Isolation, cultivation and immunofluorescence characterization of lamellar keratinocytes from equine hoof by using explants / Isolamento, cultivo e caracterização por imunofluorescência de queratinócitos lamelares de casco equino utilizando explantes

The importance of the hoof to the horse health is clear, and the current knowledge regarding the cellular aspects of hoof keratinocytes is poor. Studies on equine keratinocyte culture are scarce. Developing keratinocyte cultures in vitro is a condition for studies on molecular biology, cell growth and differentiation. Some methods have already been established, such as those for skin keratinocyte culture. However, few methodologies are found for lamellar keratinocytes. The objective of this study was to standardize the equine hoof keratinocyte isolation and cultivation, and then characterize the cell immunophenotype. For this, the primary culture method used was through explants obtained from three regions of the equine hoof (medial dorsal, dorsal, and lateral dorsal). After the cell isolation and cultivation, the cell culture and its explants were stained with anti-pan cytokeratin (pan-CK) (AE1/AE3), vimentin (V9), p63 (4A4), and Ki-67 (MIB-1) antibodies. Cells were grown to third passage, were positive for pan-CK, p63 and Ki-67, and few cells had vimentin positive expression. As for the explants, the epidermal laminae were not stained for vimentin or Ki-67. However, some cells presented positive pan-CK and p63 expression. This study demonstrated the viability of lamellar explants of equine hooves as a form of isolating keratinocytes in primary cultures, as well as characterized the proliferation ability of such keratinocytes in monolayers.(AU)

É notória a importância do casco na saúde dos equinos, mas o conhecimento em nível celular é pouco entendido. Estudos envolvendo o cultivo de queratinócitos equinos são escassos. Sabe-se que o desenvolvimento de cultivos de queratinócitos in vitro é uma condição para estudos sobre a biologia molecular, crescimento e diferenciação celular. Alguns métodos já estão estabelecidos, como para cultivo de queratinócitos de pele, mas poucas metodologias são encontradas para queratinócitos lamelares. O objetivo desse estudo foi padronizar o cultivo de queratinócitos provenientes de casco equino visando futuramente associar ao estudo da medicina regenerativa para assim estabelecer um modelo experimental in vitro e indicar o uso criterioso de terapias regenerativas para a laminite equina. Desta forma, o cultivo em monocamada e a caracterização de queratinócitos lamelares foram realizados. Para isso, o método de cultura primária utilizado foi através de explantes obtidos de três regiões do casco (dorso-medial, dorsal e dorso-lateral). As células foram caracterizadas para os marcadores anti pan-cytokeratin (AE1/AE3), vimentin (V9), p63 (4A4) e Ki-67 (MIB-1) nos cultivos e nos explantes. As células foram cultivadas até terceira passagem, tendo marcação positiva para pan-CK, p63 e Ki-67 e fraca marcação para vimentina. Já as lâminas epidermais não tiveram marcação de vimentin e Ki-67, porém marcaram acentuadamente para pan-CK e p63. Este estudo demonstrou a exiquibilidade do uso de explantes lamelares do casco de equinos, como forma de isolamento de queratinócitos em cultivos primários, bem como caracterizou a habilidade de proliferação desses queratinócitos em monocamada.(AU)

Superação de dormência em sementes de manjericão (Ocimum basilicum L. ) / Overcoming dormancy in seeds of basil (Ocimum basilicum L. )

O objetivo do trabalho foi avaliar a eficiência de tratamentos pré-germinativos na superação da dormência de sementes de manjericão, produzidas no Horto de Plantas Medicinais da Unimontes, em fevereiro de 2011. Foram realizadas as seguintes determinações para avaliação da qualidade fisiológica das sementes: teor de água, germinação, primeira contagem de germinação, emergência de plântulas e índice de velocidade de emergência. O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado com quatro repetições de 50 sementes por tratamento, sendo T1- testemunha; T2 - pré esfriamento das sementes em câmara tipo BOD sob temperatura de 10ºC por 4 dias; T3 - embebição das sementes em água destilada por 24 horas; T4 - embebição das sementes em solução contendo KNO3 a 0,2 % por 5 minutos e T5 - sementes submetidas em água destilada a temperatura de 70ºC por 5 minutos. Os dados foram submetidos à análise de variância e as médias comparadas pelo teste Scott - Knott a 5% de probabilidade. O tratamento pré esfriamento em câmara tipo BOD a 10ºC por 4 dias reduz a dormência e promove incrementos na qualidade fisiológica das sementes do manjericão.

Aiming in order to assess the effectiveness of treatments to overcome dormancy in seeds of basil, an experiment was conducted at the Laboratory of Seed Analysis of Unimontes. Following determinations were performed to evaluate the physiological quality of seeds, water content, germination, first count germination, seedling emergence and emergence speed index. The experimental design was completely randomized design with four replications of 50 seeds per treatment, which consisted of: T1 - control, T2 - pre-cooling of the seed chamber BOD at a temperature of 10ºC for 4 days, T3 - soaking the seeds in water distilled for 24 hours, T4 - soaking the seeds in a solution containing 0,2% for 5 minutes and T5 - submitted seeds in distilled water at 70ºC for 5 minutes. Data were subjected to analysis of variance and the averages compared by Scott-Knott 5% probability. The pre-cooling treatment in BOD chamber at 10ºC for 4 days reduced dormancy and promotes increases in the physiological quality of seeds of basil.