Estudo populacional de flebotomíneos (Diptera: Psychodidae) no Município de Belo Horizonte e no Parque Estadual do Sumidouro – Minas Gerais - Brasil

O município de Belo Horizonte e sua região metropolitana ilustram o mais sério exemplo de expansão da leishmaniose visceral no sudeste do Brasil. O município e o parque Estadual do Sumidouro localizam-se no bioma cerrado, segundo maior bioma terrestre da América do Sul. Os objetivos deste projeto foram:estudar a variação sazonal da fauna flebotomínica no DS Venda Nova (Belo Horizonte) e no PES; descrever os padrões de riqueza e diversidade fauna flebotomínica nas formações vegetais do PES e no DS Venda Nova; determinar a taxa de infecção natural de fêmeas capturadas; estudar a variação morfológica das populações de Lu. longipalpis coletadas nos diferentes ambientes; avaliar os impactos das ações de controle realizadas no DS Venda Nova nas taxas de ocorrência sazonal e densidade das populações de flebotomíneos. Foram realizadas coletadas mensais no período de agosto de 2011 a agosto de 2013. Os insetos foram identificados de acordo com Galati 2003. As fêmeas coletadas não ingurgitadas foram submetidas à extração de DNA e reações de PCR e de PCR-RFLP para a averiguação da infecção natural por espécies de Leishmania. Para comparação das localidades de estudo foi utilizada análise descritiva e índices ecológicos. Para a comparação morfológica trinta casais (quinze proveniente do DS Venda Nova e quinze do PES) da espécie Lu. longipalpis foram medidos, e foram comparados tantos as médias como as variâncias dos caracteres entre os grupos.

As ações de controle da LV no DS Venda Nova realizadas nos período de janeiro de 2011 a dezembro de 2013 foram analisadas descritivamente e relacionadas à curva sazonal de Lu. longipalpis. A riqueza, a diversidade e a equitabilidade da fauna de flebotomíneos foram marcadamente diferentes entre o DS Venda Nova e o PES. Na área urbana foram coletados 2.247 espécimes pertencentes a cinco gêneros e oito espécies, a curva de acumulação de espécies atingiu a saturação na 19º amostragem. No DS Venda Nova a curva de variação sazonal foi delineada principalmente por Lu. longipalpis e 95,3% dos espécimes pertenciam a esta espécie.

Lu. longipalpis apresentou taxas de infecção natural de 1,01% para Leishmaniainfantum e 1,77% para Leishmaniabraziliensis. No PES foram coletados 4.675 espécimes pertencentes a cinco gêneros e 25 espécies e a curva de acumulação atingiu a saturação na 16º amostragem. No PES não houve uma única espécie que apresentasse padrão tão pronunciado de dominância. Lu. longipalpis correspondeu a 5,35% dos espécimes. Diversas espécies com envolvimento (suspeito ou comprovado) nos ciclos de LTA foram registradas. Uma fêmea do complexo cortellezzi apresentou detecção positiva para Le. braziliensis. A comparação morfométrica e de composição de feromônios indicou grande similaridade entre as duas populações de Lu. longipalpis avaliadas. A análise realizada para correlação das ações de controle com a variação sazonal de Lu. longipalpis indicam a necessidade de estudos pormenorizados para inferências mais robustas. Os resultados evidenciam a dominância da espécie Lu. longipalpis no ambiente urbano, e indicam que as mudanças antrópicas no cerrado podem alterar a composição das populações de flebotomineos e os ciclos de transmissão de patógenos aos humanos.

Estudo da coinfecção Leishmania infantum e Ehrlichia canis em cães numa área endêmica para leishmaniose visceral canina / Study co infection Leishmania infantum and Ehrlichia canis in dogs in an endemic area for canine visceral leishmaniasis

A Erliquiose Monocítica Canina (EMC) e a Leishmaniose Visceral Canina (LVC) são duas doenças, transmitidas por vetores, com ampla distribuição mundial. Os agentes causadores dessas doenças são Ehrlichia canis e Leishmania infantum, respectivamente. Enquanto a EMC é transmitida por carrapatos, principalmente Rhipicephalus sanguineus, a Leishmania é inoculada no hospedeiro através do inseto-vetor da subfamilia Phlebotominae. A maioria dos sinais físicos são comuns às duas enfermidades, o que dificulta o diagnóstico clínico e o tratamento, especialmente em áreas endêmicas. Poucos são os estudos relacionados à coinfecção da erliquiose e leishmaniose caninas no Brasil. No Piauí, particularmente em Teresina, ainda não se tem dados concretos sobre a prevalência dessas afecções.Os sinais físicos variam com a severidade da infecção, a resposta imune do hospedeiro e a presença de coinfecção. Assim, buscamos avaliar cães, independente dos sinais físicos, atendidos no hospital universitário e clínicas particulares da cidade de Teresina, Piauí quanto a frequência de erliquiose e leishmaniose caninas no período de março de 2012 a setembro de 2014...

