Dosificación empírica de vancomicina en neonatos: relación entre recomendación de dosis iniciales y relación área bajo la curva en 24 h/concentración inhibitoria mínima / Empiric vancomycin dosing in neonates: relationship between initial dose and 24 h area under the curve/minimum inhibitory concentration ratio

Resumen Introducción: Vancomicina es un antimicrobiano ampliamente utilizado para infecciones por Staphylococcus coagulasa negativa en neonatos; sin embargo, no existe claridad sobre la dosis empírica que asegure su eficacia terapéutica. Objetivo: Evaluar la relación entre las dosis iniciales de vancomicina utilizadas en una Unidad de Cuidado Intensivo Neonatal (UCIN) con la eventualidad de alcanzar el objetivo terapéutico de área bajo la curva sobre concentración inhibitoria mínima (ABC/CIM) mayor a 400 µg/h/mL. Materiales y Método: Estudio descriptivo y retrospectivo, realizado entre febrero 2016 y marzo 2018. Se incluyeron neonatos en tratamiento con vancomicina por sospecha/confirmación de infección por cocáceas grampositivas y medición de concentraciones plasmáticas de vancomicina al inicio del tratamiento. La probabilidad de alcanzar el objetivo terapéutico se evaluó mediante re-muestreo de valores de ABC y CIM. Resultados: Se incluyeron 38 pacientes con 49 concentraciones plasmáticas de vancomicina. Los aislados microbiológicos se confirmaron en 94,7% de los pacientes (n = 36). Los valores de ABC/CIM en dos grupos (según niveles valle de vancomicina < 10 µg/mL y ≥ 10 µg/mL), fueron de una mediana de 327 (IQ 25-75 = 174-395) y 494 (IQ 25-75 = 318-631), respectivamente (p = 0,035). Las dosis empíricas utilizadas logran logran un objetivo terapéutico (ABC/CIM > 400) de sólo 47,7% considerando CIMs en nuestra institución. Conclusiones: Teniendo en cuenta las sensibilidades institucionales, no es posible asegurar alcanzar ABC/CIM > 400 µg/h/mL. Se debe seguir investigando para replantear las actuales estrategias de dosificación y así determinar la más apropiada para neonatos.

Abstract Background: Vancomycin is used for treating coagulase-negative staphylococcus infections in neonates. However, concerns about the appropriate empirical dosing required for optimal efficacy, still remain. Aim: To assess the relationship between the initial doses of vancomycin used in a Neonatal Intensive Care Unit (NICU) with the possibility of achieving therapeutic target of AUC024h/MIC > 400 µg/h/mL. Methods: Retrospective and descriptive study carried out between February 2016 and March 2018. All neonates treated with vancomycin for suspected/proven Gram-positive infection and with at least one trough serum concentration level were included. Probability of target attainment (PTA) was evaluated through resampling of AUC and MIC values. Results: Final dataset included 38 patients and 49 trough vancomycin levels; 94.7% of these cases (n = 36) were confirmed Gram-positive infections. The median AUC/MIC values for the trough values vancomycin < 10 µg/mL group and for the ≥ 10 µg/mL group were 327 (IQR 174-395) and 494 (IQR 318-631) respectively (p = 0.035). Current empirical dosing strategy has a 47.7% PTA (AUC/MIC > 400) when taking institutional MICs into account. Conclusions: It is not possible to assure achieving a AUC/MIC > 400 µg/h/mL when considering institutional sensibilities. Current empiric dosing strategies should be reconsidered and further investigation needs to be done to help determine the appropriate empirical dosing required for optimal efficacy in neonates.

Capacidad de formación de biopelícula y limo en Staphylococcus que causan mastitis subclínica bovina en el estado Zulia-Venezuela / Biofilm formation and slime producing ability in Staphylococci causing subclinic bovine mastitis in the Zulia state-Venezuela

Un total de 79 cepas de S. aureus y 47 cepas de Staphylococcus coagulasa negativa (SCN) aislados de muestras de leche de vaca con mastitis subclínica fueron evaluadas para establecer su propiedad para formar biopelícula como uno de los factores de virulencia más importantes. Usando el método de Rojo Congo Agar, 80% de las cepas de S. aureus fueron productores de limo, mientras que en las cepas de SCN el porcentaje fue de 32%. Por el método de microplaca, 55%, 17% y 28% de los aislamientos de S. aureus fueron fuerte, moderadas y débiles productoras de biopelícula, mientras en los SCN el porcentaje fue 43%, 17% y 40%, respectivamente. Se realizó un ensayo de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) a todos los aislamientos con la finalidad de identificar el gen A de adhesión intracelular (icaA). En las cepas de S. aureus el gen icaA estuvo presente en el 65% de los aislamientos, y en los SCN en el 11%. La mayoría de las cepas de S. aureus caracterizados en el estudio fueron formadores de biopelícula, lo cual sugiere que está tiene un importante papel en la virulencia de S. aureus aislados de infecciones intramamarias en bovinos del estado Zulia.

