The alterations of microvasculature, tyrosine phosphorylation, and lipid peroxidation in kidney of rats treated with valproic acid / Alteraciones de la microvasculatura, fosforilación de tirosina y peroxidación lipídica en riñones de ratas tratadas con ácido valproico

SUMMARY: Valproic acid (VPA), an antiepileptic drug, has been demonstrated to damage histology and to change tyrosine phosphorylation patterns with increased oxidative stress in perirenal tissues. This study aimed to investigate the effect of VPA on microstructure, tyrosine phosphorylation, and lipid peroxidation of rat kidney. Adult male rats were divided into control and VPA-treated groups intraperitoneally injected with normal saline and VPA 500 mg/kgBW for 10 consecutive days, respectively (n = 7 each). The blood serum was examined for biochemical levels. The kidney tissues were routinely processed for histological observation. Total proteins from kidney were extracted to assay the malondialdehyde (MDA) levels and phosphorylation expression. The results showed that VPA significantly decreased blood glucose levels while tend to increase urea nitrogen and creatinine. MDA levels in VPA group were significantly higher that of control. Renal cortex of VPA-treated animals revealed vasodilatations. Although the ratio of a renal phosphorylated 72 kDa protein/ beta actin expression seemed to be not different in both groups, VPA significantly decreased the intensity of beta actin. In conclusion, VPA dilates renal microvasculature with increasing of MDA but suppresses the actin expression.

RESUMEN: Se ha demostrado que el ácido valproico (AVP), un fármaco antiepiléptico, daña la histología y cambia los patrones de fosforilación de la tirosina con el aumento del estrés oxidativo en los tejidos perirrenales. Este estudio tuvo como objetivo investigar el efecto del AVP en la microestructura, la fosforilación de la tirosina y la peroxidación lipídica del riñón de rata. Se dividieron ratas macho adultas en grupos control y tratados con AVP. Durante 10 días consecutivos fueron inyectadas por vía intraperitoneal con solución salina normal y 500 mg / kg de PC respectivamente (n = 7 cada uno). Se analizó el suero sanguíneo para determinar los niveles bioquímicos. Los tejidos renales se procesaron de forma rutinaria para la observación histológica. Las proteínas totales del riñón se extrajeron para analizar los niveles de malondialdehído (MDA) y la expresión de la fosforilación. Los resultados mostraron que el AVP disminuyó significativamente los niveles de glucosa en la sangre, mientras que tienden a aumentar el nitrógeno ureico y la creatinina. Los niveles de MDA en el grupo de AVP fueron significativamente más altos que los del control. La corteza renal de los animales tratados con AVP reveló vasodilataciones. Aunque la proporción de una expresión de proteína / actina de 72 kDa fosforilada renal no parece ser diferente en ambos grupos, el AVP disminuyó significativamente la intensidad de la actina beta. En conclusión, el AVP dilata la microvasculatura renal al aumentar el MDA, pero suprime la expresión de actina.

Localization and changes of tyrosine phosphorylated proteins and ß actin in epididymis of rats treated with valproic acid / Localización y cambios de las proteínas tirosina fosforiladas y la ß actina en epidídimos de ratas tratadas con ácido valproico

Tyrosine phosphorylated proteins have been localized and identified in male reproductive tissues such as testis and capacitated/ acrosome reacted sperm except epididymis. The changes of such proteins are associated with decreased sperm quality of valproic acid treatment. This study aimed to investigate the presence and alterations of protein phosphorylation in epididymal epithelium and fluid of rats treated VPA. Sixteen adult male rats were divided into control and VPA-treated groups (n=8/ each). Treated rats were injected with VPA (500 mg/ kgBW, intraperitoneally) for 10 consecutive days. At the end of experiment, the monoclonal antiphosphotyrosine (clone 4G10) was used for immunohistochemistry to probe tyrosine phosphorylated proteins and also to examine the expression of such proteins using immuno-Western blotting in epididymal tissue and fluid. The result showed that positive reactivity of phosphorylated proteins was clearly observed in cytoplasmic principle cells, nuclei of apical & basal cells and sperm mass surrounded with epididymal fluids. The profiles of phosphorylated proteins in epididymal fluid were 182, 127, 80, 70, 57, 45, 34, and 31 kDas, respectively. Interestingly, VPA affected the changes of phosphorylated proteins and β actin in head, body, and tail epididymal fluids. We conclude that tyrosine phosphorylated proteins were detected in epididymal epithelium and fluid. The expressions of those proteins and actin were altered under VPA treating.

