Asynchrony between in vivo and in vitro rabbit embryos

Background: Comparative features of embryos developed under in vitro and in vivo conditions are particularly important in designing embryo transfer procedures that fulfil embryo-recipient synchronization requirements. Objective: To determine the degree of asynchrony in rabbit embryo development between cultured and in vivo embryos. Methods: A total of 55 non- lactating multiparous female rabbits were used. Embryos were classified as 16-cells or early morulae at 48 hours post-coitum (hpc). Embryos were cultured during 30 or 32 h and embryo development was compared with in vivo embryos of 72 hpc. In vitro and in vivo embryos at 72 hpc were classified as early or compacted morulae. Bayesian statistics was used. Difference between in vivo and in vitro embryos and the actual probability of the difference between the in vivo and in vitro embryo higher than zero (P) was estimated. Results: The percentage of compacted morulae was higher in in vivo embryos than in in vitro embryos with +6 h of asynchrony (73.5 and 32.8%, P=1.00). But the percentage of compacted morulae was similar with +8 h asynchrony. Conclusions: In vitro embryos delay their development by + 8 hours compared to in vivo embryos.

Antecedentes: El desarrollo comparativo de embriones producidos in vitro e in vivo es particularmente importante para el diseño de procedimientos de transferencia de embriones cuando se requiere sincronización entre el embrión y la hembra receptora. Objetivo: Determinar el grado de asincronía en el desarrollo embrionario entre embriones in vivo y cultivados. Métodos: Un total de 55 conejas multiparas no lactantes fueron utilizadas. Los embriones se clasificaron en 16 células o mórulas tempranas a las 48 horas después del coito (hpc). Los embriones se cultivaron durante 30 ó 32 horas y el desarrollo embrionario se comparó con embriones de 72 hpc obtenidos in vivo. Los embriones in vitro e in vivo a 72 hpc se clasificaron como mórulas tempranas o compactas. Se utilizó estadística bayesiana. Se estimó la diferencia entre embriones in vivo e in vitro y la probabilidad de que la diferencia sea superior a cero (P). Resultados: El porcentaje de mórulas compactas fue mayor en embriones in vivo que en embriones in vitro con +6 horas de asincronía (73,5 y 32,8%, P=1,00), pero el porcentaje de mórulas compactas fue similar con asincronía de +8 horas. Conclusión: Los embriones cultivados retrasan +8 horas su desarrollo en comparación con los embriones in vivo.

Antecedentes: A aquisição do desenvolvimento de embriões produzidos in vitro e in vivo é particularmente importante na concepção de procedimentos de transferência de embriões em que a sincronização entre o embrião e a fêmea receptora é necessária. Objetivo: Determinar o grau de assincronia no desenvolvimento embrionário entre embriões cultivados e in vivo. Métodos: Um total de 55 coelhos multíparos não lactantes foram usados. Os embriões foram classificados em 16 células ou mórulas iniciais 48 horas de gestação (hpc). Os embriões foram cultivados por 30 ou 32 horas e o desenvolvimento embrionário foi comparado com embriões de 72 hpc obtidos in vivo. Embriões in vitro e in vivo a 72 hpc foram classificados como mórulas precoces ou compactadas. Estatísticas bayesianas foram usadas. A diferença entre embriões in vivo e in vitro e a probabilidade de que a diferença seja maior que zero (P) foi estimada. Resultados: A porcentagem de mórulas compactadas foi maior em embriões in vivo do que em embriões in vitro com +6 horas de assincronia (73,5 e 32,8%, P=1,00). Mas a porcentagem de mórulas compactadas foi semelhante com assincronia de +8 horas. Conclusão: Embriões cultivados atrasam seu desenvolvimento em +8 horas em comparação com embriões in vivo.

In vitro development of murine embryos in presence of campylobacter fetus / Desarrollo de embriones murinos in vitro en presencia de campylobacter fetus

Bovine campylobacteriosis caused by Campylobacter fetus is associated with reproductive losses. The knowledge about the mechanisms of bacterial pathogenesis is limited, then a murine experimental model is proposed. BALB/c females and males were used. Two-cell embryos were cultured in Ham-F10 as control group (CG). Treatment groups were constituted by the addition of Cfv 1 and 3, or Cff 2 and 5. Morulae were placed in Ham-F10 (CG); treatment groups were constituted by the addition of Cfv27, CFF (cell-free filtrate) and Brucella broth (BB). Blastocysts were cultured in MEM (CG); challenge group were constituted by the addition of Cfv 27. Differentiation, hatching, hatched, adhesion and expansion were evaluated. Results were analyzed by Chi2 test. In two-cell embryo, the differentiation rate was not modified when the study strains were added (p > 0.05). The differentiation rate at 24 h for embryos at the morula stage was lower for BB, Cfv, and CFF, compared with CG (p < 0.05). After 48 h culture, no differences were observed in blastocyst formation for Cfv and BB, compared to CG (p > 0.05). However, the differentiation rate for the CFF group was lower than for CG (p < 0.05). At 48 and 72 h, the hatching rate was higher in CFF and Cfv groups than in CG (p < 0.05). Differences were not detected in blastocyst cultures. In conclusion, under these experimental conditions, Cf was not detrimental to the development of murine embryos. Efforts will be intensified to establish in vitro infection models that reproduce their pathogenicity.

