ABSTRACT
The cDNA for pre-pro-Concanavalin A (pre-pro-ConA) was cloned into the cytoplasmic expression vector pKK233-2 to give rise to pCONEXP2 which was used to express the lectin precursor. Pre-pro-ConA is stable and is not transposed and ligated to form the mature protein. No signal peptide removal is observed. The solubility of pre-pro-ConA could not be increased by guanidine hydrochloride denaturation/dilution treatment.
Subject(s)
Blotting, Western , Cloning, Molecular , Concanavalin A/chemistry , Fabaceae/chemistry , Plant Lectins , Protein Precursors/chemistry , Recombinant Proteins/chemistry , SolubilityABSTRACT
La concanavalina A es una lectina con múltiples aplicaciones en Medicina, Biología, Hematología, Inmunología y en Bioquímica. Esta lectina representa una valiosa herramienta para el estudio, aislammiento y purificación de diversas proteínas. La concanavalina A se purificó por un método de absorción específica en sephadex G-50, a partir de Canavalia ensiformis cosechada en Cuba. El rendimiento obtenido fue de 1,56 porciento. El producto mostró una actividad hemoaglutinadora de eritrocitos humanos menor que 3,91 µg, y una actividad turbidimétrica de 1,75 mg. Se realizaron estudios de enfoque isoeléctrico y electroforético al producto purificado, y por ambos métodos resultó ser idéntico al de la firma FLOW. La connavallina A se acopló a sefarosa 4B activada con bromuro de cianógeno, y la matriz de afinidad obtenida se utilizó en la purificación de una hormona glicoproteíca marcada radiactivamente con yodo-125 con resultados satisfactorios