La microbiología en la transfusión sanguínea / Microbiology in blood transfusion

La familia de los Retrovirus se encuentra en el hombre y en los animales y son una causa considerable de mortalidad. Aunque se sabe que existen hace casi 100 años, su rol como agentes patógenos humano se recononoció hace aproximadamente 15 años. Su Genoma está compuesto por ARN. Los cuadro Retrovirus humanos: HIV-1, HIV-2, HTLV-1 y HTLV-II comparten cararterísticas comunes aunque se trata de entidades diferentes. Los ensayos que se utilizan para cada uno de estos virus son similares tanto en los principios como en las técnicas. En este primer apartado (I) del ensayo "Los Retrovirus" de detallará: etipatología, configuración antigénetica, respuesta inmune específica del huésped, clasificación de los métodos de diagnósticos sérico de HIV-1 y HIV-2 luego se completará el dictum mediante una lista parcial de los equipos comerciales de diagnóstico en el Anexo 1

Ensamble subcelular de la ribonucleoproteína Ro de 60 kDa a los hYRNAs / Subcellular assemble of the ribonucleoproteínas Ro 60 kDa a the hYRNAs

Ro es un complejo molecular de tres ribonucleoproteínas de 60, 54 y 52 kDa de las que la isoforma de 60 kDa está asociada a uno o varios hYRNAs; se sabe que su ensamble ocurre en el núcleo y en forma de complejo Ro/hYRNA es rápidamente exportado al citoplasma. Este trabajo fue diseñado para determinar si la unión de hYRNA es indispensable para la permanencia nuclear de la proteína Ro de 60 kDa. La interacción entre Ro y hYRNA fue estudiada por inmunofluorescencia y Western blot usando células HEp-2 y anticuerpos anti-Ro. La ribonucleoproteína Ro se localizó en los compartimientos núcleo-citoplásmicos con un patrón granular fino. Para definir si la presencia de hYRNA era esencial en la localización nuclear de Ro se realizaron experimentos adicionales de fluorescencia en células digeridas con RNAasa o tripsina con los siguientes hallazgos. La proteína Ro puede detectarse en el núcleo en ausencia de los hYRNAs, en tanto que su presencia citoplásmica necesariamente está ligada a los hYRNA, ya que la digestión con RNAasa abolió su expresión en citoplasma. El patrón de fluorescencia citoplásmico fue restaurado al reconstituír las células con extractos celulares ricos en hYRNAs. La digestión con tripsina eliminó por completo los gránulos núcleo-citoplásmicos de Ro. Se puede concluir que existen dos pooles nucleares de ribonucleoproteína Ro de 60 kDa, libre y en complejo, en tanto que en el citoplasma solamente existe formando complejos con los hYRNAs

Lupus eritematoso generalizado (LEG) adulto e infantil. Evaluación mediante el índice de actividad de la enfermedad (SLEDAI) al establecer el diagnóstico y después del tratamiento / Systemic Lupus Erithematosus (SLE) in adults and infants. Evaluation the disease activity index (SLEDAI) in diagnosis and after treatment

El lupus eritematoso generalizado (LEG) se caracteriza por reactivaciones y remisiones. El índice de actividad de la enfermedad SLEDAI es un modelo válido de evaluación global de actividad de la enfermedad. Estudiamos 51 pacientes que reunieron 4 o más criterios para el diagnóstico de LEG (ACR 1982) en el Sevicio de Reumatología del Hospital Regional Mérida, Yucatán ISSSTE, de los cuales 38 iniciaron en la edad adulta (>16 años; F35 : M3) y 13 femeninos con inicio infantil (< 16 años). Se cuantificó el grado de actividad de la enfermedad en cada paciente, utilizando el cuestionario de la SLEDAI y se comparó el x ñ DE de la puntuación obtenida al establecer el diagnóstico de la enfermedad en nuestro servicio en ambos grupos, con la calificación obtenida en la evaluación final de ambos grupos respectivamente, mediante la prueba stadística T de Student. Se revisó el tratamiento que recibieron los pacientes con LEG, adultos e infantiles durante su seguimiento: prednisona, cloroquinas, azatioprina, pulsos de ciclofosfamida y pulsos de metilprednisolona. Los pacientes adultos tuvieron edad de inicio de 34.23 ñ 13.53 años y evolución de 6.13 ñ 3.92 años y los infantiles edad inicio de 12.07 ñ 1.84 años y evolución de 4.61 ñ 1.55 años. El valor de la puntuación de SLEDAI en los adultos (x ñ DE) fue mayor al inicio (18.94 ñ 9.05) que en la calificación final después del tratamiento (6.02 ñ 5.73) con una p<0.05, al igual que los infantiles que presentaron mayor puntaje al inicio (16.61 ñ 7.45) que al final (5.61 ñ 5.82) con una p<0.05. La disminución de la calificación SLEDAI en ambos grupos posteriormente al tratamiento nos indica una adecuada respuesta al tratamiento. Al mismo tiempo observamos que el cuestionario SLEDAI es reproducible en un Servicio de Reumatología de un hospital de tercer nivel de la provincia del país