A total of 79 S. aureus strains and 47 coagulase negative Staphylococcus (CNS) isolates from cow milk suffering subclinical mastitis were investigated for their ability to form biofilm as one of the most important virulence factors. Using Congo Red Agar method, 80% of S. aureus strains were slime producers, while in CNS was 32%. By microtiter plate method, 55%, 17%, and 28% of S. aureus isolates were strong, moderate, and weak biofilm producers, respectively, while in CNS the percentages were 43%, 17%, and 40%, respectively. All isolates were screened by Polymerase chain reaction (PCR) for amplification of intercellular adhesion gene A (icaA). In S. aureus isolates the icaA gene was present in 65 % while in CNS was 11%. The majority of S. aureus characterized in this study formed biofilm, which suggests that biofilm formation has an important role in the virulence of S. aureus isolated from bovine intramammary infections in Zulia state.

Resistencia a oxacilina, eritromicina y gentamicina en cepas de Staphylococcus coagulasa negativa aisladas de hemocultivos / Resistance to oxacillin, erythromycin and gentamycin in coagulase negative Staphylococcus strains isolated from blood cultures

La resistencia a los antimicrobianos en bacterias Gram positivas como Staphylococcus coagulasa negativa constituye una amenaza mundial emergente. El propósito de la presente investigación fue identificar los genes de resistencia a oxacilina (mecA), eritromicina (erm y msrA), y gentamicina aac(6´)/aph(2´´), en cepas de Staphylococcus coagulasa negativa aisladas de hemocultivos de pacientes atendidos en el Hospital Universitario de Maracaibo. La detección fenotípica se realizó mediante métodos automatizados. Se utilizó la reacción en cadena de la polimerasa para detectar la presencia de genes de resistencia a los antimicrobianos. Se estudiaron 34 cepas cuya distribución por especie fue: S. haemolyticus (38,23%), S. epidermidis (29,42%), S. hominis (26,47%), S. xylosus y S. capitis (5,88% cada uno). Todas las cepas fueron resistentes a oxacilina. La resistencia a gentamicina varió entre 38,46% y 100%; mientras que la resistencia a eritromicina osciló entre 77,78% y 100%. Los análisis mostraron la presencia de los genes mecA (100%), ermA (35,2%), ermC (41,17%), msrA (17,64%), y aac(6´)/aph(2´´) (61,76%). En conclusión, se encontró una alta frecuencia de genes de resistencia a estos antibióticos y la Unidad de Cuidados Intensivos fue el servicio médico donde se aisló el mayor porcentaje de cepas portadoras de estos genes.

Resistance to antimicrobials in Gram-positive bacteria such as coagulase negative Staphylococcus is an emerging global threat. The purpose of this research was to identify the genes for resistance to oxacillin (mecA), erythromycin (erm and msrA), and gentamicin aac(6´)/aph(2´´), in Staphylococcus coagulase negative strains isolated from blood cultures from patients attended at the University Hospital in Maracaibo. Phenotypic detection was performed using automated methods. Polymerase chain reaction was used for the detection of antimicrobial resistance genes. Be studied 34 strains whose distribution by species was: S. haemolyticus (38.23%), S. epidermidis (29.42%), S. hominis (26.47%), S. xylosus and S. capitis (5.88% each one). All strains were resistant to oxacillin. Gentamicin resistance varied between 38.46% and 100%; while the erythromycin resistance ranged between 77.78% and 100%. The analyses showed the presence of genes mecA (100%), ermA (35.2%), ermC (41.17%), msrA (17.64%), and aac(6´)/aph (2´´) (61,76%). In conclusion, is found a high frequency of genes for resistance to these antibiotics and the intensive care unit was the health service where the highest percentage of isolated strains carriers of these genes.

