Evaluación preliminar de la actividad antiviral de Ageratina havanensis frente al virus dengue-2 utilizando ensayos inmunoenzimáticos

RESUMEN Introducción: Se presenta la evaluación preliminar de la actividad antiviral de extractos de Ageratina havanensis (etanólico de tallo, AH-T-EtOH; butanólico de hoja, AH-H-ButOH y acetato de etilo de hoja, AH-H-AcEtO) utilizando dos sistemas inmunoenzimáticos, un ELISA celular (ELISAc) y la técnica de inmunoperoxidasa. Objetivo: Evaluar la actividad antiviral de los extractos de Ageratina havanensis utilizando dos sistemas inmunoenzimáticos. Métodos: Se normalizó y empleó un ELISAc y la técnica de inmunoperoxidasa en evaluar de forma preliminar la actividad antiviral de tres extractos de Ageratina havanensis a diferentes concentraciones y tiempos de adición mediante la detección de la expresión de la proteína E del virus dengue. Resultados: El ELISAc logró como parámetros óptimos: línea celular Vero, antígeno viral en cultivo de células, tiempo de expresión de la proteína E de 96 h, compuesto fijador metanol-acetona y bloqueador leche descremada al 1 %. La menor expresión de la proteína E (mayor inhibición sobre la replicación viral), fue al adicionar el extracto AH-T-EtOH a su mayor concentración y 1 h antes de inocular el virus dengue-2 cepa A15 (VDEN-2 A15). El extracto AH-H-ButOH a concentraciones de 125 µg/mL y 250 µg/mL presentó una ligera limitación de expresión de E 1 h después de la inoculación viral. El extracto AH-H-AcEtO a las concentraciones empleadas, no mostró difererencia añadido antes y después de la inoculación. El ensayo de inmunoperoxidasa exhibió resultados análogos para los extractos. Conclusiones: La mayor inhibición de la replicación viral fue obtenida con el extracto AH-H-ButOH, a su mayor concentración y ambos tiempos de adición. Los ensayos inmunoenzimáticos aplicados son herramientas útiles para evaluar extractos de Ageratina havanensis con posible actividad antiviral.

ABSTRACT Introduction: A preliminary evaluation is presented of the antiviral activity of Ageratina havanensis extracts (stem ethanolic, AH-T-EtOH; leaf butanolic, AH-H-ButOH; and leaf ethyl acetate, AH-H-AcEtO) using two enzyme immunoassays, cellular ELISA (C-ELISA) and immunoperoxidase technique. Objective: Evaluate the antiviral activity of Ageratine havanensis extracts using two enzyme immunoassays. Methods: C-ELISA and immunoperoxidase technique were standardized for use in the preliminary evaluation of the antiviral activity of three Ageratina havanensis extracts at different concentrations and addition times through detection of the expression of the E protein of dengue virus. Results: C-ELISA achieved the following optimal parameters: Vero cell line, viral antigen in cell culture, protein E expression time 96 h, methanol-acetone fixation compound and 1% skimmed milk blocker. The smallest expression of protein E (greatest inhibition over viral replication) was achieved at addition of extract AH-T-EtOH at its highest concentration and 1 h before inoculating dengue-2 virus strain A15 (VDEN-2 A15). Extract AH-H-ButOH at concentrations of 125 µg/ml and 250 µg/ml presented a slight limitation in the expression of E 1 h after viral inoculation. Extract AH-H-AcEtO at the concentrations used did not show any difference when added before and after inoculation. The immunoperoxidase assay exhibited similar results for the extracts. Conclusions: The greatest inhibition of viral replication was obtained with extract AH-H-ButOH at its highest concentration and at both addition times. The enzyme immunoassays applied are useful tools to evaluate Ageratine havanensis extracts with potential antiviral activity.

