Serological and molecular analysis of parvovirus B19 infection in Mayan women with systemic lupus erythematosus in Mexico / Análisis serológico y molecular de la infección por parvovirus B19 en mujeres mayas con lupus eritematoso sistémico en México

Abstract Background: Systemic lupus erythematosus (SLE) is a systemic autoimmune disease that mainly affects women, characterized by the production of autoantibodies. Its causal agent is unknown, but the combination of environmental, hormonal and genetic factors may favor the development of the disease. Parvovirus B19 has been associated with the development of SLE, since it induces the production of anti-single stranded DNA antibodies. It is unknown whether PV-B19 infection is an environmental factor that trigger or reactivate SLE in the Mexican Mayan population. Aim: A preliminary serological and molecular study of PV-B19 infection in Mayan women with established SLE was done. Methods: IgG and IgM anti PV-B19 were evaluated in 66 SLE patients and 66 control subjects, all women of Mayan origin. Viral DNA and viral load were analyzed by qPCR. Results: Insignificant levels of IgM were observed in 14.3% (4/28) of the patients and 11.4% (4/35) of control subjects. IgG was detected in 82.1% (23/28) of the patients and 82.9% (29/35) of control subjects, but were significantly higher in patients. Viral DNA was found in 86.0% (57/66) of the patients and 81.0% (54/66) of control subjects. Viral load, quantified in 28/66 patients and 31/66 controls which were positive for IgM and IgG, was significantly higher in controls. Conclusion: The high prevalence of PV-B19 in Yucatan, and the presence of IgM, IgG, and viral load in Mayan women with established SLE suggest that PV-B19 infection could be an environmental factor to trigger or reactivate SLE.

Resumen Antecedentes: Lupus eritematoso sistémico (LES) es una enfermedad sistemica autoinmune que afecta principalmente a las mujeres, caracterizada por la producción de autoanticuerpos. El agente causaal es desconocido. Pero la combinación de factores ambientales, hormonales y genéticos podría favorecer el desarrollo de la enfermedad. El parvovirus B19 se asoció con el desarrollo de LES, debido a que induce la producción de anticuerpos anti-cadena simple de DNA. Es desconocido si la infección PV-B19 es un factor ambiental que desencadena o reactiva LES en la población mexicana Maya. Objetivo: Se realizó un estudio serológico y molecular preliminar de la infección de PV-B19 en mujeres Mayas con LES. Métodos: Se evaluó IgG and IgM anti PV-B19 en 66 pacientes con LES y 66 controles sanos, todas las mujeres fueron de origen Maya. DNAViral y la carga viral fueron analizadas por qPCR. Resultados: Se determinaron niveles insignificantes de IgM en el 14.3% (4/28) de las pacientes y en el 11.4% (4/35) de los controles. IgG se detectó en el 82.1% (23/28) de los pacients y en el 82.9% (29/35) de los controles. Hubo un alta significancia en los pacientes con LES. DNA viral se encontró en el 86.0% (57/66) de los pacientes y en el 81.0% (54/66) de los controles. La carga viral se cuantifico en 28/66 pacientes y en 31/66 de los controles, la cual fueron positivos para IgM e IgG; fue significativamente mas alta en los controles. Conclusión: La alta prevalencia de PV-B19 en Yucatan y la presencia de IgM, IgG y una carga viral en mujeres Mayas con LES sugiere que la infección con PV-B19 poria ser un factor ambiental que desencadene o reactive el LES

Expression and activation of intracellular receptors TLR7, TLR8 and TLR9 in peripheral blood monocytes from HIV-infected patients / Expresión y activación de receptores intracelulares TLR7, TLR8 y TLR9 en monocitos de sangre periférica de pacientes infectados con VIH

Introduction: TLR´s play a role in host defense in HIV infection recognizing the viral DNA or RNA. Their activation induces a signaling pathway that includes the proteins MyD88, IRAK4, TRAF6 and the transcription factor NF-kBp65. Objective: To determine the expression of TLR7, TLR8 and TLR9, and activation of its signaling pathway in monocytes from patients infected with HIV. Methods. Expression of TLR7, TLR8 and TLR9 was determined in monocytes from HIV-infected patients (n= 13) and control subjects (n= 13), which were activated with specific ligands. The expression of MyD88 and NF-kBp65 were determined by flow cytometry; IRAK4 and TRAF6 were studied by immunoblotting. Results: No statistical difference was found in the expression of TLR7, 8 and 9 in monocytes from patients compared to controls, but we observed the non-significant increased expression of TLR9 in patients. The activation showed no significant difference in the expression of MyD88 and NF-kBp65 in patients when compared to controls, but were decreased in stimulated cells over non-stimulated cells. IRAK4 and TRAF6 were not detected. Conclusions: No statistical difference was observed in the expression of intracellular TLRs, MyD88 and NFkBp65 in monocytes from patients compared to controls. This was probably due to effective antiretroviral therapy being received at the time of study entry. Additional studies are needed under controlled conditions that include infected patients with and without ARVT, responders and non-responders, and work with different cell populations.

