ß-l; -lactamasas AmpC en bacilos gramnegativos de aislados clínicos en un centro hospitalario de tercer nivel en Colombia / AmpCß-l;-lactamases in Gram-negative bacilli from clinical isolates in a Colombian tertiary hospital

Introdución: Las ß-lactamasas AmpC son enzimas con capacidad hidrolítica, pueden ser de tipo constitutivo o inducible. No existe un método estandarizado para su determinación fenotípica por normas internacionales; la detección de estas mediante el uso de la biología molecular podría ser una alternativa útil para vigilancia y control de la diseminación de clones circulantes en el entorno hospitalario. Objetivo: Determinar el fenotipo de resistencia y genes expresados en la producción de ß-lactamasas AmpC en bacilos gramnegativos de aislados clínicos en un centro hospitalario. Métodos: Estudio observacional, descriptivo y de corte transversal. Se seleccionaron 78 cepas bacterianas como portadoras de ß- lactamasas AmpC. Se les realizó prueba de aproximación de disco; a las cepas con resultado positivo se seleccionaron para extracción de ADN y PCR multiplex para detección de 6 familias genes AmpC. Se determinó la frecuencia por tipo de muestra, servicio y comparación con el perfil de susceptibilidad. Resultados: De las cepas seleccionadas con fenotipo AmpC, el 57,6 por ciento (45/78) se consideró caso confirmado ß-lactamasas AmpC por su positividad para la prueba confirmatoria. La técnica molecular utilizada confirmó en el 40 por ciento (18/45) la presencia de genes AmpC. Se obtuvo con mayor frecuencia el gen MIR n= 9 (20 por ciento), seguido de DHA n= 7 (15 por ciento). Conclusiones: La detección oportuna de genes que codifican para ß-lactamasas AmpC permite establecer estrategias para evitar la circulación mediada por plásmidos en hospitales, así como utilizar mejores opciones terapéuticas que no induzcan a otros mecanismos de resistencia(AU)

Introduction: AmpC ß--lactamases are enzymes with hydrolytic activity. They may be either constitutive or inducible. No standardized method is available for their phenotypical determination by international standards. Their detection by molecular biology could be a useful alternative for the surveillance and control of the spread of clones circulating in hospital environments. Objective: Determine the resistance phenotype and genes expressed in the production of AmpC ß-lactamases in Gram-negative bacilli from clinical isolates in a hospital. Methods: An observational descriptive cross-sectional study was conducted. A total 78 bacterial strains were selected as carriers of AmpC ß-lactamases. Disc approximation tests were performed. The strains testing positive were selected for DNA extraction and multiplex PCR for detection of six AmpC gene families. Determination was made of the frequency per sample type, service and comparison with the susceptibility profile. Results: Of the strains selected with AmpC phenotype, 57.6 percent (45/78) were considered to be AmpC β-lactamase confirmed cases, due to their positive confirmatory test. The molecular technique used confirmed the presence of AmpC genes in 40 percent (18/45) of the cases. The gene most commonly obtained was MIR n= 9 (20 percent), followed by DHA n= 7 (15 percent). Conclusions: Timely detection of genes encoding for AmpC ß-lactamases makes it possible to set up strategies to prevent plasmid-mediated circulation in hospitals, as well as apply better therapeutic options that do not induce other resistance mechanisms(AU)

A gene-trap strategy identifies quiescence-induced genes in synchronized myoblasts.

Cellular quiescence is characterized not only by reduced mitotic and metabolic activity but also by altered gene expression. Growing evidence suggests that quiescence is not merely a basal state but is regulated by active mechanisms. To understand the molecular programme that governs reversible cell cycle exit, we focused on quiescence-related gene expression in a culture model of myogenic cell arrest and activation. Here we report the identification of quiescence-induced genes using a gene-trap strategy. Using a retroviral vector, we generated a library of gene traps in C2C12 myoblasts that were screened for arrest-induced insertions by live cell sorting (FACS-gal). Several independent gene- trap lines revealed arrest-dependent induction of betagal activity, confirming the efficacy of the FACS screen.The locus of integration was identified in 15 lines. In three lines,insertion occurred in genes previously implicated in the control of quiescence, i.e. EMSY - a BRCA2--interacting protein, p8/com1 - a p300HAT -- binding protein and MLL5 - a SET domain protein. Our results demonstrate that expression of chromatin modulatory genes is induced in G0, providing support to the notion that this reversibly arrested state is actively regulated.

One gene, many phenotypes.

