Protective effect of linoleic acid on liver toxicity induced by methotrexate / Efecto protector del ácido linoleico sobre la toxicidad hepática inducida por metotrexato

SUMMARY: We aimed to investigate the protective effect of linoleic acid on liver toxicity induced by methotrexate. The study was carried out in partnership with the Department of Anatomy and Department of Medical Pharmacology of Çukurova University Faculty of Medicine, using the laboratory facilities of the Department of Medical Pharmacology. Human hepatocyte cell line (CRL- 11233) cells obtained from the American Type Culture Collection Organization (ATCC) were used. Expressions of apoptotic pathway markers, apoptosis inducing factor (AIF), BAX, BCL 2, GADD 153, 78-kDa glucose-regulated protein (GRP78), and CASPASE-3 were evaluated. All analyzes were examined in four groups (Group 1; control, Group 2; linoleic acid given, Group 3; methotrexate given and Group 4; linoleic acid and methotrexate given). The mean ± standard error values of the obtained results as nanogram / milliliter (ng / ml) are in Group I, Group II, Group III and Group IV, respectively; AIF values, 0.4150 ± 0.1208, 0.3633 ± 0.2389, 1.792 ± 0.3611 and 1.077 ± 0.1646, BAX values, 0.900 ± 0.1864, 1.002 ± 0.2098, 8.352 ± 1.467 and 4.295 ± 1.522, BCL 2 values, 13.93 ± 1.198, 13.92 ± 1.739, 2.938 ± 1.059 and 9.250 ± 1.492, GADD 153, 0.7333 ± 0.1751, 0.7067 ± 0.2115, 1.650 ± 0.2950 and 1.237 ± 0.1805, GRP78, 0.4767 ± 0.1804, 0.5233 ± 0.1590, 2.183 ± 0.2639 and 1.112 ± 0.2693, CASPASE-3 values , 1.127 ± 0.2033, 0.8317 ± 0.3392, 13.50 ± 1.871 and 8.183 ± 1.030. It was determined that linoleic acid has a protective effect on methotrexate-induced liver toxicity.

Nuestro objetivo fue investigar el efecto protector del ácido linoleico sobre la toxicidad hepática inducida por metotrexato. El estudio se llevó a cabo en colaboración con el Departamento de Anatomía y el Departamento de Farmacología Médica de la Facultad de Medicina de la Universidad de Çukurova, utilizando las instalaciones del laboratorio del Departamento de Farmacología Médica. Se usaron células de la línea celular de hepatocitos humanos (CRL-11233) obtenidas de la American Type Culture Collection Organisation (ATCC). Se evaluaron las expresiones de marcadores de vías apoptóticas, factor inductor de apoptosis (AIF), BAX, BCL 2, GADD 153, proteína regulada por glucosa de 78 kDa (GRP78) y CASPASE-3. Todos los análisis se examinaron en cuatro grupos (Grupo 1; control, Grupo 2; se administró ácido linoleico, Grupo 3; se administró metotrexato y Grupo 4; se administró ácido linoleico y metotrexato). Los valores medios ± error estándar de los resultados obtenidos como nanogramo/mililitro (ng/ml) se encuentran en el Grupo I, Grupo II, Grupo III y Grupo IV, respectivamente; Valores de AIF, 0,4150 ± 0,1208, 0,3633 ± 0,2389, 1,792 ± 0,3611 y 1,077 ± 0,1646, valores de Bax, 0,900 ± 0,1864, 1,002 ± 0,2098, 8,352 ± 1,467 y 4,295 ± 1,522, BCL 2 valores, 13,93 ± 1,199. 2,938 ± 1,059 y 9,250 ± 1,492, GADD 153, 0,7333 ± 0,1751, 0,7067 ± 0,2115, 1,650 ± 0,2950 y 1,237 ± 0,1805, Grp78, 0,4767 ± 0,1804, 0,5233 ± 0,1590, 2,183, ± 1,263. 1,127 ± 0,2033, 0,8317 ± 0,3392, 13,50 ± 1,871 y 8,183 ± 1,030. Se determinó que el ácido linoleico tiene un efecto protector sobre la toxicidad hepática inducida por metotrexato.