La campilobacteriosis bovina caudada por Campylobacter fetus produce pérdidas reproductivas existiendo poca información de los mecanismos de patogenicidad de dicha bacteria, por lo cual se propone un modelo utilizando ratones BALC/c. Embriones de dos células fueron cultivados en Ham-F10: grupo control (GC), los grupos experimentales fueron adicionados con las cepas Cfv 1, Cfv 3, Cff 2 y Cff 5. Mórulas fueron cultivadas en Ham-F10 (GC); los grupos tratados recibieron Cfv27, CFF (filtrado libre de células) y caldo Brucella (BB). Blastocistos fueron cultivados en MEM (GC) y MEM más Cfv 27 (grupo desafiado). Se evaluó: diferenciación, "hatching", "hatched", adhesión y expansión. Los resultados fueron analizados por Chi2. En embriones de dos células, la diferenciación no fue modificada por acción de las cepas evaluadas (p > 0,05). Para embriones en estadío de mórula, la diferenciación a las 24 h de cultivo fue menor para BB, Cfv, y CFF, comparado con el GC (p < 0,05). Luego de 48 h de cultivo, no hubo diferencias entre Cfv, BB, y CG (p > 0,05), no obstante para el grupo CFF la diferenciación fue menor al CG (p < 0,05). El porcentaje de "hatching" (48 y 72 h de cultivo), fue mayor en los grupos CFF y Cfv comparado con el GC (p < 0,05). La adición de Cfv 27 no modificó el desarrollo de blastocistos. En el modelo propuesto, Cf no afectó negativamente el desarrollo embrionario. Futuros trabajos serán necesarios para establecer un modelo de infección in vitro en pos de reproducir su patogenicidad.

Ehrlichia canis morulae and DNA detection in whole blood and spleen aspiration samples / Detecção de mórulas e DNA de Ehrlichia canis em sangue e em aspirado de baço em cães naturalmente infectados

The aim of this study was to compare the detection of Ehrlichia canis morulae and DNA by nPCR in whole blood and spleen aspiration. The sample included 40 dogs showing thrombocytopenia associated to clinical signs suggestive of canine ehrlichiosis. Morulae detection showed that in 35 of the dogs studied, 17 had morulae in spleen tissue, and two in buffy coat smears. E. canis DNA was detected in 29/40 blood samples. We verified that morulae detection is more efficient in cytological preparations from spleen aspiration. On the other hand, nPCR on spleen and blood samples were equally efficient for disease diagnosis.

O objetivo desse estudo foi comparar a pesquisa de mórulas de Ehrlichia canis e a nPCR em sangue total e em aspirado de baço. Selecionaram-se 40 cães apresentando trombocitopenia associada a sinais e sintomas sugestivos de erliquiose canina. A pesquisa de mórula mostrou que dentre 35 amostras, 17 apresentaram mórulas nas preparações do baço, e duas nos esfregaços feitos a partir da papa leucocitária. O DNA de Ehrlichia canis foi detectado em 29 de 40 amostras de baço e em 30 de 40 no sangue. No presente estudo observou-se que a pesquisa de mórula é mais eficiente nas preparações citológicas obtidas da punção aspirativa do baço e que tanto a nPCR de baço quanto a de sangue foram eficientes no diagnóstico da doença.

Aspectos epidemiológicos, clínicos e hematológicos de 251 cães portadores de mórula de Ehrlichia spp. naturalmente infectados / Epidemiological, clinical, and hematological aspects of 251 dogs naturally infected with Ehrlichia spp. morulae

Realizou-se um estudo retrospectivo dos aspectos epidemiológicos, sinais clínicos, dados de exame físico e alterações hematológicas da erliquiose em 251 cães naturalmente infectados por Ehrlichia spp. Dos 4407 casos atendidos em hospital veterinário no período de janeiro de 2002 a dezembro de 2003, verificou-se que 251 cães eram portadores de mórula de Ehrlichia spp. em leucócitos de sangue periférico. Destes, 48 foram eliminados das avaliações por apresentarem patologias concomitantes. Nos 203 cães restantes, verificou-se que houve maior ocorrência em fêmeas (61,1 por cento) e que a doença manteve-se constante durante todo o período avaliado. Observou-se que 38 por cento encontravam-se na faixa etária entre um e 23 meses e 58,6 por cento eram de raça definida. As principais alterações clínicas observadas foram apatia, anorexia/hiporexia, vômito, secreção oculonasal e esplenomegalia. Cento e cinco cães apresentaram temperatura retal entre 38 e 39,5ºC. As alterações observadas com maior frequência no hemograma foram anemia, predominando o tipo normocítica normocrômica (58,2 por cento); desvio nuclear de neutrófilos para a esquerda (67 por cento) e eosinopenia (58,1 por cento).

A study of epidemiological and clinical aspects, alterations of physical exams, and hematological changes of canine ehrlichiosis was performed. A retrospective study was performed in 4,407 dogs referred to a Veterinary Hospital from January 2002 to December 2003. Of all cases, 251 dogs showed Ehrlichia spp. morulae. Among these, 48 were excluded from the study due to other co-infection by other pathologies. In the other 203 evaluated dogs, females (61.1 percent) were more infected than males. The dogs aged from one to 23 months (68.6 percent) and 58.6 percent were definite breed. Emesis, apathy, anorexia/hypoxeria, spleenomegaly, and nasal discharge were the most common signs presented. Rectal temperature was 38 - 39.5ÚC in 105 dogs. The most usual changes seen during the hematological tests were normochromic and normocitic anemia (58.2 percent), a left shift of the neuthrophils (67 percent), and eosinopenia (58.1 percent).