasil. Análises microbiológicas de amostras de leite (106) dos quartos mamários infectados de vacas em lactação demonstraram que Corynebacterium bovis (43,48%) e leveduras do gênero Candida (29,35%) foram os principais agentes isolados no rebanho. C. albicans (33,34%), C. catenulata (22,23%) e C. glabrata (18,52%) foram as espécies mais comumente isoladas. A elevada prevalência da mastite por leveduras foi associada à falta de treinamento dos ordenhadores, ao tratamento intramamário repetitivo e a falhas na higienização de tetas antes da infusão intramamária. Medidas adequadas de manejo, tratamento específico com drogas antifúngicas e descarte de animais cronicamente infectados foram eficazes para o controle do surto.

Caracterização de Staphylococcus coagulase-positiva utilizando plasmas de diferentes espécies animais / Characterization of coagulase-positive Staphylococcus by using plasmas from different animal species

No presente estudo foi avaliada a eficiência de plasmas de origens leporina, bovina, equina, canina e humana na execução do teste de coagulase em cepas de Staphylococcus spp. isoladas de bovinos (n=174),de seres humanos (n=71) e de cães (n=70). As leituras dos testes foram realizadas após diferentes tempos de incubação. O plasma leporino apresentou os melhores resultados, exceto nos isolados bacterianos de cão, para os quais o plasma de equíno foi o que demonstrou os melhores resultados entre 4 e 12 horas de incubação. Nenhum isolado que tenha apresentado resultado negativo frente ao plasma leporino reagiu positivamente aos demais plasmas. Os plasmas de coelho e de cavalo foram os que revelaram os melhores resultados para os isolados bacterianos de origem humana e bovina. Verificou-se que os plasmas, quando utilizados para isolados da espécie homóloga, mostraram baixa eficiência. A coagulação do plasma leporino ocorreu em até duas horas de incubação em 92 por cento das amostras de Staphylococcus de origem bovina. De acordo com os resultados obtidos, o plasma de equino pode ser utilizado para a realização de testes de coagulase em cepas de Staphylococcus isoladas de cães, bovinos e seres humanos, com resultados semelhantes àqueles observados com o plasma leporino.

Mastites clínicas e subclínicas em bovinos leiteiros ocasionadas por Staphylococcus coagulase-negativa / Dairy cattle with clinical and subclinical mastitis caused by coagulase negative Staphylococcus

Os objetivos deste estudo foram avaliar a participação de Staphylococcus coagulase-negativa (SCN) na etiologia da mastite em rebanhos bovinos leiteiros da região sul de Minas Gerais, identificar as espécies bacterianas envolvidas e traçar os perfis de susceptibilidade destas às drogas antimicrobianas. Foram analisadas 2.492 vacas de 35 rebanhos, sob diferentes sistemas de manejo, no período de 2004 a 2008. Os índices de mastite clínica e subclínica foram de 9,87 e 52,2, respectivamente. Foram cultivadas 1.645 amostras de leite de quartos mamários individuais, e 120 cepas de SCN foram isoladas. A frequência média de isolamentos de SCN entre os rebanhos foi de 8,35, com variações de a 27,27. Observou-se grande diversidade de espécies de SCN, sendo as mais frequentes Staphylococcus hyicus (15,0), Staphylococcus chromogenes (12,5), Staphylococcus gallinarum (12,5), Staphylococcus lentus (12,) e Staphylococcus epidermidis (10,). Os testes de antibiograma apontaram que 28 dos isolados eram resistentes à penicilina, 2 à estreptomicina,1 à ampicilina e 1 à tetraciclina. Todas as amostras isoladas apresentaram 10 de sensibilidade frente a danofloxacina, enrofloxacina e florfenicol. Baixa frequência de amostras multirresistentes às drogas antimicrobianas foi observada na população estudada.

Evaluation of a simplified key for the identification of coagulase-positive Staphylococcus isolated from bovine mastitis / Avaliação de uma chave de identificação simplificada para Staphylococcus coagulase-positivos isolados de mastite bovina

Evaluation of a simplified key for the identification of coagulase-positive Staphylococcus isolated from bovine mastitis. Three hundred fourty four strains of coagulase-positive Staphylococcus (CPS), isolated from mastitis cases, underwent phenotypic and genotypic tests to evaluate the efficiency of a simplified key, based on phenotypic tests for the discrimination of these microorganisms. The tests consisted of amplification of the femA gene and hemolysis in blood agar, production of acetoin and fermentation of maltose, mannitol and trehalose. Strains that showed negative results in the amplification test of the femA gene or that were not identified as Staphylococcus aureus (S. aureus) by phenotypic tests were tested with the APISTAPH kit (Biomériux-France), for precise identification of species. Phenotypic tests revealed 338 strains (98.25%) as S. aureus, three strains (0.86%) as Staphylococcus hyicus, and three microorganisms (0.86%) as Staphylococcus intermedius. PCR demonstrated that 338 (98.25%) strains belonged to the S. aureus species, confirming the results for 336 strains from 338 identified, through a simplified phenotypic key. A high rate of correlation (98.83%) was verifeid between the results of genotypic and phenotypic tests for the identification of S. aureus, demonstrating the applicability of the proposed key, for the discrimination of this microorganism in CPS isolated from bovine mastitis.

