ABSTRACT
Leptospirosis caused by Leptospira interrogans is the most widespread zoonosis and a major public health problem worldwide. Based on light-scattering and absorption, quantification of leptospires using UV-VIS spectroscopy was used as an indirect counting technique by measuring the optical density and comparing this to automated direct counting using a counting chamber in combination with imaging and analyzing software. Two serovars, Bangkok and Copenhagenii, from log-phase growth were used for the establishment of standard curves. They were found to be linear and slightly different in gradient for each serovar. The ease, rapidity, and reliability of these two adapted and optimized counting techniques may provide a useful alternative enumeration technique for leptospirosis research.
Subject(s)
Humans , Leptospira interrogans/isolation & purification , Leptospirosis/diagnosis , Colony Count, Microbial/instrumentation , Colony Count, Microbial/methods , Reproducibility of Results , Spectrophotometry, Ultraviolet , Time FactorsABSTRACT
Esse trabalho apresenta o projeto e os testes de um protótipo de um instrumento simples, compacto e de baixo custo, para a contagem de Unidades Formadoras de Colônias (UFCs) em placas de petri. O protótipo é composto por um sistema de iluminação, uma câmera CCD, uma placa de aquisição de vídeo e um microcomputador IBM/PC ou compatível. O sistema de iluminação com LEDs é inovador e possibilita a aquisição de imagens das placas de petri com excelente contraste entre as colônias e o background. Essa característica possibilitou o desenvolvimento de um algoritmo de processamento digital de imagens simples, rápido e eficaz. O programa adquire e calcula a média de vinte imagens de uma placa de petri e utiliza o método background subtraction para separar as colônias de bactérias do restante da imagem e atenuar pequenas diferenças de iluminação. A imagem é então limiarizada e as UFCs contadas com um algoritmo recursivo capaz de localizar e determinar a dimensão, em pixels, de cada uma das colônias. Os resultados dos vários testes realizados durante o desenvolvimento demonstraram que o instrumento é capaz de contar as UFCs com área superior a 0,8mm2, sendo que o coeficiente de correlação entre os resultados obtidos com o método de contagem convencional e a contagem feita pelo protótipo é superior a 0,99