El hepatocito como un ejemplo de interacción entre la biología celular y las rutas metabólicas / The hepatocyte as an example of the interaction between cellular biology and metabolic pathways

Resumen Encontrar a un representante celular que reúna la estructura y las funciones que se revisan en los cursos de biología celular no es tarea fácil, pero el hepatocito reúne esas características. Además de él, en el hígado hay otras células de interés que vale la pena revisar como un complemento para contar con una visión más general de las múltiples funciones que ocurren en esta glándula. Incluimos algunas imágenes y revisamos algunas funciones de esa maravillosa célula conocida como hepatocito, que además integra a la biología celular y a la bioquímica.

Abstract To find a cell that gathers the functions and the structure that are most commonly reviewed in the cellular biology texts is a difficult task, but the hepatocyte meet these attributes. In addition it, there are other interesting cells in the liver that are important to review as a complement in order to have a general view of the multiple functions that occur in the liver. We included images and reviewed some of the functions of the hepatocyte that integrate cellular biology and biochemistry.

Morfometría nuclear de hepatocitos esteatósicos y esteatósicos estimulados con laser infrarrojo / Nuclear morphometric of the steatotic hepatocytes and stimulated steatotisc with infrared laser

Un total de 24 ratas hembras de 4 meses de vida con peso aproximado de 250 g recibieron una solución de alcohol 40 % disuelto en agua lo cual derivó en una esteatosis alcohólica multivesicular. A 12 de estas ratas esteatósicas se le aplicó estimulaciones de láser infrarrojo con dosis de 8 J/cm2 durante 15 días consecutivos. Posteriormente las ratas fueron sacrificadas y se extrajeron muestras tanto de hígado esteatósico como del estimulado para enseguida ser procesadas para microscopía electrónica de transmisión. De hepatocitos esteatósicos y esteatósicos estimulados se obtuvieron microfotografías electrónicas de transmisión con aumentos finales de 9.500 X, las cuales fueron sometidas a estudios morfométricos para determinar tanto el número de poros nucleares como de fracciones volumétricas de los siguientes componentes celulares: Areas celular y nuclear, fracciones volumétricas de núcleos y nucléolos, eu y heterocromatina. De igual manera se determinó la relación nucleo-citoplasmática de ambos tipos celulares. Del análisis de los resultados entre hepatocitos alcohólicos y alcohólicos estimulados se visualiza que existen notables diferencias en todos los componentes celulares cuantificados. Se concluye que los efectos de la estimulación con lásr infrarrojo provoca en los hepatocitos una drástica transformación en su ultraestructura y en su morfología, situación que se traduciría, por ende, en una variación funcional, representando de esta manera el efecto que dicha estimulación provoca en los hepatocitos.

A total of 24 female rats, aged 4 months and weighing approximately 250 g and they given a solution of 40 % alcohol dissolved in water, leading to alcoholic multivesicular steatosis and 12 of rats was given and infrared laser with dose of 8 J/cm2 during 15 d. The rats were then killed and samples of steatosis and stimulated and were taken and processed for examination by transmission electron microscope. Transmission electron microscope microphotographs steatotic hepatocytes and stimulated steatotic were obtained with final magnification of 9,500 X. They were subjected to morphometric studies to determine the number of nuclear pores and volumetric fractions and areas the following components: cellular and nuclear area, volumetric fractions of nucleus, nucleolus, eu and heterochromatin, nucleocytoplamic ratio of each cell type was determined. Analysis of the results between alcoholic hepatocytes and stimulate alcoholic shows that noticeable differences exist in all the cell components quantified. It is concluded that the effects of the stimuli of laser infrared provoke in the hepatocytes, a drastic transformation of their ultrastructure and morphology. This finally leads to functional variations, representing the effects produced by this stimulate in the hepatocytes.

Microscopía electrónica de nucleos hepáticos estimulados con dosis crecientes de laser infrarrojo / Electron microscopy hepatic nuclei stimulated with increasing doses of infrared laser

Un total de 20 ratas hembras de 4 meses de vida con peso aproximado de 250 gramos fueron divididas en 4 grupos de animales rotulados como A, B, C y D. El grupo A corresponde al control y los demás grupos recibieron respectivamente estimulaciones con laser infrarrojo con dosis crecientes de 4, 8 y 16 Joules por cm2 durante 15 días consecutivos en 5 puntos del hígado. Posteriormente las ratas fueron sacrificadas y se extrajeron muestras tanto de hígado control como de los estimulados con inducciones infrarrojas para enseguida ser procesadas para microscopía electrónica de transmisión. De los hepatocitos se obtuvieron microfotografías electrónicas de transmisión con aumentos finales de 9.500 X, las cuales fueron sometidas a estudios morfométricos para determinar fracciones volumétricas de sus núcleos y estructuras nucleares. De igual manera se cuantificaron las áreas nucleares, celulares y se determinó la relación núcleo-citoplasmática de los tipos celulares estudiados. Analizados los resultados entre los hepatocitos controles e irradiados se visualiza que existen notables diferencias en la totalidad de los parámetros cuantificados concluyéndose que los efectos de las estimulaciónes infrarrojas con dosis crecientes genera transformaciones en su ultraestructura y en su morfología, fundamentalmente en el aumento de los volúmenes nucleares, y celulares, los volúmenes de cromatina y de la relación-núcleo-citoplasmática situación que se traduciría en una variación funcional, representando de esta manera un efecto evidente que estas inducciones infrarrojas generan.