Enterotoxinas, biofilm y resistencia a los agentes antimicrobianos de cepas de Staphylococcus coagulasa negativa aisladas de hemocultivos / Enterotoxins, Biofilm and Resistance to Antimicrobial Agents of Coagulase-Negative Staphylococcus Strains Isolated from Blood Cultures

Staphylococcus coagulasa negativa (SCN) es el microorganismo que se aísla con mayor frecuencia en los hemocultivos. Sin embargo, es poco el conocimiento que se tiene sobre los factores de virulencia producidos por SCN que contribuyen a la patogénesis de las infecciones causadas por estos microorganismos. El presente estudio se realizó para determinar la producción de enterotoxinas estafilocócicas, la producción de biofilm y la resistencia a los agentes antimicrobianos. Con este propósito, un total 48 cepas de SCN aisladas de hemocultivo en el Hospital Universitario de Maracaibo, Zulia, Venezuela fueron estudiadas. Las enterotoxinas estafilocócicas fueron detectadas por aglutinación en látex pasiva reversa. La producción de biofilm fue evaluada por un ensayo cuantitativo usando microplacas. La susceptibilidad contra los agentes antimicrobianos fue probada por el método de difusión del disco. Seis cepas (12,5%) aisladas de estafilococos fueron enterotoxigénicas. De estas, 3 fueron positivas para enterotoxina estafilocócica D (EED), 2 para enterotoxina estafilocócica A (EEA) y 1 de los aislamientos fueron positivos para enterotoxina estafilocócica B (EEB), enterotoxina estafilocócica C (EEC) y EED. Veintiuno de los aislamientos (44%) fueron productores de biofilm. Alta frecuencia de resistencia fue observada contra oxacilina (90%), gentamicina (83%) y eritromicina (67%). Ningún aislamiento mostró resistencia a vancomicina. Teniendo en cuenta que la importancia etiológica de SCN a menudo ha sido ignorada, la presente investigación confirmó que estos microorganismos no deben ser ignorados o clasificados como contaminantes.

Coagulase-negative staphylococci (CNS) have been identified as the etiological agent in various infections and are currently the microorganisms most frequently isolated in blood cultures. However, little is known about the virulence factors produced by CNS that contribute to the pathogenesis of infections caused by these microorganisms. This study was designed to determine the production of staphylococcal enterotoxins, biofilm production and resistance to antimicrobial agents. For this purpose, a total of 48CNS strains isolated from blood cultures at the University Hospital in Maracaibo, Zulia, Venezuela, were studied. Staphylococcal enterotoxins were detected by reversed passive latex agglutination. Biofilm production was assessed in a quantitative assay using a microtiter-plate. Susceptibility against antimicrobial agents was tested by the disk diffusion method. Six strains of staphylococci isolates (12.5%) were found to be enterotoxigenic. Of these, 3 strains were positive for staphylococcal enterotoxin D (SED), 2 for SEA and 1 of the isolates was positive for SEB, SEC and SED.Twenty-one isolates (44%) were found to be biofilm producers. A high frequency of resistance was observed with oxacillin (90%), gentamicin (83%) and erythromycin (67%). None of the isolates showed resistance to vancomycin. Taking into consideration that the etiological importance of CNS has often been neglected, the present investigation confirmed that these microorganisms should not be ignored or classified as mere contaminants.

Staphylococcus coagulasa-negativa clínicamente significativos: Especies más frecuentes y factores de virulencia / Clinically significant coagulase-negative staphylococci: Most frequent species and virulence factors

Coagulase-negative staphylococci have emerged as responsible for a large number of infections. However, it is often difficult to assess its pathogenic role or to discard it as a contaminant. Aim: The goal of this study was to identify clinically significant coagulase-negative staphylococci to the species level and their virulence factors. Isolates came from patients consulting at the San Roque Laboratory from 2009 to 2011. Material and Methods: Species identification was performed by De Paulis et al simplified method. Production of biofilm, hemolysins, lipases, lecithinases and DNase were determined by conventional methods; methicillin-resistance by diffusion method and mecA and Panton-Valentine genes, by multiplex PCR. Results: Out of 64 isolates, 40.6% were S. epidermidis; 20.3%, S. haemolyticus, and 15.6%, S. lugdunensis. Biofilm production was detected in 73.1% of S. epidermidis, 53.8% of S. haemolyticus and 40% of S. lugdunensis. mecA gene was identified in 69.2% of S. epidermidis, 92.3% of S. haemolyticus and none of S. lugdunensis. 83% of mecA (+) S. epidermidis isolates were biofilm producers as compared to 50% of the mecA (-). Conclusion: The frequency of S. lugdunensis, the most virulent coagulase-negative staphylococci species, was relatively high. The main virulence factor in S. epidermidis was biofilm production, being higher in those resistant to methicillin.