Chronic chagasic cardiopathy with parasitemic state (preliminary report)

Seven patients with diagnosis of dilated myocardiopathy, who fulfilled epidemiological, clinical, and serological criteria for chronic American Trypanosomosis, were submitted to hemoculture. Parasites were isolated in two patients (29 percent) confirming diagnosis and indicating and infection. Antibody titers did not show any relationship with the presence or absence of parasitemia nor were clinical differences noticed. Isolated Trypanosoma cruzi parasites belonged to biodeme III

Diagnóstico serológico de la enfermedad de Chagas: autosuficiencia y concordancia interlaboratorios / Serologic diagnosis of Chagas disease: Self sufficiency and interlaboratory concordance

El dato fundamental en el diagnóstico de la tripanosomiasis americana (enfermedad de Chagas), en su fase crónica, es el estudio serológico, ya que es difícil la demostración del parásito en circulación o en los tejidos. Una seria limitación en el diagnóstico serológico se relaciona con la estandarización de las diferentes técnicas accesibles, y esto depende considerablemente de la calidad de los antígenos usados para el inmunodiagnóstico. En México no se ha abordado este problema. Los laboratorios del Instituto Nacional de Cardiología y del Instituto Nacional de Diagnóstico y Referencia Epidemiológicos, compararon sus técnicas de inmunodiagnóstico: inmunofluorescencia indirecta, hemaglutinación y ensayo inmunoenzimático en fase sólida (ELISA), con cepas de T. cruzi aisladas en México. La concordancia interlaboratorios fue de 0.8 (Indice Kappa) y la sensibilidad, especificidad y valor predictivo positivo y negativo de las pruebas, aseguran resultados confiables en el inmunodiagnóstico de la enfermedad de Chagas

American trypanosomiasis (Chagas'disease) is becoming a relatively common condition in North America. Diagnosis at the chronic stage depends on demonstration of specific antibodies in body fluids, since parasitologic or pathologic diagnosis is uncertain at this stage. Therefore, standardization of immunodiagnostic techniques is mandatory, and it depends on antigen quality. Locally prepared antigens and crude extracts obtained from Mexican isolates, -both from infected vector and human cases- were compared using three different immunodiagnostic assays -indirect immunofluorescence, hemagglutination and enzyme linked immunosorbant assay (ELISA)- at two different laboratories from the Instituto Nacional de Cardiología and the Instituto Nacional de Diagnóstico y Referencia Epidemiológicos. Concordance between laboratories reached a significant Kappa value (0.8) and sensitivity, specificity and predictive values of individual diagnostic assays were adequate to use these tests in clinical diagnoses. This is the first attempt to standardize immunodiagnostic techniques in Mexico.

Evaluación de la sensibilidad y especificidad de tres reactivos de inmunofluorescencia directa para el diagnóstico de Chlamydia trachomatis / Evaluation of sensitivity and specificity of three reagents of direct immunofluorescence for the diagnosis of chlamydia trachomatis

Se evaluó la sebsibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y negativo y porcentaje de falsas positivas y negativas de tres reactivos de inmunofluorescencia directa para el diagnóstico de infecciones por Chlamydia trachomatis. Se estudiaron 150 muestras de raspados cervicovaginales y 50 muestras de líquido peritoneal de pacientes con enfermedad pélvica inflamatoria. Los reactivos en contra de la proteína principal de membrana externa presentaron mayor sensibilidad pero menor especifidad que el reactivo de inmunofluorescencia contra el lipopolisacárido de Chlamydia trachomatis

Enfermedad celíaca: valor de los parámetros inmunoquímicos / Celiac disease: value of immunochemistry parameter