Twenty-four four-month-old female rats weighing approximately 250 grams were divided into four groups labeled A, B, C and D. A corresponds to the normal group and the other groups received stimulation increasing doses with 4, 8 and 16 J/cm2 of infrared laser respectively for 15 consecutive days in five points of the liver. The rats were then sacrificed and samples of normal liver and liver stimulated with infrared inductions were extracted for immediate processing via transmission electron microscopy. From cell types transmission electron microphotographs were obtained at magnifications of 9500 X these were subjected to morphometric studies to determine volumetric fractions of the nuclei and nuclear structures. Likewise, cell and nuclear areas and nuclear-citoplasmatic relation were quantified. Analysis of the results between normal and radiated hepatocytes revealed notable differences in all the cell components quantified. It is concluded that the effects of increasing infrared stimulation doses brings transformation in their ultrastructure and morphology, fundamentally in the considerable increase in nuclear volume, chromatin volume and the nuclear-citoplasmatic relation, which ultimately translates into a functional variation, thus representing an obvious impact produced by these infrared inductions.

Análisis morfométrico de hepatoesteatosis microvesicular alcohólica de ratas / Morphometric analysis of alcoholic microvesicular hepatic steatosis in rats

Un total de 24 ratas hembras de 4 meses de vida con peso aproximado de 250 gramos fueron divididas en dos grupos de animales rotulados como A y B. El grupo A se mantuvo con pellet y agua ad libitum sirviendo como controles mientras que el grupo B conservaba el pellet y recibía una solución de alcohol 40% disuelto en agua lo cual derivó en una esteatosis alcohólica multivesicular. Ambos grupos se mantuvieron en estas condiciones por 60 días. Posteriormente las ratas fueron sacrificadas y se extrajeron muestras tanto de hígado normal-control como de hígado graso para enseguida ser procesadas para microscopía electrónica de transmisión. De hepatocitos normales y esteatósicos se obtuvieron microfotografías electrónicas de transmisión con aumentos finales de 9.500X, las cuales fueron sometidas a estudios morfométricos para determinar fracciones volumétricas de los siguientes componentes celulares: Retículo endoplasmático rugoso, mitocondrias, inclusiones lipídicas y de glicógeno, eu y heterocromatina. De igual manera se cuantificaron las áreas celulares y nucleares. Del análisis de los resultados entre hepatocitos normales y alcohólicos se visualiza que existen notables diferencias en todos los componentes celulares cuantificados. Se concluye que los efectos de la ingesta diaria de alcohol provoca en los hepatocitos una esteatosis microvesicular que genera una drástica transformación en su ultraestructura y en su morfología, situación que se traduciría, por ende, en una variación funcional, representando de esta manera el efecto que esta droga provoca en los hepatocitos.

A total of 24 female rats, aged 4 months and weighing approximately 250 g, were divided into two groups, called A and B. The group A animals were kept on pellets and water ad libitum and served as controls, while group B animals were fed pellets and given a solution of 40% alcohol dissolved in water, leading to alcoholic multivesicular steatosis. Both groups were kept under these conditions for 60 days. The rats were then euthanized and samples of normal-control and fatty liver were taken and processed for examination by transmission electron microscope. Transmission electron microscope microphotographs of normal and steatotic hepatocytes were obtained with final magnification of 9,500 X. They were subjected to morphometric studies to determine the volumetric fractions of the following cell components: Rough Endoplasmic Reticulum, mitochondria, lipid and glycogen inclusions, and eu- and heterochromatin. In addition, the cell and nucleus areas were quantified and the nucleo cytoplasmic ratio of each cell type was determined. Analysis of the results between normal and alcoholic hepatocytes shows that noticeable differences exist in all the cell components quantified. It is concluded that the effects of the daily consumption of alcohol provoke microvesicular steatosis in the hepatocytes, generating a drastic transformation of their ultrastructure and morphology. This finally leads to functional variations, representing the effects produced by this drug in the hepatocytes.