Evaluación del desempeño de dos pruebas para la detección de antígeno de Helicobacter pylori en heces / Evaluation of the accuracy of two stool antigen tests for Helicobacter pylori infection

Introducción: la detección de antígeno en heces se ha considerado una prueba prometedora para el diagnóstico de la infección por Helicobacter pylori. Para su introducción en la práctica médica, es un requisito indispensable demostrar el desempeño adecuado del método en la población de estudio. Objetivo: evaluar la capacidad diagnóstica de los sistemas comerciales ELISA SD y SD BIOLINE, del fabricante Standard Diagnostics, Corea, en pacientes cubanos con síntomas gastroduodenales. Métodos: se evaluaron 101 muestras de heces de pacientes previamente clasificados como H. pylori positivos y negativos por las pruebas de referencia de histología y prueba rápida de la ureasa. Se calcularon los parámetros de desempeño de ambos sistemas diagnósticos por el programa EPIDAT 3.1. Resultados: la sensibilidad para los sistemas ELISA SD y SD BIOLINE fue de 85,25 por ciento y 75,41 por ciento, respectivamente. La especificidad para ambos fue de 92,50 por ciento. Los valores predictivos positivos y negativos, los índices de validez y de Youden y la confiabilidad diagnóstica de ambas pruebas fueron satisfactorios. Conclusiones: Los sistemas evaluados exhibieron un desempeño comparable con la histología y la prueba rápida de ureasa para la detección activa de la infección por H. pylori, lo que demuestra su utilidad para el diagnóstico y el manejo oportuno del paciente, sin la necesidad de emplear pruebas invasivas(AU)

Introduction: stool antigen tests have been considered to be promising for the diagnosis of Helicobacter pylori infection. For their incorporation into medical practice, it is indispensable to demonstrate their accuracy in a study population. Objective: evaluate the diagnostic capacity of the commercial systems ELISA SD and SD BIOLINE, Standards Diagnostics, Korea, in Cuban patients with gastroduodenal symptoms. Methods: an evaluation was conducted of 101 stool samples from patients previously classified as H. pylori positive and negative by reference histological tests and the rapid urease test. Estimation was made of performance parameters for both diagnostic systems using the software EPIDAT 3.1. Results: Sensitivity for the systems ELISA SD and SD BIOLINE was 85.25 percent and 75.41 percent, respectively. Specificity for both was 92.50 percent. Positive and negative predictive values, validity and Youden's indices, and diagnostic reliability were satisfactory for both tests. Conclusions: the systems evaluated were found to have a performance level comparable with histological tests and the rapid urease test for active detection of H. pylori infection. This confirms their usefulness for the diagnosis and timely management of patients without having to use invasive tests(AU)

Evaluación del sistema diagnóstico SD Dengue Duo para la detección de la proteína NS1 y los anticuerpos IgM e IgG anti-dengue / Evaluation of the SD Dengue Duo diagnosis system for detection of NS1 protein and IgM and IgG dengue antibodies

Introducción: el sistema comercial SD Dengue Duo (Standard Diagnostics) es una prueba rápida inmunocromatográfica que detecta la proteína NS1 del virus dengue y los anticuerpos anti-dengue IgM e IgG de forma simultánea. Objetivo: evaluar las características funcionales y operacionales del sistema comercial para la detección de los diferentes marcadores virológicos y serológicos. Métodos: se utilizó un panel constituido por 161 muestras de suero, 113 procedentes de pacientes con un diagnóstico clínico y serológico confirmado a cualquiera de los 4 serotipos del virus dengue y 48 negativas. Todas las muestras fueron procesadas por el sistema SD Dengue Duo y por las técnicas Platelia Dengue NS1 Ag, ELISA de captura IgM y el ELISA de inhibición utilizadas como referencia. Resultados: el sistema evaluado mostró una sensibilidad de 57,75 por ciento para la proteína NS1, se observaron falsos negativos en muestras colectadas a partir del quinto día de iniciados los síntomas en casos con infección secundaria. La detección de anticuerpos IgM mostró una sensibilidad de 96,0 por ciento y especificidad de 98,4 por ciento. Se encontró una alta concordancia (95,7 por ciento) al clasificar el tipo de infección. En el estudio global de los 3 marcadores la sensibilidad del sistema se incrementó hasta 100 por ciento. Conclusiones: el SD Dengue Duo es un método simple, rápido, fácil de ejecutar, el cual no requiere de equipamiento adicional; tiene la ventaja de poder ser utilizado para muestras, tanto de fase aguda como en la fase convaleciente y pudiera ser una alternativa para el diagnóstico del dengue en aquellos laboratorios que no cuenten con facilidades para ello.