The Canine Monocytic Ehrlichiosis (CME) and Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) are the two vector-borne diseases with worldwide distribution. The causative agents of these diseases are Ehrlichia canis and Leishmania infantum, respectively. While CME is transmitted by ticks, especially Rhipicephalus sanguineus, Leishmania is inoculated into the host through the insect vector of the subfamily Phlebotominae. Most clinical signs are common to both conditions, which hinders the clinical diagnosis and treatment, especially in endemic areas. There are few studies related to the coinfection of canine ehrlichiosis and leishmaniasis in Brazil. In Piaui, particularly in Teresina, there is not yet concrete data on the prevalence of these diseases. The clinical signs vary according to the severity of the infection, to the host immune response and to the presence of coinfection. Thus, we sought to evaluate dogs, regardless of clinical signs, seen at university hospital and private clinics in the city of Teresina, Piauí, for the frequency of canine ehrlichiosis and leishmaniasis from March 2012 to September 2014...

Imunização de cães com produtos oriundos de Lutzomyia Longipalpis em duas diferentes abordagens: Canarypoxvirus sp. Expressando o gene que codifica para a proteína salivar LJM17 e/ou LJL143, e a proteína do intestino médio luloper1 como vacina bloqueadora de transmissão / dog immunization with products from Lutzomyia longipalpis in two different approaches: Canarypoxvirus sp. Expressing the gene that encodes the protein salivary LJM17 and / or LJL143 and the midgut protein luloper1 as a transmission blocking vaccine

As interações entre flebótomo, parasita e hospedeiro desempenham um papel importante na transmissão da leishmaniose. As moléculas provenientes do vetor são relevantes para estas interações e incluem as proteínas da saliva e do intestino médio. Nos flebótomos, as Leishmanias passam por um ciclo de desenvolvimento complexo dentro do intestino médio sob a proteção da matriz peritrófica, necessário para a geração de formas metacíclicas infectantes. As Leishmanias são transmitidas pelos flebótomos que co-injetam parasitas juntamente com a saliva, na derme do hospedeiro. Estudos anteriores demonstraram que a imunização de cães com duas proteínas salivares (LJM17 ou LJL143) de L. longipalpis, resultaram em uma imunidade mediada por células Th1 sistêmica e local afetando a sobrevivência do parasita in vitro. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a imunidade conferida pela imunização de cães com DNA e rCanarypoxvirus expressando o gene que codifica para as proteínas salivares de L. longipalpis (LJM17 e/ou LJL143)...

Sand fly, parasite, host interactions play an important role in the transmission of leishmaniasis. Vector molecules are relevant for such interactions and include midgut and salivary proteins. In vector sand fly species, Leishmania parasites undergo a complex developmental cycle within the midgut, protected by the peritrophic matrix that is necessary for generation of infectious metacyclics. Leishmania parasites are transmitted by sand flies that co-inject parasites and saliva, in the host’s skin. Previous studies showed immunization of dogs with two proteins (LJM17 or LJL143) from Lutzomyia longipalpis, resulted in a systemic and local Th1 cell-mediated immunity affecting parasite survival in vitro. In this work we evaluated the immunity conferredbyimmunization of dogs with DNA and recombinant Canarypoxvírusexpressing the gene encoding the salivary ofL.longipalpis (LJM17and/orLJL143). Immunization with both LJL143 and LJM17...

Diagnosis of Leishmania infantum infection by Polymerase Chain Reaction in wild mammals / Diagnóstico de infecção por Leishmania infantum pela reação em cadeia da polimerase em mamíferos silvestres

Visceral leishmaniasis is a chronic infectious disease caused by Leishmania infantum (synonym: Leishmania chagasi) and transmitted by the sandfly Lutzomyia longipalpis in Brazil. It is an endemic zoonosis in several regions of the country, including Belo Horizonte (State of Minas Gerais). In urban areas, the domestic dog is susceptible and considered the most important animal reservoir. However, L. infantum has been previously diagnosed in other species, including captive primates and canids. This study aimed to evaluate the presence of the agent DNA in captive animals as well as some free ranging animals from the Zoo-Botanical Foundation of Belo Horizonte by Polymerase Chain Reaction. Eighty one blood samples from primates, carnivores, ruminants, edentates, marsupial, and a monogastric herbivore were analyzed. Three primates Alouatta guariba (brown howler monkey), and two canids Speothos venaticus (bush dog) were positive, demonstrating the importance of leishmaniasis control in endemic areas for preservation of wildlife species in captivity.