Visando testar a eficiência de uma chave simplificada baseada em testes fenotípicos para a discriminação de Staphylocococcus coagulase positivos (SCP) isolados de infecções intramamárias de bovinos, 344 amostras destes microrganismos foram submetidas a testes fenotípicos e genotípicos. Estes consistiram na amplificação do gene femA, na observação de hemólise em ágar sangue, produção de acetoína e fermentação de maltose, manitol e trealose. Amostras que apresentaram resultado negativo na amplificação do gene femA ou que foram identificadas com não Staphylococcus aureus (S. aureus) por meio dos testes fenotípicos foram submetidas ao kit APISTAPH (Biomériux-França) para identificação mais precisa. Os testes fenotípicos utilizados na chave simplificada permitiram identificar 338 amostras (98,25%) como S. aureus, três amostras (0,86%) como Staphylococcus hyicus e três (0,86%) como Staphylococcus intermedius. Por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR) 338 (98,25%) amostras foram identificadas como S. aureus, ratificando os resultados para 336 das 338 amostras identificadas por meio da chave fenotípica simplificada. Observou-se elevada concordância (98,83%) entre os resultados dos testes genotípicos e fenotípicos para a identificação de S. aureus, demonstrando a aplicabilidade da chave de identificação proposta para a discriminação deste microrganismo entre SCP isolados de casos de mastite bovina.

Protein and antigen profiles of Leptospira interrogans serovar Hardjo / Perfil proteico e antigênico da Leptospira interrogans sorovariedade Hardjo

The protein profile of the outer membrane of Leptospira interrogans serovar Hardjo subtype hardjoprajitno associated with the bovine natural immune response was investigated. The outer membrane proteins were extracted utilizing Triton X114 and precipitated with acetone. The protein sample was then resolved by SDS-PAGE and reacted in western blot against sera from a hyperimmune rabbit and from naturally infected bovines. In silver stained gels, 14 protein bands were observed, among which four proteins, with 22, 29, 47 and 63kDa, appeared as major constituents. Western blot tests with hyperimmune rabbit antiserum detected bands corresponding to proteins with 35; 27; 24; 21; 17 and 14kDa, while 32kDa and 45kDa proteins were the most immunoreactive with sera from naturally infected bovines.

Estudou-se o perfil proteico da membrana externa da Leptospira interrogans sorovariedade Hardjo, amostra hardjoprajitno, associado à resposta imune natural de bovinos infectados. Foram utilizados Triton X114 para a extração das proteínas de membrana externa e acetona para precipitá-las. As proteínas extraídas foram analisadas por SDS-PAGE e western blot contra soro de coelhos hiperimunes e de bovinos naturalmente infectados. Em géis corados com nitrato de prata, 14 bandas proteicas foram identificadas, e quatro dessas bandas, com 22, 29, 47 e 63kDa, foram as mais proeminentes. Os western blots com soro hiperimune de coelho detectaram bandas correspondentes a proteínas com pesos moleculares de 35, 27, 24, 21, 17 e 14kDa, e bandas de 32 e 45kDa destacaram-se nos testes com soros de bovinos naturalmente infectados.

Mastite por leveduras em bovinos leiteiros do Sul do Estado de Minas Gerais, Brasil / Mastitis caused by yeasts in dairy herds in the South of the Minas Gerais State, Brazil

O objetivo deste trabalho foi estudar a freqüência de infecções intramamárias ocasionadas por leveduras a partir de amostras de leite (n=1710) coletadas em 40 rebanhos leiteiros do Estado de Minas Gerais. Cinqüenta e seis estirpes de leveduras do gênero Candida e uma linhagem de Trichosporon loubieri foram isoladas. Candida albicans foi a espécie dominante (28,1 por cento das cepas), seguida por Candida parapsilosis (19,3 por cento), Candida catenulata (14,0 por cento), Candida glabrata (14,0 por cento) e Candida tropicalis (8,8 por cento). Infecções mistas foram detectadas em 29,8 por cento das vacas levedura-positivas. Amostras positivas para leveduras foram predominantemente obtidas (84 por cento) de vacas com mastite subclínica. A baixa taxa de isolamento de leveduras sugere que estes microrganismos não são relevantes para mastite bovina na região estudada.

The objective of this study was to report the frequency of intramammary infections by yeasts, in Minas Gerais State, from milk samples (n = 1710) collected in 40 dairy herds. Fifty six yeast strains of the genus Candida and one strain of Trichosporon loubieri were isolated. Candida albicans was the dominant species (28.1 percent of the strains), followed by Candida parapsilosis (19.3 percent), Candida catenulata (14.0 percent), Candida glabrata (14.0 percent), Candida tropicalis (8.8 percent). Mixed infections were detected in 29.8 percent of yeast-positive cows. The yeast infection was more frequent (84 percent) in cows with subclinical mastitis. The low rate of isolation of yeasts suggests that these microorganisms are not relevant to bovine mastitis in the studied region.