Introduction: SD Dengue Duo (Standard Diagnosis) commercial kit is an immunochromatographic rapid test that detects NS1 protein and IgG/IgM dengue antibodies simultaneously. Objective: to evaluate the operational and functional characteristics of this system for the detection of virological and serological markers. Methods: sera panel was made up by 161 samples, 113 from patients with clinically and serologically confirmed dengue caused by any of the four dengue virus serotypes and 48 negative samples. All these samples were tested by SD Dengue Duo Kit and by Platelia Dengue NS1 Ag, IgM Capture ELISA and ELISA Inhibition Method used as reference assays. Results: the evaluated kit showed a 57.75 percent sensitivity for the detection of NS1 protein, false negatives were detected in samples collected 5 days or more after fever onset in secondary infection cases. IgM detection showed 96.0 percent sensitivity and 98.4 percent specificity. Furthermore, high agreement (95.7 percent) in classifying dengue infection types (primary or secondary infections) was observed. The global study of the 3 markers, the sensitivity rose to 100 percent. Conclusions: SD Dengue Duo is a simple, easy and rapid assay; it does not require additional equipment, can be used for acute and convalescence serum samples and offers a good alternative for dengue diagnosis in those laboratories where a complete dengue virus diagnosis is difficult to perform.

Normalización de un ELISA de captura para la detección de anticuerpos de tipo IgM al virus de la parotiditis / Standardization of a capture ELISA for detection of IgM antibodies to parotiditis virus

Introducción: la parotiditis es una enfermedad contagiosa aguda, que afecta fundamentalmente a los niños en edad escolar entre 5 y 14 años y requiere de técnicas rápidas para su diagnóstico. Objetivos: se normalizó un ELISA de captura para la detección de anticuerpos de tipo IgM al virus de la parotiditis y se comparó con la inhibición de la hemaglutinación. Métodos: se estudiaron 177 monosueros y 285 pares de suero que procedían de la vigilancia seroepidemiológica al virus de la parotiditis, enviados por las diferentes provincias del país en el período comprendido entre enero 2004-diciembre 2006. Fueron analizados con la técnica de inhibición de la hemaglutinación y se emplearon en la normalización del sistema. Se determinó la precisión del ensayo y se realizó el estudio de la reactividad cruzada a otros agentes virales. Resultados: al evaluar el sistema, se obtuvieron valores de sensibilidad de 98,9 por ciento, especificidad 98,5 por ciento y concordancia 98,7 por ciento; se encontró una buena relación en los valores del coeficiente de variación intraensayo e interensayo en todos los casos estudiados. No se observó reactividad cruzada con otros agentes infecciosos. Conclusiones: este sistema demostró ser de gran utilidad para el diagnóstico temprano de la parotiditis, resultó ser más sensible y rápido que la inhibición de la hemaglutinación.

Background: parotiditis is an acute contagious disease that mainly affects children aged 5-14 years and requires rapid diagnostic techniques. Objectives: a capture ELISA was standardized to detect IgM antibodies to parotiditis virus and this method was compared with hemagglutination inhibition. Methods: one hundred and seventy seven monosera and 285 serum pairs sent by the different provinces from January 2004 to December 2006, as part of the seroepidemiological surveillance of the parotiditis virus, were studied. They were analyzed by the hemagglutination inhibition technique and used for the system standardization. Accuracy of the test was determined and the cross reactivity to other viral agents was also studied. RESULTS: the system evaluation yielded 98.9 percent sensitivity, 98.5 percent specificity and 98.7 percent concordance; good relation was found in the variation coefficient values intra-assays and inter-assay for all the studied cases. No cross reactivity was observed with other infectious agents. Conclusions: this system proved to be useful for the early diagnosis of parotiditis, more sensitive and rapid than the hemagglutination inhibition.

Normalización de la técnica de reducción de placas para diferenciar una infección por dengue de una infección por fiebre amarilla / Standarization of the plaque reduction assay to differentiate an infection caused by dengue from an infection due to yellow fever

Se normalizó la técnica de neutralización por reducción de placas para diferenciar una infección por dengue de una infección por fiebre amarilla. Para ello se utilizaron muestras de suero de donantes cubanos en los que el antecedente previo de vacunación o no con fiebre amarilla era conocido y de pacientes costarricenses con un cuadro clínico de dengue sin antecedentes de vacunación con fiebre amarilla. El día óptimo de coloración de las placas fue el 5 y la menor dilución de suero capaz de diferenciar entre una infección por dengue de una por fiebre amarilla fue de 1/5. Dada la elevada especificidad de la técnica normalizada se podrán realizar estudios de factores de riesgo de dengue hemorrágico en individuos vacunados por fiebre amarilla, tema de gran actualidad e importancia