A leishmaniose visceral é uma doença infecciosa crônica de mamíferos causada, no Brasil, pelo protozoário Leishmania infantum (sinonímia: Leishmania chagasi) e transmitida pelo flebótomo Lutzomyia longipalpis. Trata-se de uma zoonose endêmica em muitas regiões do Brasil, inclusive em Belo Horizonte, Minas Gerais. Em centros urbanos, leishmaniose visceral acomete principalmente o cão doméstico. Entretanto, L. infantum já foi diagnosticada em outras espécies, incluindo canídeos e primatas de cativeiro em zoológicos. Este estudo buscou avaliar a presença do DNA deste agente em animais de cativeiro e de vida livre da Fundação Zoobotânica de Belo Horizonte através da reação em cadeia da polimerase. Foram analisadas oitenta e uma amostras de sangue oriundas de primatas, carnívoros, ruminantes, edentatos, marsupial e herbívoro de estômago simples. Três primatas Alouatta guariba (bugio marrom) e dois canídeos Speothos venaticus (cachorro-do-mato-vinagre), foram positivos, demonstrando a importância do controle da leishmaniose em áreas endêmicas com a finalidade de conservar a fauna silvestre mantida em cativeiro.

Papel do fator de ativação de plaquetas na infecção de macrófagos por leishmania infantum e identificação de uma Paf-Acetilhidrolase no parasita / Role of platelet-activating factor in macrophage infection by Leishmania infantum and identification of the parasite PAF acetylhydrolase

A leishmaniose visceral é causada pelo parasita Leishmania infantum. A infecção ocorre quando flebótomos infectados se alimentam na derme do hospedeiro vertebrado, inoculando o parasita. A infecção produz uma resposta com diversas moléculas inflamatórias, como os mediadores lipídicos. O fator de ativação de plaquetas (PAF) é um potente mediador lipídico derivado de um lisofosfolipídio. PAF participa da fisiologia normal da célula e possui um perfil pró-inflamatório. A participação de mediadores lipídicos, como eicosanóides e PAF, já foi identificada na imunopatogênese das leishmanioses. PAF gerado pelo hospedeiro tem efeito leishmanicida e de controle da infecção por L. amazonensis. PAF-acetilhidrolases (PAF-AH) são fosfolipases A2 que hidrolisam PAF e foi demonstrado que PAF-AH podem ser um fator de virulência devido a essa habilidade. O objetivo desse estudo foi avaliar o papel do PAF e de uma PAF-AH na infecção de macrófagos por L. infantum. Foi observado que PAF 1μM, quando adicionado durante e após a infecção, foi capaz de diminuir 50% da infecção após 72 horas, bem como a viabilidade dos parasitas dentro dos macrófagos num mecanismos independente do seu receptor PAFR e da produção de óxido nítrico. PAF 10μM interrompeu o crescimento de promastigotas de L. infantum em cultura axênica. Uma PAFAH, com elevada identidade e semelhança com PLA2/PAF-AH de outros tripanossomatídeos, foi identificada no genoma de L. infantum. A clonagem e expressão recombinante produziu uma proteína de cerca de 69kDa, com atividade PAF-AH. Frações celulares do parasita, enriquecidas com estruturas de membrana também apresentaram atividade PAF-AH. Os resultados indicam que PAF é capaz de diminuir a infecção de macrófagos por L. infantum e que o parasita possui uma PAF-AH funcional possivelmente envolvida com sua virulência.