Glucógeno hepático en dengue severo: análisis histopatológico / Hepatic glucogen in cases with severe dengue: histopathological changes

Antecedentes: El virus del dengue afecta distintos órganos, pero se ha determinado que el hígado es el principal blanco de acción y en donde ocurre la mayor severidad del daño. Existen pocos estudios sobre los cambios histológicos durante la infección por dengue. Objetivos: Analizar las alteraciones histopatológicas post-mortem en hígados de pacientes que presentaron la forma grave del dengue. Métodos: Se revisaron los cortes de hígado de 20 pacientes con dengue severo y se realizaron coloraciones y pruebas para glucógeno. Resultados: Encontramos pérdida de glucógeno citoplasmático en todos los casos analizados y la presencia de glucógeno intranuclear en dos de ellos. Conclusiones: En este estudio se reporta por primera vez la presencia de masas de glucógeno intranuclear en hepatocitos de dos niños fallecidos con dengue grave.

Background: Dengue virus affects various organs, but the liver is the main target of damage and where the most severe damage can occur. There are few studies on the histological changes in the liver during dengue infection. Aims: To analyze the histopathological post-mortem alterations in livers from patients with Methods: We revised serial liver sections, which were stained and tested for glycogen, from 20 patients with severe dengue. Results: We found loss of cytoplasmic glycogen in all cases analyzed and the presence of intranuclear glycogen in two of them. Conclusions: This is the first report of the presence of intranuclear glycogen masses during severe dengue.

Hígado graso no alcohólico en pediatría / Pediatric nonalcoholic fatty liver

La obesidad es un síndrome o trastorno nutricional multifactorial complejo con causas genéticas, conductuales y ambientales, es la forma más común de malnutrición en los países desarrollados y en muchos en vías de desarrollo. El HGNA se define como una entidad anátomo-patológica con la acumulación macrovesicular de grasa (triglicéridos) superior al 5 por ciento de los hepatocitos. El espectro de esta enfermedad incluye la esteatosis simple, la esteatohepatitis no alcohólica, que puede acompañarse de varios grados de fibrosis, y en su etapa final la cirrosis. El objetivo de esta revisión resumir en forma monográfica los aspectos más esenciales de esta afección en pediatría para el uso de cualquier especialista médico...

Obesity is a complex multifactor nutritional syndrome or disease with genetic, behavioral and environmental causes, and it is also the most common form of malnutrition in developed and in many developing countries. The NAFL is defined as an anatomical-pathological disease showing over 5 percent macrovesicular accumulation of adiposity (triglycerides) in hepatocytes. The spectrum of this disease includes simple steatosis, non-alcoholic steatohepatitis that may be accompanied by several levels of fibrosis, and finally cirrhosis in the final stage. The objective of this review was to summarize in a monographic way the most essential aspects of this disease at pediatric ages so that this information may be used by any medical expert...

Efecto de estimulaciones infrarrojas sobre hepatoesteatosis microvesicular alcohólica de ratas / Infrared laser effect on alcoholic rat hepatic microvesicular steatosis

24 ratas hembras de 4 meses de vida con peso aproximado de 250 gramos fueron divididas en dos grupos de animales, A y B. Ambos grupos se mantuvieron con pellet y solución de alcohol 40% durante 60 días generándoseles una hepatoesteatosis microvesicular. Los hígados de los animales pertenecientes al grupo B fueron estimulados con láser infrarrojo 6 J/cm2 durante 15 días consecutivos. Posteriormente, las ratas fueron sacrificadas y se extrajeron muestras de hígado y luego procesadas para microscopía electrónica de transmisión. De ambos tipos celulares se obtuvieron microfotografías electrónicas de transmisión con aumentos finales de 8.500 X, las cuales fueron sometidas a estudios morfométricos para determinar fracciones volumétricas de los siguientes componentes celulares: Retículo endoplasmático rugoso (RER), mitocondrias, inclusiones lipídicas y de glicógeno, eu y heterocromatina. De igual manera se cuantificaron las áreas celulares y nucleares. Del análisis de los resultados entre hepatocitos esteatósicos e irradiados se visualiza que existen diferencias en todos los componentes celulares cuantificados y se concluye que los efectos de la estimulación infrarroja con dosis de 6 J/cm2 provoca en los hepatocitos con esteatosis microvesicular transformación en su ultraestructura y en su morfología, fundamentalmente en la disminución acentuada de las infiltraciones lipídicas hasta en un 80% situación que se traduciría, en una variación funcional, representando de esta manera un efecto evidente que estas inducciones infrarrojas generan.