En celíacos durante las distintas fases evolutivas (fase aguda, remisión, desafío) y en controles no celíacos estudiamos en forma prospectiva la eficacia clínica de la detección sérica de anticuerpos antigliodina -IgA e IgG- anticuerpos- antirreticulina, endomisio y músculo liso- y test de d-xilosa. Se investigaron 44 pacientes de 1 a 22 años, promedio 8 años, agrupados según el diagnóstico en: celíacos: fase aguda 14 (31.8 por ciento); remisión 9 (20,5 por ciento); desafío 8 (18,2 por ciento). No celíacos 13 (29,5 por ciento). Se efectuó biopsia de intestino delgado en forma simultánea con las determinaciones inmunoquímicas. Durante la fase aguda la IgA antigliadina posee 100 por ciento de sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo, valor predictivo negativo y eficacia. Estos índices disminuyen significativamente en el período de remisión, y en el desafío recuperan el 100 por ciento de positividad. La determinación de IgG antigliadina arroja porcentajes menores en la evaluación estadística. Destacamos la diferencia significativa entre los promedios de anticuerpos antigliadina -IgA e IgG- en las diferentes etapas de la enfermedad. Los anticuerpos antiendomisio poseen especificidad importante (85 por ciento). El test de la d-xilosa es el método menos específico. En conclusión, señalamos que la determinación de IgA-antigliadina es el método complementario más eficaz y específico para el diagnóstico y seguimiento de niños celíacos. Los anticuerpos antiendomisio tienen una asociación significativa, en especial para detectar verdaderos negativos y orientar en el diagnóstico

Granuloma facial: Hallazgos de inmunofluorescencia directa en cuatro casos / Facial Granuloma

El granuloma facial es una entidad clínica e histológica bien definida, cuya etiología permanece desconocida. Los hallazgos por inmunofluorescencia directa de depósitos de inmunoglobulinas y complemento en las lesiones, inician un nuevo camino de investigación que aún no ha sido bien aclarado, ya que se alternan estudios positivos con otros megativos. Estudiamos 4 pacientes, 3 hombres y una mujer, con un rango de edad de 33 a 55 años; el tiempo de evolución de la enfermedad osciló entre 1 y 14 años. Todos los pacientes tenían compromiso facial. Uno presentó lesiones múltiples y otro se acompañaba de lesiones extrafaciales. La inmunofluorescencia directa fue positiva en dos casos, hallando depósitos granulares de IgA en zona de membrana basal. La IgG, IgM, IgE y complemento fueron negativos en los 4 casos. Las distintas características de las inmunoglobulinas más un factor ambiental (rayos ultravioletas) u otro, llevaría a la IgA de la circulación a los tejidos. Posteriormente lo haría la IgG en la respuesta secundaria

Relación entre anticuerpos circulantes y cantidad de Candida albicans en materia fecal / Relation betwen circulatory antibodies and quality of candida albicans in faecal materia

Se estudió la presencia de anticuerpos contra Candida albicans, en 42 pacientes a los cuales se solicitaba cultivo micológico y recuento de levaduras en materia fecal. Por métodos estandarizados se procesaron las muestras, se cuantificó la presencia de levadura por gramo de materia fecal y se identificó a Candida albicans. Se obtuvo suero de los pacientes en el momento de llevar las muestras de heces al laboratorio. La presencia de anticuerpos se determinó por tres técnicas serológicas: aglutinación en tubo, inmunodifusión en gel de agar e inmunofluorescencia indirecta frente a levaduras y a tubos germinativos. La correlación de las tres pruebas con los resultados de los cultivos y recuento de colonias fue determinada sólo después que todos los datos fueron acumulados. Los resultados muestran que no existe correlación entre la cantidad de levaduras presentes y los anticuerpos circulantes. Ninguno de los pacientes presentaba infección diseminada o superficial evidente; se tuvo como referencia, la colonización del hongo en intestino

Técnica de inmunofluorescencia para HIV-1 en un Centro de Referencia de la provincia de Buenos Aires / Immunofluorencence technique for HIV-1 at a Reference Center of Buenos Aires province (Argentina)