Introducción: En la infección por VIH los TLR juega un papel en la defensa del huésped al reconocer el ADN o ARN viral. Su activación induce la vía de señalización que incluye las proteínas MyD88, IRAK4, TRAF6 y el factor de transcripción NF-kBp65. Objetivo: Determinar la expresión del TLR7, TLR8 y TLR9, y activación de su vía de señalización en monocitos de pacientes infectados con VIH. Métodos: Se determinó la expresión de TLR7, TLR8 y TLR9 en monocitos de pacientes infectados con VIH (n =13) y sujetos control (n =13), se activaron con ligandos específicos y se determinó la expresión de MyD88 y NF-kBp65 por citometría de flujo. IRAK4 y TRAF6 fueron estudiadas por inmunoelectrotransferencia. Resultados: No se observó diferencia estadística en la expresión de TLR7, 8 y 9 en los monocitos de pacientes con respecto a los controles, pero observamos aumento no significante del TLR9 en los pacientes. La activación no mostró diferencia significativa en la expresión de MyD88 y NF-kBp65 en pacientes con respecto a los controles, pero se encontraron disminuidas en células estimuladas con respecto a las no estimuladas. IRAK4 y TRAF6 no se detectaron. Conclusiones: No se observó diferencia en la expresión de los TLR, ni en la expresión de MyD88 y NFkBp65, en monocitos de pacientes con respecto a los controles probablemente debido a la terapia antirretroviral recibida al momento del estudio. Se sugieren estudios con pacientes con y sin TARV, respondedores y no respondedores, y trabajar con diferentes poblaciones celulares.

Obtención de cultivo axénico de amastigotes de tres cepas de Leishmania (Leishmania) mexicana a partir de promastigotes aislados de pacientes con leishmaniasis cutánea localizada en México / Obtention of axenic cultivation of amastigotes of the three strains of Leishmania (Leishmania) mexicana using promastigotes isolated from patients with cutaneous leishmaniasis in Mexico

Introducción. La Leishmaniasis Cutánea Localizada, en la Península de Yucatán, es causada predominantemente por Leishmania (L.) mexicana. Las especies de Leishmania son parásitos intracelulares obligados dimórficos. Los promastigotes, formas flageladas y móviles, se replican y diferencian en el intestino del insecto vector. Los mastigotes, formas intracelulares inmóviles, viven dentro del fagolisosoma del macrófago huésped. Los amastigotes son más difíciles de obtener, debido a que se requieren ser aislados de tejidos y/o cultivos en líneas celulares de macrófagos. La alternativa es el cultivo axénico de formas de amastigotes. Material y métodos. El presente estudio describe la obtención de formas de amastigotes de tres cepas de Leishmania (L.) mexicana, (M/HOM/MX/94/VMC/663,M/HOM/MX/94/JM/758,M/HOM/MX/MX/95LPD/787), mediante la variación del pH y la temperatura de incubación en el medio de cultivo de Grace. Resultados. Los resultados mostraron un comportamiento diferente en cada cepa, determinado por la densidad celular y el porcentaje relativo de transformación. Los promastigotes de cada cepa se transformaron en más del 80 por ciento a formas de amastigotes al segundo día de incubación a pH 5.5 y temperatura de 35ºC. Por otro lado, la variación del pH, de 7.2 a 5.5 a 25ºC, permitió la transformación de promastigotes en metacíclicos. Conclusiones. La variación del pH y la temperatura de incubación permitió obtener las tres etapas de transformación del parásito (promastigotes, metacíclicos y amastigotes), los cuales podrán emplearse en futuros estudios bioquímicos e inmunológicos

Induction of macrophage killing of Leishmania donovani by human CD4+ T cell clones

Immunitary in leishmaniasis is mediated by T cells, but protective responses in humans have not been fully defined. In this study, the functional activity of CD4+ T cell clones derived from an immune individual was investigated to identify potentially protective responses. The T cells proliferated and produced interferon-gamma (IFN-gamma) in response to a soluble Leishmania donovani antigen extrac and live amastigotes. There was considerable variation in the anti-leishmanial activity of the T cell clones when they were co-cultured with L. donavani infected monocytes isolated from an HLA-DR,DQ mathced donor. All of the clones which demonstrated antigen specific reactivity by proliferation or cytokineproduction induced some dregee of inhibition of intracellular parasite replication, but only a few of the clones induced pronounced leishmanicidal activity. There was strong correlation between the level of amastigote-induced IFN-gamma secretion and anti-leishmanial activity. This approach anables the identification of potentially protective immune responses in humans at the clonal level, and offers a means for the identification of the relevant antigen(s)