24 four-month-old female rats weighing approximately 250 grams were divided into two groups labeled A and B. Both groups were fed pellets and a 40% alcohol solution for 60 days, which caused a microvesicular hepatic steatosis. The livers of the animals in Group B were stimulated with 6 J/cm2 of infrared laser for 15 consecutive days. The rats were then sacrificed and samples of both steatosic liver and liver stimulated with infrared inductions were extracted for immediate processing via transmission electron microscopy.From both cell types transmission electron microphotographs were obtained at magnifications of 9500 X; these were subjected to morphometric studies to determine volumetric fractions of the following cell components: rough endoplasmic reticulum (RER), mitochondria, lipid and glycogen inclusions, euchromatin and heterochromatin. Likewise, cell and nuclear areas were quantified. Analysis of the results between steatosic and radiated hepatocytes revealed notable differences in all the cell components quantified. It is concluded that the effects of infrared stimulation with a dose of 6 J/cm2 brings about in the steatosic hepatocytes a microvesicular transformation in their ultrastructure and morphology, fundamentally in the considerable decrease in lipid infiltrations to 80%, which ultimately translates into a functional variation, thus representing an obvious impact produced by these infrared inductions.

Hepatocyte antigen expression in subtypes of intestinal metaplasia of the stomach / Expresión del antígeno del hepatocito en los subtipos de metaplasia intestinal del estómago

OBJECTIVE: Recently, hepatocyte antigen (Hep) was introduced as a sensitive and reliable marker of intestinal metaplasia (IM). However, the distribution of Hep expression in subtypes of IM was not described. METHODS: We examined the expression of Hep in 58 cases of chronic gastritis associated with IM by immunohistochemical staining. Cases were classified as: 19 of IM Type I (complete) cases, 16 cases of IM Type II (incomplete) and 23 cases of IM Type III (incomplete). The distribution of Hep expression was classified into four groups according to the intensity of Hep expressing metaplastic cells: negative, low, moderate and high. We also compared expression of Hep with that of MUC-1, MUC-2 and MUC-5AC. RESULTS: Hep expression showed granular cytoplasmic staining and was specifically identified in columnar cells, but not in goblet cells. There was no significant difference between Hep expression and subtypes of IM (p > 0.005). However, the difference between the distribution of Hep expression among three subtypes of IM was significant (p < 0.001). No relationship was observed among the expression of Hep, MUC-1, MUC-2 and MUC-5AC. CONCLUSION: Results of the present study revealed that the distribution of Hep expression is high in the majority of the complete type (Type I) IM cases, moderate in the majority of the incomplete Type II IM cases and low in all of the incomplete Type III IM cases and suggest that besides its role as a sensitive marker in IM, the evaluation of the distribution of Hep expression might be useful in the classification of IM.

OBJETIVO: El antígeno del hepatocito (Hep) se introdujo recientemente como un marcador sensible y confiable de la metaplasia intestinal (MI). Sin embargo, no se describe la distribución de la expresión de Hep en los subtipos de MI. MÉTODOS: Se examinó la expresión de Hep en 58 casos de gastritis crónica asociados con MI mediante tinción inmunohistoquímica. Los casos fueron clasificados como: 19 casos de tipo MI (completo), 16 casos de tipo MI II (incompleto), y 23 casos de tipo MI III (incompleto). La distribución de la expresión del Hep se clasificó en cuatro grupos según la intensidad de Hep, que expresa las células metaplásticas: negativa, baja, moderada y alta. También se comparó la expresión de Hep con la de MUC-1, MUC-2 y MUC-5AC. RESULTADOS: La expresión de Hep mostró tinción citoplasmática granular, específicamente identificada en las células columnares, pero no en las células caliciformes. No hubo ninguna diferencia significativa entre la expresión de Hep y los subtipos de MI (p > 0.005). Sin embargo, la diferencia entre la distribución de la expresión del Hep entre tres subtipos de MI fue significativa (p < 0.001). No se observó relación alguna entre la expresión de Hep, MUC-1, MUC-2 y MUC-5AC. CONCLUSIÓN: Los resultados del presente estudio revelaron que la distribución de la expresión de Hep es alta en la mayoría de los casos MI de tipo completo (tipo I), moderada en la mayoría de los casos MI de tipo II, y baja en todos los casos MI de tipo III incompleto. Los resultados sugieren que además de su papel como marcador sensible en MI, la evaluación de la distribución de expresión del Hep podría ser útil en la clasificación de MI.