Se comprobó que la técnica de inmunofluorescencia indirecta (IFI) con células H9, puede usarse como método confirmatorio para muestras repetidamente reactivas por pruebas de screening (enzimoinmunoensayo). Se evaluaron 99 sueros por IFI según la técnica del Centro Nacional de Referencia para Diagnóstico e Investigación del SIDA, que previamente habían sido seleccionados contra el virus de la inmunodeficiencia humana (HIV) y confirmados por la técnica de Western Blot (WB). Se incluyeron 4 sueros con screening discordante, 2 con valor de corte bajo respecto del cutoff y 1 con screening negativo. Los sueros eran de pacientes de alto riesgo: drogadictos endovenosos 60; homosexuales 5; bisexuales 5; promiscuos 1; heterosexuales en contacto con HIV positivos 7; niños hijos de HIV positivos 6; transfundidos 2 y no refieren datos 13. Por técnica de WB resultaron positivos 89 sueros (89.9%), indeterminados 7 (7.1%) y negativos 3 (3.0%). Por IFI resultaron positivos 79 sueros (79.8%),inespecíficos 2 (2.9%), indeterminados 4 (4.0%) y negativos 14 (14.1%). Un suero positivo por IFI resultó indeterminado por WB. Se hicieron controles positivos y negativos no presentando falsa reactividad. La coincidencia entre ambos métodos fue del 86%. El objetivo fue dar una medida del poder predictivo de IFI como predictor de WB. Se utilizó el criterio Lambda de Goodman-Kruskal, que mide cuánto disminuye el porcentaje de error cuando se usa IFI como predictor de WB, comparado con el predictor consistente en asignar a todos los casos el resultado positivo. Para los datos disponibles se obtiene Lambda = 0.69

Empleo de la inmunofluorescencia indirecta para el reconocimiento de anticuerpos contra el coccidioides immitis / Indirect in inmunofluorescence for the diagnostic of coccidioidomycosis

San Luis es considerada zona endémica de coccidioidomicosis. En trabajos anteriores, empleando pruebas cutáneas, hemos encontrado porcentajes de reactores positivos que van del 10%al 36%en distintos departamentos y poblaciones encuestadas. En este trabajo empleamos la inmunofluorescencia indirecta, utilizando como antígeno esférulas del hongo provenientes de ratones infectados en la almohadilla plantar. El material purulento obtenido se empleó en la preparación de improntas. Para la búsqueda de anticuerpos se usaron dos controles positivos enviados por la División of Mycotic Diseases-Center for Infectious diseases y un control negativo. No encontramos buena diferenciación entre los controles positivos y negativos; se observó en todos fluorescencia difusa en la pared de los endosporos y en el contenido de las esférulas. En las condiciones empleadas por nosotros no resulta útil esta técnica, tal vez pueda serlo si se realizana algunas modificaciones como la forma antigénica utilizada, la fijación de los preparados o en los filtros empleados para evitar la fluorescencia difusa o autofluorescencia que observamos

Detection of serum antitrichomonal antibodies in urogenital trichomoniasis by immunofluorescence.

Trichomonas vaginalis is a frequently encountered genital pathogen in both males and females. In females, vaginitis due to this parasite is one of the most common manifestation. The indirect fluorescent technique (IFA) test was carried out to detect antitrichomonal antibodies in 370 female patients using whole cell antigen. Seventy one (19.18%) gave positive reaction for either of the class IgG, IgM and IgA antibodies. The level of the IgG class antibodies was found to be higher i.e. 58 (81.69%) than IgM 11 (15.27%) antibodies, which may be suggestive of past infection or a prolonged manifestation by the organisms.

Reaçäo de imunofluorescência indireta no diagnóstico da neurocisticercose / Indirect immunofluorescence reaction in neurocysticercosis diagnosis

Considerando que nao ha sinais ou sintomas clinicos especificos de neurocisticercose, o seu diagnostico sera sempre apoiado em exames complementares, particularmente nas reacoes imunobiologicas para cisticerco. O proposito do presente estudo e o de avaliar a sensibilidade e especificidade da reacao de imunofluorescencia indireta para cisticerco, bem como comparar o comportamento desta reacao com a de fixacao de complemento quando em uso de rotina em laboratorio clinico. O estudo da especificidade, da sensibilidade e o comparativo foi realizado com base em 964 amostras de LCR. Este estudo permitiu as seguintes conclusoes: l. A sensibilidade da reacao de imunofluorescencia indireta para cisticerco no LCR foi de 88,0%, da Faculdade de Ciencias Farmaceuticas de Ribeirao Preto-USP. 2. A especificidade da reacao de imunofluorescencia indireta para cisticerco no LCR foi de 87,0%. 3. A realizacao simultanea da reacao de fixacao de complemento e da reacao de imunofluorescencia indireta faz o diagnostico imunologico da neurocisticercose mais seguro e em maior numero de casos, doque quando estas reacoes sao utilizadas isoladamente

Evaluation of a locally developed direct immunofluorescence test for chlamydial infections.