"Phenotype" is the visible or quantifiable effect of the expression of a gene, whereas the specific genetic constitution responsible for a phenotype is called "genotype". It was hoped that phenotype could be accurately predicted if the genotype could be characterized. But, the relationship between the genotype and phenotype is not straightforward. Similar genetic lesions can have entirely different phenotypes. In recent years, there has been tremendous progress in the understanding of the genetic basis of diseases. The extent to which it will be possible to relate findings at the DNA level to the clinical phenotype is difficult to delineate on many occasions. The elucidation of mechanisms underlying genotype-phenotype discrepancies is important as it will influence the use of DNA-based tests in the diagnosis, therapy and counseling of individuals affected with genetic disorders. This issue is pertinent to almost every aspect of medical practice and research in this post-genome era. In this article, we have tried to summarize those factors which are responsible for varied manifestations of lesion(s) in a single gene.

Vírus da leprose dos citros: sequenciamento completo do genoma, diversidade genética e avaliação de genes potencialmente relacionados com patogenicidade / Citrus leprosis virus: genome sequencing, genetic diversity and evaluation of pathogenicity related genes

A partir das primeiras sequências genômicas do Cil V-C (Citrus leprosis virus ­tipo citoplasmático) através de bibliotecas de cDNA provenientes do produto da replicação viral (dsRNA) (locali, 2002), foi possível concluir o seqüenciamento completo do seu genoma. As informações obtidas possibilitaram caracterizá-lo como um vírus de genoma constituído por ssRNA (mais), bipartido (menos 14 Kb), contendo no RNA 1 duas ORFs, uma delas codificadora de uma poliproteína com três domínios envolvidos com replicase viral e um relacionado com protease. No RNA 2, foram detectadas quatro ORFs, uma delas codificadora da proteína de movimento. Foram identificadas caudas poli A nas extremidades 3 dos dois RNAs, bem como a presença de uma sequência conservada de nucleotídeos (GAUAAAUCU) nas extremidades 5 dos dois RNAs, sugerindo a presença de uma estrutura Cap. As informações até então conhecidas sobre o vírus associado à leprose dos citros e aos ácaros do gênero Brevipalpus os relacionavam à família Rhabdoviridae. Entretanto, através de análises estruturais e organizacionais do genoma do CilV-C ficou evidente que o vírus apresenta alguns (poucos) domínios conservados com membros de vários gêneros e famílias de fitovírus, mas não com rhabdovírus. Através de análises filogenéticas e associando estas informações às características morfológicas do virion, além dos efeitos citopáticos e sintomas induzidos por esses vírus em seus hospedeiros, sugerimos que o CilV-C seja considerado o membro-tipo de um novo gênero de vírus, denominado Cilevirus. Foi possível também determinar com segurança que ele não pertence a família Rhabdoviridae, como proposto anteriormente. Essas informações permitiram uma análise comparativa entre regiões genômicas do CilV-C com as de outros vírus transmitidos por Brevipa/pus (VTBs), entre eles, Orchid fleck virus - OFV, Coffee ringspot virus - CoRSV, e Ligustrum ringspot virus - LigRSV.

El salto de la doble hélice. Consecuencias del Proyecto Genoma Humano en la medicina del siglo XXI (Segunda parte) / The leap of the double helix. Consequences of the Human Genome Project in medicine of the 21st century (Part II

El Proyecto Genoma Humano, iniciado en octubre de 1990, ha permitido desentrañar, 12 años después, la secuencia nucleotídica del ADN humano. Este hecho ha producido un avance singular en la medicina moderna, posibilitando a través de la detección de las variaciones nucleotídicas en la secuencia del ADN, el desarrollo de estudios genéticos, la determinación de pronósticos y guías terapéuticas con fármacos, y el desarrollo de nuevas drogas gracias al avance de la farmacogenómica. Todo esto permitiría, en un futuro cercano, la predicción de respuestas a maniobras terapéuticas en los procedimientos de anestesia, cuidados críticos y tratamiento del dolor. Este desarrollo introduce también problemas éticos, específicamente en los campos de la terapia génica y la clonación.