Genes con islas CpG amplificados con la mezcla formamida, albúmina sérica bovina y dimetilsulfóxido / CG-rich genes amplified with the formamide, bovine seric albumin y dimethylsulfoxide mix / Genes com Ilhas CpG amplificados com a mistura formamida, albumina sérica bovina, e dimetilsulfóxido

Diversos aditivos químicos han sido utilizados para garantizar la polimerización de genes con islas CpG. El objetivo de este trabajo fue diseñar una mezcla potenciadora de PCR para amplificar genes con islas CpG. Con ese fin se analizaron fragmentos de los genes IRS2 y HNF1a con el programa EMBOSS CpG Report. Los iniciadores se diseñaron con el programa Primer 3 y se analizaron con el programa e-PCR. Se usaron tres aditivos químicos: Albúmina sérica bovina (0,1µg/µL), dimetilsulfóxido (5%) y formamida (5%) para 5 ensayos de PCR: dos usando un solo aditivo, dos combinando dos aditivos y uno combinando tres aditivos. Las amplificaciones con las mezclas se realizaron con las enzimas Taq Nativa, taq Recombinante y Taq Platinum. La calidad de los amplicones se probó por secuenciación. Fragmentos sin islas CpG (HNF-1a) amplificaron con las tres enzimas, sin el uso de los aditivos pero presentaron problemas de pureza en la secuenciación. Los fragmentos del gen IRS2 con islas CpG amplificaron sólo con la combinación de tres aditivos dimetilsulfóxido, albúmina sérica bovina y formamida, independientemente de la enzima usada, las secuencias fueron limpias. Se concluye que la mezcla de tres aditivos es una solución que permite obtener amplicones de alta calidad en genes con islas CpG, con cromatogramas limpios en la secuenciación.

Several chemical additives have been used to assure polymerization in CpG islands.The aim of the present work was to design a PCR enhancer mixture in order to amplify GC-rich genes. Fragments of IRS2 and HNF1a genes were analyzed using EMBOSS CpG Report Software. Primers were designed with the Primer3 Software and were tested with ePCR Software. Three additives were used: BSA (0.1µg/µL), DMSO (5%) and formamide (5%), in five PCR assays, two using one additive, two combining two additives and one with all additives. DNA sequences were amplified with the following enzymes: Native Taq, recombinant Taq and platinum Taq DNA polymerase. Amplicon quality was examined by sequencing. HNF1a gene was amplified without additives; however, the sequences were not amplified and showed purity problems in sequencing. The gene fragments IRS2 with CpG islands were amplified with additives DMSO, BSA and Formamida mixture, notwithstanding the enzyme used. These sequences were clean. DMSO-BSA-Formamide mixture can be a solution to obtain GC-rich DNA amplicons with such a high quality that it generates neat chromatograms during sequencing.

Diversos aditivos químicos têm sido utilizados para garantir a polimerização de genes com ilhas CpG. O objetivo do trabalho foi desenhar uma mistura que potencie PCR para amplificar genes com ilhas CpG. Para esta finalidade foram analisados fragmentos dos genes IRS2 e HNF1a com o programa EMBOSS CpG Report. Os iniciadores foram desenhados com o programa Primer 3 e se analisaram com o programa e-PCR. Foram utilizados três aditivos químicos: Albumina sérica bovina (0,1µg/µlL, Dimetilsulfóxido (5%) e formamida (5%) para 5 ensaios de PCR: dois usando um único aditivo, dois combinando dois aditivos e um combinando três aditivos. As amplificações com as misturas se realizaram com as enzimas, Taq Nativa, taq Recombinante e Taq Platinum. A qualidade das ampliações foi provada por sequenciação. Fragmentos sem ilhas CpG (HNF-1a) amplificaram com as três enzimas, sem o uso dos aditivos porém apresentaram problemas de pureza na sequenciação. Os fragmentos do gene IRS2 com ilhas CpG ampli­ficaram apenas com a combinação de três aditivos dimetilsulfóxido, albumina sérica bovina e formamida, independentemente da enzima usada, as sequências foram limpas. A conclusão que a mistura de três aditivos é uma solução que permite obter ampliações de alta qualidade em genes com ilhas CpG, com cromatogramas limpos na secuenciação.