Las proteínas tirosina fosforiladas han sido localizadas e identificadas en tejidos reproductores masculinos tales como testículos y espermatozoides, capacitados a nivel acrosómico, excepto en el epidídimo. Los cambios de estas proteínas están asociadas con una disminución de la calidad del esperma en el tratamiento con ácido valproico (AVP). Este estudio tuvo como objetivo investigar la presencia y las alteraciones de la fosforilación de proteínas en el epitelio epididimal y en el fluido espermático de ratas tratadas con AVP. Dieciséis ratas macho adultas se dividieron en dos grupos: control y tratadas con AVP (n = 8 / cada uno). A las ratas tratadas se les inyectó AVP por vía intraperitoneal (500 mg / kg de peso corporal) durante 10 días consecutivos. Al final del experimento, se realizó inmunohistoquímica con la anti-fosfotirosina monoclonal (clon 4G10) para sondear las proteínas tirosina fosforiladas y también para examinar la expresión de tales proteínas usando inmunotransferencia Western, en tejido y fluido epididimarios. El resultado mostró reactividad positiva de proteínas fosforiladas en células citoplásmicas principales, en los núcleos de las células apicales y basales y en la masa de esperma rodeada por fluidos epididimarios. Los perfiles de proteínas fosforiladas en el fluido epididimal fueron 182, 127, 80, 70, 57, 45, 34 y 31 kDas, respectivamente. El AVP provocó cambios en las proteínas fosforiladas y en la β actina de los fluidos epididimarios de cabeza, cuerpo y cola del epidídimo. Concluimos que las proteínas tirosina fosforiladas se detectaron en el epitelio y el fluido epididimarios. Las expresiones de esas proteínas y de la β actina se alteraron bajo tratamiento con AVP.

Methotrexate changes the testicular tyrosine phosphorylated protein expression and seminal vesicle epithelia of adult rats / El metotrexato cambia la expresión de la proteína testicular-tirosina fosforilada y el epitelio vesicular seminal en ratas adultas

Methotrexate (MTX) is commonly used as a chemotherapy agent and immune system suppressant but its adverse effect on male reproductive system is still limited. This study aimed to investigate the effect of MTX on structure and functional proteins of testis and seminal vesicle. Adult male rats were divided into control and MTX groups (n =12). In 30 experimental days, the treated animals were injected with MTX (tail i.v., 75 mg/KgBW) at days 8 and 15. Then, the reproductive parameters and histology of both groups were examined. Thickness of seminal seminal vesicle epithelia was analyzed. Also, the expressions of testicular tyrosine phosphorylated proteins and steroidogenic acute regulatory (StAR) protein were investigated. The results showed that MTX could significantly decrease epididymal sperm concentration. In addition, the germ cell degeneration, increased spaces of interstitial tissues, and low epididymal sperm mass density were observed in MTX group. The thickness of seminal vesicle epithelia in MTX group was significantly lower than that of control group. Moreover, the intensity of testicular phosphorylated proteins of 31, 32, 72, and 85 kDas was significantly increased while of 42 and 47 kDas in MTX group was decreased as compared to control. The expression of testicular StAR protein in MTX group was also significantly decreased as compared to the control. In conclusion, MTX affects testicular and seminal tissues and changes testicular functional proteins in adult rats.