The high cost of diagnostic tests for chlamydial infections limits their use which may result in under estimation of the incidence of chlamydial infections. This study was an attempt to reduce the cost of the test by developing an immunofluorescence test for C. trachomatis using monoclonal antibody to major outer membrane protein of C. trachomatis. Urethral swabs were obtained from patients with symptoms of urethritis. The developed immunofluorescence test was compared with culture method and a commercial immunofluorescence test kit (BioMerieux). Compared with the culture method, the sensitivity, specificity, predictive value of positive and predictive value of negative of the developed test were 79, 85, 61 and 93 per cent respectively. The results obtained from the comparison with commercial test kit showed an agreement of 88 per cent. The developed test was positive in 32 per cent of specimens while the commercial test was positive in 24 per cent. The commercial test kit showed excellent reactions and it contained monoclonal antibody to lipopolysaccharide of Chlamydiae in addition to monoclonal antibody to major outer membrane protein which can lead to stronger immunofluorescence staining. The locally developed test, however, costs much less without compromising the results.

Rendimiento diagnostico de la inmunodeficiencia y el ensayo inmunoenzimatico en sueros de pacientes con leishmaniasis del norte y del nordeste de Brasil / Diagnostic performance índices for immunofluorescent tests and enzyme immunoassays of leishmaniasis sera from northern and northeastern Brazil

Se examino un total de 341 muestras de suero para detectar anticuerpos IgA, IgG e IgM anti-Leishmania mediante pruebas de inmunofluorescencia (IF) y ensayos inmunoenzimaticos (ELISA). En conjunto, 292 de los sueros pertenecian a pacientes con diagnosticos clinicos y parasitologicos de leishmaniasis cutanea (resultados positivos en la impronta de lesiones o en la prueba cutanea de Montenegro) y 49, a controles de la misma poblacion. Los índices de rendimiento diagnostico de los ELISA-IgG e IgM fueron de utilidad diagnostica y el valor predictivo positivo del ELISA-IgG fue de 94,6. . La especificidad de la prueba de IF-IgA fue notablemente alta (100. ), pero su sensibilidad fue muy baja

Practicable IFAT slide antigen preparations for detection of Gnathostoma spinigerum antibodies in rabbits.

This study was designed to determine which stage of Gnathostoma spinigerum and which method of the preparation of test antigens are the most suitable for the detection of antibodies in serum of rabbits infected with advanced third stage larvae (AL3) of G. spinigerum by the indirect fluorescent antibody test (IFAT). Antigens from parasite ova and first stage larvae (L1) were obtained from freshly preserved specimens and affixed to glass slides with egg albumin. AL3 antigens consisted of paraffin sections, cryostat sections and pellets of crude worm soluble extract. Slides of adult male and female worms were prepared in cryostat sections. Pellets of crude worm soluble extract (AL3) smeared onto slides gave the best positive reaction followed by AL3 cryostat sections and L1.

A comparison of passive haemagglutination test and immunofluorescent test for antibody to native deoxyribonucleic acid.

Antibody to double-stranded DNA is a specific marker for systemic lupus erythematosus. The recommended method for detection of this antibody is immunofluorescence. Haemagglutination was developed and the results of antibody detection were evaluated with those obtained by immunofluorescence. Human group O erythrocytes were treated with glutaraldehyde and coated with DNA from calf thymus. Testing in 169 active and inactive SLE sera, 59 sera were positive and 91 sera were negative by both methods. Five sera were negative by haemagglutination but positive by immunofluorescence. Fourteen sera with low haemagglutination titer were negative by immunofluorescence. The correlation between the results obtained by both methods were highly significance with contingency coefficient of 0.61 and correlation coefficient between the results of 78 sera positive by both or either method was 0.74 (p less than 0.001). Sixty-three sera from blood donors and seventy sera from pregnant women were negative by the two techniques. PHA is simpler, quicker and can be assayed in laboratories without the use of fluorescent microscope. It can be established as a very useful alternative test to immunofluorescence.