Short-term effects of a spinosyn's family insecticide on energy metabolism and liver morphology in frugivorous bats Artibeus lituratus (Olfers, 1818) / Efeitos em curto prazo de inseticida da família das espinosinas sobre o metabolismo energético e a morfologia hepática em morcegos frugívoros

A new class of insecticide derived from fermentation of Sacharopolyspora spinosa - spinosad, has been indicated as being of low toxicity and a natural alternative to classical pesticides. In order to elucidate several aspects related to the morphophysiological changes induced by spinosad in Artibeus lituratus, the effects of a seven-day administration on plasma glucose, glycogen, protein and lipid concentrations were evaluated, and possible changes in liver cells were examined by histological analysis. Animals were fed with spinosyn-contaminated fruit through immersion in a solution. Data reporting on metabolism revealed a decrease in hind limb muscle lipid concentration in the treated group. Morphological analysis indicated a significant increase in liver cell diameter in treated animals compared to the control group. This study indicates that spinosyn, used at its recommended dose, does not affect general energy metabolism in A. lituratus but may affect some ultrastructural characteristics of liver cells.

Uma nova classe de inseticida derivado da fermentação de Sacharopolyspora spinosa - espinosade - tem sido indicada como uma alternativa natural de baixa toxicidade aos agrotóxicos clássicos. A fim de elucidar diversos aspectos relacionados às mudanças morfofisiológicas induzidas por espinosade Artibeus lituratus, os efeitos da administração durante sete dias sobre a glicose plasmática, proteína de glicogênio, e as concentrações de lipídios foram avaliados, assim como possíveis alterações nas células do fígado foram examinadas por análise histológica. Os animais foram alimentados com frutas contaminadas com espinosade por meio de imersão em uma solução. Os dados sobre o metabolismo revelaram um decréscimo na concentração de lipídios dos músculos das patas posteriores dos animais do grupo tratado. A análise morfológica indicou um aumento significativo no diâmetro das células do fígado dos animais tratados em relação ao controle. Este estudo indica que o espinosade, utilizado na dose recomendada, não afeta o metabolismo energético em geral de A. lituratus, mas pode afetar algumas características ultraestruturais das células hepáticas.

Descripción histológica e histoquímica del hígado de cobayo (Cavia porcellus) / Histological and histochemical description of the liver of the guinea pig (Cavia porcellus)

Si bien se han realizado estudios en el hígado de variadas especies, hay pocas investigaciones en cobayo, un roedor de fácil manejo y usado como animal de experimentación. El objetivo de este estudio fue describir en el hígado de cobayo, algunos aspectos histológicos e histoquímicos, lo cual permitiría realizar estudios experimentales. Se utilizaron 7 cobayos (Cavia porcellus) machos, obtenidos del Bioterio de la Universidad de La Frontera, Temuco, Chile. Las muestras fueron fijadas en formalina tamponada y procesadas para su inclusión en paraplast. Se realizaron cortes seriados de 5 um, los que fueron teñidos para estudios histológico e histoquímico. El hígado presentó una arquitectura lobulillar con límites poco definidos y espacios porta constituidos por estructuras vasculares y canaliculares biliares. Los cordones parenquimatosos estaban constituidos por hepatocitos de aspecto cuboide a poligonal que se disponían en forma radial desde la vena centro lobulillar. En las células hepáticas se demostró la presencia de glucógeno, mucinas neutras y hemosiderina. El diámetro medio del hepatocito fue de 17,25 um y el del núcleo fue de 7,31 um. El hígado de cobayo presenta similitudes con otras especies; sin embargo, para determinar parámetros morfológicos, se deben considerar: la edad, las condiciones medioambientales, la alimentación, etc.

While studies have been conducted in the liver of different species, there is little research on the guinea pig, a rodent of easy handling and used as anexperimentationanimal. The aim was to describe in the guinea pig liver, some histological and histochemical aspects, which would allowexperimental studies to be carried out. We used seven male guinea pigs (Cavia porcellus) obtained from the Bioterium of the Universidad de La Frontera, Temuco, Chile. Samples were fixed in buffered formalin and processed for inclusion in paraplast. Serial thick of 5 um were stained for histological and histochemical studies. The liver presented a lobular architecture vague borders and portal tracts consisting of vascular structures and canalicular bile. Parenchymal cords were composed of hepatocytes with a cuboidal to polygonal appearence, and radially distributed from the central lobular vein. It showed the presence of glucogen liver cells, and hemosiderin neutral mucins. The average diameter of hepatocytes was 17.25 um and the nucleous was of 7.31 um. The guinea pig liver shows similarities with other species, however, to determine morphological parameters, age, environmental conditions of animals, feeding, etc. must be considered.