Síndromes genéticas e cardiopatia / Genetic disorders and cardiac anomalies

A genética como ciência ue trata dos mecanismos que controlam a constância e as mudanças que se operam nos seres vivos, nasceu com a descoberta dos princípios mendelianos, em 1865. Contudo, o reconhecimento desses preceitos só passou a ser valorizado depois de cerca de 35 anos. Desde então, essa área tem se desenvolvido de forma espantosa.Novos conhecimentos não param de surgir, como o reconhecimento de novos modelos de herança que não os tradicionais (como por exemplo:dissomia uniparental e herança mitocondrial; polimorfismos, microdeleções e genes contíguos, região telométrica e seu papel no retardo mental; presença de diferentes fenótipos cujo substrato pode ser explicado pelo mesmo tipo de mutação e vice-versa; identificação de alguns genes importantes das doenças poligênicas), sem contar com o ápice de todo esse avanço biológico, representado pelos resultados do Projeto Genoma Humano.Muitos são os campos de interesse da genética humana; na prática da genética clínica, é de importância fundamental o reconhecimento ao menos de alguns distúrbios genéticos mais frequentes, para que seu diagnóstico, prevenção, tratamento e devido aconselhamento sejam procedidos de forma adequada e as implicações desse manejo apropriado possam se fazer sentir na área da saúde pública.Por essa razão, o enfoque de algumas doenças genéticas mais comumente observadas na prática clínica e que possam, porventura, assolar os cardiologistas, justamente pela frequencia elevada com que determinados defeitos cardíacos em seus portadores estejam presentes, foi motivo deste trabalho, com o intuito de que seu reconhecimento seja o mais precoce possível

Biología molecular y medicina a fines del siglo XX / Molecular biology and Medicine at the end of the XXIth century

Este trabajo revisa conceptos básicos de la biología molecular moderna con la premisa de que su influencia en la medicina de nuestros días es tan grande que ya no puede ser un saber limitado a unos pocos expertos. Se analiza la estructura y organización de los genes humanos, su naturaleza partida en exones e intrones y el flujo de información genética desde el DNA a la proteína. Se describe el papel del control de la transcripción en la regulación de la expresión genética y la diferenciación celular, presentando ejemplos de experimentos que definen la importancia de los genes "maestros". Se describen los conceptos básicos de la ingeniería genética, la generación de animales transgénicos y knock out y la aplicaciones de la biología molecular al diagnóstico médico y a la determinación de identidad y lazos biológicos. Finalmente se discuten las posibilidades de la terapia génica y las realidades y fantasías de eventuales transgénesis o clonado por transplante nuclear en humanos.

Transcripción génica en eucariotes: de los factores transcripcionales a la enfermedad / Gene transcription in eukaryotes: from transcriptional factors to disease

La información genética de los organismos está almacenada en los genes como consecuencias de DNA. La expresión de estos genes se regula en varios niveles, siendo uno de los más importantes la transferencia de esta información a moléculas de RNA mensajeros. A este proceso se le llama transcripción y es catalizado por una maquinaria molecular constituida por un centenar de proteínas que se ensamblan ordenadamente. Estas proteínas o factores transcripcionales se dividen en 4 grupos según su modo de acción; a saber: generales, activadores, coactivadores y represores. Existen enfermedades en las que se ven implicados algunos de estos factores transcripcionales, habiéndose ya identificado la mutación o la falla molecular en el factor transcripcional involucrado, entre las cuales se pueden mencionar la aniridia, el síndrome de Rubinstein-Taybi y enfermedad de Hodgkin. El conocimiento a nivel molecular del proceso de transcripción ayudará a comprender mejor la relación que tiene éste con el desarrollo y la salud de los individuos, así como a encontrar nuevos tratamientos para las enfermedades

El surgimiento de la biología molecular / Appearance of molecular biology

La biología molecular constituye hoy en día la punta de lanza dentro de las perspectivas diagnósticas y terapéuticas para el próximo milenio. Ni el médico clínico ni el investigador biomédico pueden permanecer ajenos a dichos acontecimientos, es por ello que hemos considerado importante revisar los aspectos sobresalientes y prácticos de esta rama de la ciencia, a través de una serie de artículos que hagan más familiar su comprensión, fundamentalmente para aquellos quienes no tienen acceso a la información especializada

Introduçäo e avaliaçäo dos efeitos de um gene determinante de prolificidade em ovinos Romney Marsh / Introduction and evaluation of the effects of a prolificacy gene in Romney Marsh sheep breed

Um gene de efeito principal, denominado F, responsável por altas taxas de ovulaçäo numa linhagem da raça Merino Australiano, foi introduzido através de acasalamento de três carneiros 1/2 Romney x 1/2 Merino com ovelhas Romney, como uma alternativa para aumentar a fertilidade da raça Romney criadano Rio Grande do Sul. O objetivo deste estudo foi o de fixar o gene F e avaliar o desempenho reprodutivo da populaçäo onde este passou a segregar. Como esperado, a presença do gene F, em heterozigose, elevou significativamente (P<0,001) a taxa de cordeiros nascidos. A disponibilidade local de animais portadoras deste gene é importante para estudos avançados em biologia reprodutiva, porém seu uso em rebanhos comerciais carece ainda de maiores estudos, principalmente relacionados aos objetivos de produçäo nos atuais sistemas exploratórios