El metotrexato (MTX) se usa comúnmente como agente de quimioterapia y supresor del sistema inmunitario, pero su efecto adverso en el sistema reproductor masculino sigue siendo limitado. Este estudio tuvo como objetivo investigar el efecto del MTX sobre la estructura y las proteínas funcionales del testículo y la vesícula seminal. Ratas macho adultas se dividieron en grupos control y grupo con MTX (n = 12). En 30 días experimentales, a los animales tratados se les inyectó MTX (cola i.v., 75 mg / KgBW) los días 8 y 15. Luego, se examinaron los parámetros reproductivos y la histología de ambos grupos. Se analizó el espesor del epitelio de la vesícula seminal. Además, se investigaron las expresiones de la proteína tirosina testicular fosforilada y de la proteína reguladora aguda esteroidogénica (StAR). Los resultados mostraron que el MTX podría disminuir significativamente la concentración de espermatozoides epididimarios. Además, se observó la degeneración de las células germinales, el aumento de los espacios de los tejidos intersticiales y la baja densidad de masa del espermatozoide epididimal en el grupo de MTX. El grosor del epitelio de la vesícula seminal en el grupo MTX fue significativamente menor que el del grupo control. Además, la intensidad de las proteínas testiculares fosforiladas de 31, 32, 72 y 85 kDas aumentó significativamente, mientras que la de 42 y 47 kDas en el grupo MTX disminuyó en comparación con el control. La expresión de la proteína StAR testicular en el grupo MTX también se redujo significativamente en comparación con el control. En conclusión, el MTX afecta los tejidos testiculares y seminales y cambia las proteínas funcionales testiculares en ratas adultas.

Antioxidant and hypoglycemic effects of Momordica cochinchinensis Spreng: (Gac) aril extract on reproductive damages in streptozotocin (STZ)-induced hyperglycemia mice / Efectos antioxidantes e hipoglucémicos del extracto de aril de Momordica cochinchinensis Spreng: (Gac) sobre los daños reproductivos en ratones con hiperglucemia inducida por streptozotocin (STZ)

The aim of present study was to investigate the effect of Momordica cochinchinensis (Gag) aril (GA) aqueous extract on male reproductive system of streptozotocin (STZ)-induced hyperglycemia (HG) mice. GA were extracted with distilled water (DW) and analyzed for in vitro antioxidant capacities. ICR male mice were divided into 7 groups: 1) control, 2) DW, 3) GA 1000 mg/kg BW, 4) HG, 5) HG + glibenclamide, 6 and 7) HG + GA 500 and 1000 mg/kg BW respectively (7 mice/ group). In HG groups, mice were induced by STZ at single dose (150 mg/kg BW). They were treated for consecutive 35 days. All groups were compared for blood glucose levels, weights and histopathologies of reproductive organs, sperm concentration including testicular tyrosine phosphorylation protein patterns by Immuno-Western blotting. The results showed that GA processed antioxidant activities and could significantly decrease blood glucose levels and increase sperm concentration in HG mice. Moreover, GA could change the density of a testicular 70 kDa protein in HG-GA groups. In conclusion, GA extract could improve hyperglycemia and male reproductive damages in STZ-induced HG mice.

El objetivo de este estudio fue investigar el efecto del extracto acuoso de Momordica cochinchinensis (Gag) aril (GA) en el sistema reproductor masculino de ratones hiperglucémicos inducidos por estreptozotocina (STZ). GA fue extraída con agua destilada (DW) y se analizaron las capacidades antioxidantes in vitro. Ratones ICR machos fueron divididos en 7 grupos: 1) control, 2) DW, 3) GA 1000 mg / kg PC, 4) HG, 5) HG + glibenclamida, 6 y 7) HG + GA 500 y 1000 mg / kg PC, respectivamente (7 ratones / grupo). En los grupos HG, los ratones fueron inducidos con STZ en dosis única (150 mg / kg BW). Fueron tratados durante 35 días consecutivos. En todos los grupos se compararon los niveles de glucosa en sangre, los pesos y las histopatologías de los órganos reproductores, la concentración de espermatozoides, incluídos los patrones testiculares de proteínas tirosina fosforilada por Inmuno-Western blot. Los resultados mostraron que GA procesaba actividades antioxidantes y podían disminuir significativamente los niveles de glucosa en sangre y aumentar la concentración de espermatozoides en ratones HG. Además, GA podría cambiar la densidad de una proteína testicular de 70 kDa en grupos HG-GA. En conclusión, el extracto de GA podría mejorar la hiperglucemia y los daños reproductivos masculinos inducidos por STZ en ratones HG.