Caracterización de los virus de influenza por el método de la inmunoperoxidasa utilizando anticuerpos monoclonales: Montaje y validación

Se aplicó y validó por primera vez en Cuba el método de inmunoperoxidasa para la clasificación rápida en tipo y subtipo de los virus de influenza. El método está basado en un cultivo rápido en células MDCK-L y el empleo de anticuerpos monoclonales para la clasificación en tipo y subtipo. Se utiliza un pool de anticuerpos contra influenza A y otro contra la influenza B y los anticuerpos monoclonales HA1 - 71 y HA2 - 76 para el subtipaje en H1 y H3. La validación se realizó aplicándolo a 21 cepas de referencia internacional y 23 cepas de virus de influenza humana, aisladas y clasificadas previamente por inhibición de la hemaglutinación. Todas las cepas reaccionaron frente a los anticuerpos monoclonales en correspondencia con su tipo y subtipo de hemaglutinina. Fueron caracterizadas 6 cepas de referencia y 9 aislamientos dentro del subtipo H1N1; 9 cepas de referencia y 10 aislamientos en el subtipo H3N2 y 6 cepas de referencias y 4 aislamientos dentro del tipo B.No hubo reacciones inespecíficas ni cruzadas en los controles establecidos. La sensibilidad, especificidad y coincidencia fue del 100 %. La técnica resultó rápida y conveniente para la caracterización en tipo y subtipo de las cepas de virus de Influenza aisladas. Puede sustituir al método clásico de inhibición de la hemaglutinación cuando se requiere la caracterización rápida de brotes o epidemias de infecciones respiratorias agudas, lo que es de extrema importancia por ser éstas causantes de una alta morbilidad, fundamentalmente en grupos de riesgo, y por su repercusión económica.

The immunoperoxidase method for the rapid classification of influenza viruses in type and subtype was applied and validated for the first time in Cuba. The method is based on a rapid culture in MDCK-L cells and on the use of monoclonal antibodies for the classification in type and subtype. A pool of antibodies against influenza A and another against influenza B and HA1-71 and HA2-76 monoclonal antibodies are used for the subtyping in H1 and H3. The validation was carried out by applying this method to 21 international reference strains and to 23 human influenza virus strains that were isolated and previously classified by hemagglutination inhibition. All the strains reacted to the monoclonal antibodies according to their hemagglutinin type and subtype. 6 reference strains and 9 isolations were characterized within the H1N1 subtype: 9 reference strains and 10 isolations in the H3N2 subtype; and 6 reference strains and 4 isolations in type B. There were neither unspecific nor crossed reactions among the controls established. There was 100 % of sensitivity, specificity and coincidence. The technique used proved to be fast and convenient for the characterization in type and subtype of the isolated influenza virus strains. It may substitute the classic hemagglutination inhibition method when it is required the rapid characterization of outbreaks or epidemics of acute respiratory infections, which is very important due to the high morbidity they cause mainly in risk groups and to their economic repercussion.

Normalización de un ELISA de inhibición para el diagnóstico serológico de las infecciones por virus Coxsackie del grupo B / Standardization of an inhibition ELISA for serological diagnosis of Coxsackie B virus infections

El presente trabajo normalizamos una técnica de ElISA de inhibición para detectar anticuerpos dirigidos contra los virus Coxsackie del grupo B. El método resultó ser tipo específico, ya que fue capaz de detectar anticuerpos a 4 serotipos del B2 y B4 porque no contábamos con las cepas). La comparación con la técnica de neutralización arrojó una coincidencia del 85 por ciento , una sensibilidad del 91 por ciento y una especificidad del 82 por ciento . Todos los reactivos utilizados enel ensayo se produjo en nuestro laboratorio

Estandarización de un sistema ultramicro ELISA indirecto para la determinación de anticuerpos totales al virus de sarampión / Standardization of an indirect ultramicro ELISA system for determining total antibodies to measles virus

Se desarrolló un sistema ultramicroELISA (UME) indirecto para la determminación de anticuerpos al virus del sarampión mediante la tecnología cubana de los sistemas ultramicroanalíticos (SUMA). Fueron procesados 448 monosueros procedentes del Sistema NAcional de Vigilancia Seroepidemiológica del Sarampión, simultáneamente por UME y por la técnica de inhibición de la hemaglutinación. Se compararon los resultados de ambos ensayos. Posteriormente se estudiaron 120 pares de sueros obtenidos de la misma fuente y procesados de forma similar. Los resultados demostraron la utilidad de dicho sistema inmunoenzimático para la realización del diagnóstico serológico y la validación positiva de la sustitución de las técnicas convencionales por esta nueva tecnología

