ABSTRACT
The present study assessed central nervous system (CNS) and immune system changes in murine fetuses after cyclophosphamide (CP) exposure during intrauterine life. A single CP dose of 0, 10, or 20mg/kg body weight was administered by intraperitoneal inj ection to pregnant mice (20/group) on day 11 of gestation (GD 11) and fetuses were evaluated on day 19 of gestation (GD 19). Fetuses were examined for external changes, and then the brains and thymuses were removed for further evaluations of histological changes, protein content, apoptotic cell count, DNA fragmentation, and in vitro cell proliferation using 1 fetus/litter for each assessment. Brains and thymuses from CP-exposed fetuses were smaller in size and distorted in overall shape compared to those from the control group. Estimated mean protein content (mg/mL) of brains was decreased in the CP-exposed groups. In both brain cells and thymocytes there was an increase in mean apoptotic cell counts and in mean percent DNA fragmentation in the exposed groups. The in vitro cell proliferation assays conducted with cells from exposed fetuses exhibited a mean decrease in the number of both brain cells and thymocytes generated. These findings indicate that maternal CP treatment on GD 11 in mice results in marked fetal toxicity characterized by reduced live litter size, fetal body weights as well as brain and thymic weights and malformations which are accompanied by changes in brain protein content, brain and thymic apoptosis, DNA fragmentation and in vitro cell proliferation at term.
El presente estudio evaluó los cambios en el sistema nervioso e inmunológico en fetos de roedores, luego de exposición a ciclofosfamida (CF) durante la vida intrauterina. Una dosis única de CF de 0, 10, y 20 mg/kg de peso se administró por medio de inyección intraperitoneal en ratas preñadas (grupo de 20) en el día 11 de gestación (DG11) y luego los fetos se evaluaron en el día 19 de gestación (DG19). Fueron examinados los cambios externos de los fetos, y los cerebros y timos se extrajeron para evaluar los cambios histológicos, contenido de proteínas, conteo de células apoptóticas, fragmentación de DNA y proliferación de células in vitro, usando 1 feto por carnada para cada evaluación. Los cerebros y timos de fetos expuestos a CF eran pequeños y completamente deformados , comparado con los del grupo control. La estimación del contenido proteico (mg/mL) de los cerebros estuvo disminuida en los grupos expuestos a CF. En las células del cerebro y timocitos hubo un incremento en el promedio del conteo de células apoptóticas y el porcentaje promedio de la fragmentación de DNA en los grupos expuestos. Los ensayos de proliferación celular in vitro realizados en células de fetos expuestos, mostraron una disminución en el promedio de células cerebrales y timocitos generados. Estos hallazgos indican que el tratamiento materno en el DG11 con CF en ratones significa una marcada toxicidad fetal caracterizada por un reducido tamaño de los nacidos vivos de la carnada, reducidos pesos fetal, cerebral y del timo y malformaciones, las cuales son acompañadas por cambios en el contenido proteico cerebral, apoptosis de células cerebrales y del timo, fragmentación del DNA y proliferación celular in vitro al término.