Effect of Urtica dioica L extract on quantitative morphometric alterations of liver parenchymal cells in STZ diabetic rats / Efecto del extracto de Urtica dioica sobre alteraciones morfométricas cuantitativas de las células del parénquima hepático en ratas STZ diabéticas

Diabetes is associated with several structural and functional liver abnormalities that affect glycogen and lipid metabolism. In this study, an attempt was made to evaluate the effects of hydroalcoholic extract of Urtica dioica leaves on Quantitative morphometric changes in parenchymal cells of the livers in STZ diabetic rats. Thirty male Wistar rats were allocated in 3 groups: normal, diabetic and treatment. Hyperglycemia was induced by 80 mg/kg Streptozotocin intraperitoneally. One week after the injection of STZ, the third group received the hydroalcoholic extract of Urtica dioica at 100 mg/kg/day over four weeks. After five weeks, the animals were sacrificed and whole livers were removed. Liver specimens were used for quantitative morphometric analyze after hematoxylin and eosin staining. All data are shown as means plus standard errors of means and were analyzed using One-Way ANOVA test at P<0.05.The mean area of hepatocytes, nuclei and nucleolus had a decrease in periportal zone and an increase in perivenous zone in the diabetic and treatment groups. The increase of hepatocyte area in perivenous zone and reduce of nucleus area in periportal zone was significant in the diabetic group in comparison with control group (P<0.05), but were not significant between treatment and diabetic group. This study showed that administration of 100 mg/kg/day of Urtica dioica leaves extracts after induction of diabetes can cause a little modulating in the main morphometric indices of liver such as area of hepatocytes, nuclei and nucleolus in periportal and perivenous zones.

La diabetes esta asociada con severas anormalidades en la estructura y funcionamiento del hígado que afectan el metabolismo glicogénico y lipídico. En el presente estudio, se evaluó los efectos del extracto hidroalcohólico de Urtica dioica, observando los cambios morfométricos cuantitativos en las células del parénquima hepático de ratas diabéticas STZ. Se utilizaron 30 ratas Wistar, machos, conformando 3 grupos: normal, diabéticas y con tratamiento. Se indujo una hiperglicemia injectando intraperitonealmente con 80 mg/kg de estreptozotocina. Una semana después de la inyección de STZ, el tercer grupo recibió el extracto hidroalcohólico de Urtica dioica en dosis de 100mg/kg/día por 4 semanas. Después de 5 semanas, los animales fueron sacrificados y sus hígados removidos.Las muestras de hígado fueron usadas para análisis morfométrico cuantitativo y posteriormente teñidos con hematoxilina eosina. Los datos son mostrados como promedios con sus respectivas desviaciones Standard y fueron analizados con un test de ANOVA con un p menor a 0,05. El área promedio de los hepatocitos, núcleos y nucléolos tuvieron una disminución en la zona periportal y un incremento en la zona perivenosa en los grupos diabético y con tratamiento. El incremento del área del hepatocito en la zona perivenosa y la reducción del área nuclear en la zona periportal fue significativa en el grupo diabético en comparación con el grupo control (p menor que 0,05), pero no fue significativo entre las ratas tratadas y el grupo diabético. Este estudio mostró que la administración de 100 mg/kg/día de extracto de Urtica dioica después de la inducción de diabetes puede causar una pequeña modulación en los índices morfométricos principales del hígado, tales como: área de los hepatocitos, núcleos y nucléolos en las zonas periportal y perivascular.

A regeneração hepática e os inibidores da enzima conversora da angiotensina

No presente estudo, o autor aborda conceitos fundamentais acerca do fenômeno regenerativo hepático, seguido de alguns aspectos importantes relacionados ao sistema calicreína-cininas. A associação entre os inibidores da enzima conversora da angiotensina, a bradicinina e a regeneração hepática é discutida à luz de estudos recentes, que revelam um papel estimulante das cininas sobre a proliferação hepatocelular. Os inibidores da enzima conversora da angiotensina, extremamente utilizados no tratamento clínico da hipertensão arterial sistêmica, da insuficiência cardíaca congestiva e da nefropatia diabética, também são capazes de favorecer a regeneração hepática.