Diagnóstico serológico del VIH (1988-1989) / Serological diagnosis of HIV (1988-1989)

Realizamos la determinación de anticuerpos al virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), por la técnica de ELISA, a 27 652 muestras de suero de diferentes procedencias en el período comprendido entre los meses de enero de 1988 a noviembre de 1989. A las muestras 2 veces positivas se les efectuó la técnica de Western Blot. Encontramos 0,41 por ciento de positividad al virus en 1988 y 0,34 por ciento en 1989. La confirmación de los casos positivos por Western Blot fue estadísticamente significativa en 1989

Estudio serológico de arbovirus en 2 localidades de la Isla de la Juventud / Serologic survey of arbovirus in two towns in the Isle of Youth

Se realizó un estudio serológico en 2 grupos poblacionales de la Isla de la Juventud. Un total de 268 muestras de sangre en papel de filtro fueron trabajadas por la técnica de inhibición de la hemaglutinación, utilizando los virus de la encefalomielitis equina del Este, encefalomielitis equina del Oeste, encefalitis de San Luis y dengue 2, y se encontró el 16 % de positividad a flavirus. Se fectuó una segunda toma de muestra de suero a las personas que resultaron positivas por la técnica de inhibición de la hemaglutinación, para realizar las técnicas de fijación del complemento y neutralización por reducción de placas. Nueve casos presentaron anticuerpos fijadores del complemento, indicativo de una infección reciente, y en 29 casos se detectó anticuerpos neutralizantes al virus de la encefalitis de San Luis

Infección por rotavirus en niños con diarrea aguda en Ciudad de la Habana / Rotavirus infections in children with acute diarrheal disease in Havana City

En el presente estudio se muestra la incidencia de rotavirus y otros agentes patógenos en 256 niños menores de 3 años, con un diagnóstico de diarrea aguda. El estudio comprendió los meses de diciembre de 1983 a mayo de 1984. Los rotavirus se observaron en el 27,7 % de los pacientes, seguidos por la E. coli enteropatógena (17 %). En el grupo control no se observaron casos positivos. La mayor incidencia de infección de rotavirus coincidió con los meses más frios en los que se reportaron los menores volúmenes de precipitaciones

Utilización de un método de inhibición de Elisa en el diagnóstico serológico del dengue: reporte preliminar / Use of an ELISA inhibition method in dengue serologic dignosis: preliminary report

Se presenta la normalización de un método de inhibición de ELISA (ensayo inmunoenzimático sobre fase sólida) para el diagnóstico serológico del dengue, con la utilización de antígeno no purificado. Se establecen las condiciones y criterios de la prueba en la detección de anticuerpos para un grupo de 82 sueros (12 monosueros y 35 pares de sueros). Se comparan los resultados con los obtenidos por inhibición de la hemaglutinación y se observa una buena correspondencia entre ambas pruebas, así como una mayor sensibilidad en el ELISA. Se señalan algunas ventajas de esta técnica en relación con la inhibición de hemaglutinación, como son: facilidad de ejecución, rapidez, no tratamiento de los sueros y el empleo de suspensiones virales sin realizar ningún método de extracción

Comparación de la técnica de fijación del complemento, la inhibición de la hemaglutinación y el inmunoensayo enzimático sobre fase sólida, para el diagnóstico serológico del dengue / Comparison of complement fixation technique, hemagglutination inhibition and enzyme-linked immunosorbent assay for serologic diagnosis of dengue

Se presentan los resultados de la comparación de la fijación del complemento (FC) con respecto a la inhibición de la hemaglutinación (IH) y el inmunoensayo enzimático sobre fase sólida (ELISA), para la detección de anticuerpos antidengue y para el diagnóstico serológico de muestras de sueros pareados. Se obtienen resultados sugerentes de una mayor sensibilidad del ELISA con respecto a la IH y la FC para el diagnóstico serológico del dengue en muestras pareadas, y de la no existencia de una estrecha correlación entre los títulos de FC y los valores de densidad óptica de ELISA cuando se analizan como monosueros los sueros que integran las muestras pareadas