Staphylococcus coagulasa-negativa ha emergido como responsable de un gran número de infecciones. No obstante, con frecuencia es difícil asegurar su rol patógeno o descartarlo como contaminante. Objetivo: Estudiar a nivel de especies Staphylococcus coagulasa-negativa clínicamente significativos y sus factores de virulencia, de aislados provenientes de pacientes del Laboratorio San Roque de Asunción, Paraguay entre los años 2009 y 2011. Material y Métodos: Para la identificación de especies fue utilizado el método simplificado de De Paulis y cols. La producción de biopelícula, hemolisinas, lipasas, lecitinasas, AD-Nasa, fue determinada por métodos convencionales; la resistencia a meticilina por difusión y los genes mecA y Panton-Valentine por RPC múltiple. Resultados: De 64 aislados, 40,6% correspondió a S. epidermidis, 20,3% S. haemolyticus y 15,6% S. lugdunensis. La producción de biopelícula fue detectada en S. epidermidis en 73,1%, S. haemolyticus 53,8% y S. lugdunensis 40%. El gen mecA fue identificado en 69,2% de S. epidermidis, 92,3% de S. haemolyticus y en ninguno de S. lugdunensis. El 83% de S. epidermidis mecA (+) fue productor de biopelícula en comparación a 50% de los mecA (-). Conclusión: La frecuencia de S. lugdunensis, una de las especies más virulentas de Staphylococcus coagulasa-negativa fue relativamente alta; y el principal factor de virulencia en S. epidermidis fue la producción de biopelícula, siendo mayor en los resistentes a meticilina.

Caracterización fenotípica de cepas de Staphylococcus coagulasa negativa aisladas de una unidad de alto riesgo neonatal / Phenotypic characterization of coagulase-negative Staphylococcus strains isolated from a high risk neonatal unit

Las infecciones nosocomiales constituyen un problema de salud pública, debido a las altas tasas de morbimortalidad que ocasiona y por los altos costos económicos que generan. Las unidades de cuidados intensivos son una de las principales áreas donde se registra una alta incidencia de infección nosocomial, siendo la sepsis la principal infección en la cual se involucran una gran variedad de microorganismos. El grupo de Staphylococcus coagulasa negativa (SCN), es uno de los agentes etiológicos más frecuentemente aislados. De ahí nuestro interés en realizar la caracterización de 32 cepas de SCN aisladas de neonatos con infección nosocomial en la Unidad de Alto Riesgo Neonatal (UARN) del Instituto Autónomo Hospital Universitario de Los Andes (IAHULA), Mérida, Venezuela; durante el período diciembre 1997-Abril 1999. Los resultados muestran que el aislamiento de SCN fue de 47,37 por ciento. El 78,1 por ciento de las cepas estudiadas se aislaron de neonatos con bacteremia. Las especies más frecuentes fueron S. epidermidis (46,9 por ciento) y S. warneri (34,4 por ciento). Todas las cepas evaluadas mostraron resistencia a la penicilina y en un 18,8 por ciento de ellas mediada por la producción de B-lactamasa. El 68,8 por ciento de las cepas fueron resistentes a oxacilina y el 78,1 por ciento a gentamicina. La mayoría de las cepas resistentes a oxacilina mostraron valores de CIM g/mL, y se detectó la presencia de la PBP2a. Ninguna de las cepas fueron hiperproductoras de B-lactamasa. Se observó una excelente actividad de la vancomicina y quinupristin-dalfopristin sobre todas las cepas SCN evaluadas. Debido al papel que tienen los SCN en la UARN del IAHULA, es necesario extremar las medidas de asepsia durante los procedimientos de diagnóstico y terapéuticos invasivos, con el propósito de evitar las infecciones causadas por este grupo de microorganismos.

Nosocomial infections constitute a public health problem due to a high level of morbidity and mortality, generating high health-care costs in hospitals. Intensive care units are the principal areas where a high incidence of nosocomial infections is reported. Bacterimia is the principal infection involving a large variety of microorganisms; coagulase-negative Staphylococcus (CNS) is one of the most frequently isolated pathogens. Therefore, the purpose of this study was to characterize the 32 strains of CNS isolated from neonates with nosocomial infections in the High Risk Neonatal Unit (HRNU) at the University of the Andes Hospital Autonomous Institute (UAHAI), Mérida, Venezuela, from December 1997 to April 1999. Results showed that the isolation of CNS was 47.37 percent; 78.1 percent of the species were isolated from neonates with bacteremia. S. epidermidis (46.9 percent), and S. warneri (34.4 percent) were the species most frequently found. All pathogens showed resistance to penicillin and 18.8 percent of them produced ß-lactamase; 68.8 percent were resistant to oxacillin and 78.1 percent to gentamicin. Most of the oxacillin-resistant strains showed MIC values above 0.5 mg/mL and the presence of PBP2a was detected. None of the strains were hyper-producers of ß-lactamase. Vancomicin and quinuprintin/dalfopristin showed excellent activity against these CNS. Due to the role of CNS as a pathogen in the HRNU of UAHAI, strong asepsis measures during diagnosis and therapeutic invasive procedures must be taken to prevent infections caused by this group of microorganisms.