Momordica cochinchinensis (L. ) spreng: aril extract prevents adverse reproductive parameters of male rats Induced with valproic acid / El extracto del arilo Momordica cochinchinensis (L. ) Spreng previene los parámetros reproductivos adversos inducidos con ácido valproico en ratas macho

This study aimed to investigate protective effect of Momordica cochinchinensis (MC) aril extract on adverse reproductive parameters of male rat induced with valproic acid (VPA) commonly used in treatment for antiepileptic diseases. Male Wistar rats were divided into 6 groups (control, VPA, 200 mg/kg BW of PE only, and 50, 100, 200 mg/kg BW MC+VPA, respectively). Animals were pretreated with aqueous MC extract for 23 days before co-administered with VPA induction for 10 days. At the end of experiment, all male reproductive parameters and testicular histology were examined. The results showed all doses of PE significantly protect the decrease the weights of epididymis and seminal vesicle but not of body and testicular weights. MC extract also increased sperm concentration and seminiferous tubular diameters in MC+VPA co-administrative groups. Moreover, testicular histology of MC+VPA groups showed significant declining of testicular histopathologies as compared to VPA group. It was concluded that M. Cochinchinensis aril extract can prevent adverse male reproductive parameters and testicular damage induced with VPA.

El objetivo fue investigar el efecto protector del extracto de arilo de Momordica cochinchinensis (MC) sobre los parámetros reproductivos adversos de la rata macho inducida con ácido valproico (AV) que se utiliza comúnmente en el tratamiento de enfermedades epilépticas. Las ratas se dividieron en 6 grupos (control, AV, 200 mg/kg por peso corporal de PE solamente, y 50, 100, 200 mg/kg por peso corporal MC+AV, respectivamente). Los animales fueron tratados previamente con extracto acuoso MC durante 23 días, antes de la administración de AV durante 10 días. Al término del experimento, se examinaron todos los parámetros reproductivos masculinos y la histología testicular. Los resultados indicaron que todas las dosis de PE protegen de manera significativa la disminución de los pesos de epidídimo y vesículas seminales, pero no de peso corporal y testicular. El extracto de MC también aumentó la concentración de espermatozoides y los diámetros de los túbulos seminíferos en los grupos de administración con MC+AV. Por otra parte, la histología testicular de los grupos MC+AV mostró una disminución significativa de histopatologías testiculares en comparación con el grupo AV. En conclusión, el extracto de arilo M. cochinchinensis puede prevenir la aparición de parámetros reproductivos masculinos negativos y los daños testiculares inducidos con AV.

Phyllanthus emblica l. branch extract ameliorates testicular damage in valproic acid-induced rats / El extracto de la rama de Phyllanthus emblica l. disminuye el daño testicular inducido por ácido valproico en ratas

Valproic acid (VPA), widely used in treating epileptic patients, can damage reproductive parameters causing male infertility. This study aimed to investigate protective effect of Phyllanthus emblica L. branch (PE) extract on rat testicular damage induced with VPA. Male rats were divided into 6 groups (control, VPA, 250 mg/kgBW PE only, and 50, 100, 250 mg/kgBW PE+VPA, respectively). Animals were pretreated with PE for 23 days and co-administered with VPA for 10 days before all reproductive parameters were determined. The results showed all doses of PE significantly protected the decrease testicular weight and testosterone level in VPA rats. PE significantly improved the decrease sperm concentration in VPA treated rats. Moreover, testicular histology of PE+VPA groups showed declining of testicular histopathologies as compared to VPA group. Therefore, it seems that PE branch extract can prevent testicular damages including male reproductive parameters in rats induced with VPA.

El ácido valproico (AVP) es utilizado frecuentemente en el tratamiento de pacientes epilépticos y puede dañar los parámetros reproductivos que causan la infertilidad masculina. Este estudio tuvo como objetivo investigar el efecto protector de la rama Phyllanthus emblica L. (PE) sobre el daño testicular de ratas inducidas con AVP. Ratas machos fueron divididas en 6 grupos (control, AVP, PE 250 mg/kg peso corporal, APV+ PE 50, 100, 250 mg/kg peso corporal, respectivamente). Los animales fueron pretratados con PE durante 23 días y se administró AVP durante 10 días antes de medir todos los parámetros reproductivos. Los resultados mostraron que todas las dosis de PE protegen significativamente el peso y los niveles reducidos de testosterona testicular en ratas con AVP. El extracto de PE mejoró significativamente la concentración de espermatozoides en ratas tratadas con AVP. Por otra parte, la histología testicular de los grupos PE+AVP mostró disminución de la histopatología testicular en comparación con el grupo tratado sólo con AVP. Por lo tanto, parece que el extracto de la rama PE puede prevenir daños testiculares incluyendo los parámetros reproductores masculinos en ratas inducidas con AVP.