Visceral leishmaniasis is caused by Leishmania infantum parasites. Infection occurs when infected sandflies feed on vertebrate host skin delivering the parasite which survive, multiply and spread on the parasitophorous vacuoles of macrophages. The inflammatory response during the infection leads to the production of diverse bioactive molecules, as lipid mediators. The platelet activating factor (PAF) is a lipid mediator derived from a lysophospholipid. PAF has a role in normal cellular physiology, acting as proinflamatory molecule. The participation of some lipid mediators, as eicosanoids and PAF has been identified in leishmaniasis. PAF produced by the host is able to kill the parasite and control the infection by L. amazonensis. PAF-acetylhydrolases (PAF-AH) are phospholipases A2 (PLA2) that hydrolyse PAF, and possibly involved in pathogen virulence. The aim of this study was to evaluate the role of PAF on macrophages infection by L. infantum and identify a PAF-AH expressed by the parasite. PAF 1μM, added during and after the infection, was able to reduce approximately 50% of infection, as well as, the viability of parasites inside macrophages. Apparently this reduction occurs by an classical PAF receptor and nitric oxide production independent mechanism. PAF 10μM inhibited L. infantum promastigotes growing in axenic culture. A PAF-AH with high identity to PLA2/PAF-AH of others trypanosomatids was identified in L. infantum genome. The cloning and recombinant expression produced a 69kDa protein with PAF-AH activity. Cellular fractions from parasites, with membrane structures also presented PAF-AH activity. The results suggest that PAF is able to decrease machophage infection by L. infantum witch has a functional PAFAH possibly related to its virulence.

Análise proteômica comparativa de linhagens de Leishmania V. braziliensis e de Leishmania L. infantum sensíveis e resistentes aos antimoniais

A emergência de espécies de Leishmania resistentes ao antimonial é um grave problema em vários países. A quimioterapia é a medida mais importante para o controle das leishmanioses, visto que não existe ainda uma vacina eficiente para uso em humanos. Além disso, o controle vetorial é difícil em razão das características ambientais muito diversas e da existência de um grande número de reservatórios domésticos e silvestres dificulta também o controle. Os antimoniais pentavalentes, SbV, são os medicamentos de primeira escolha no tratamento de todas as formas de leishmaniose em vários países. Apesar de serem amplamente utilizados na quimioterapia das leishmanioses por mais de setenta anos, apresentam alta toxicidade no tratamento clínico. Também, alguns pacientes são resistentes ao tratamento clínico com esses compostos. Neste trabalho, realizou-se uma análise proteômica comparativa entre linhagensde L. braziliensis e L. infantum sensíveis e resistentes ao SbIII mediante a utilização da metodologia 2-DE, seguida por espectrometria de massas (LC/MS/MS). Nesta tese utiliza-se a nomenclatura L. infantum (syn. L. chagasi). A análise comparativa dos perfis proteômicos entre as linhagens de Leishmania analisadas revelou que 192 spots foram únicos e/ou mais abundantes. Dos 132 spots proteicos submetidos à análise por MS, 80 foram identificados correspondendo a 57 proteínas distintas. A análise comparativa dos dados mostrou que a maioriadas proteínas com abundância diferencial em ambas as espécies está envolvida na defesa antioxidante, na resposta geral ao estresse, no metabolismo de glicose e de aminoácidos e na organização do citoesqueleto. Cinco proteínas foram mais abundantes em ambas as linhagens de Leishmania resistentes ao SbIII: triparedoxina peroxidase, alfa-tubulina, HSP83, HSP70 e HSP60.

Os ensaios de Western blotting 1-DE e 2-DE confirmaram os dados da análise proteômica. Estes ensaios revelaram que a ciclofilina-A é menos expressa em ambas as linhagens resistentes, LbSbR eLcSbR. De outro lado, a pteridina redutase é mais expressa na linhagem resistente LbSbR e apresenta nível de expressão similar entre as linhagens sensíveis e resistentes de L. infantum. Atriparedoxina peroxidase é mais abundante em ambas as linhagens resistentes, LbSbR e LcSbR. Estes resultados sugerem que o aumento da expressão de enzimas da defesa antioxidante pode desempenhar papel significativo na resistência dos parasitos aos antimoniais. Em conjunto, osdados mostram que o mecanismo de resistência de Leishmania spp. ao antimônio é complexo e multifatorial. É importante ressaltar que entre as 57 proteínas identificadas como diferencialmente adundantes entre as linhagens de Leishmania spp. sensíveis e resistentes ao antimonial 17 foram identificadas anteriormente por outros autores e que as outras 40 foram observadas apenas em nossa análise proteômica de linhagens de Leishmania spp. resistentes ao SbIII. Acreditamos que algumas dessas proteínas estejam associadas com a resposta geral ao estresse e que outras podem estar associadas ao mecanismo de resistência ao antimônio em Leishmania spp. Neste contexto, a futura análise funcional será muito importante para determinar a possível associação destas proteínas com o fenótipo de resistência de Leishmania aos antimoniais.

Visceral leishmaniasis in Brazil / Leishmaniose visceral no Brasil

Visceral leishmaniasis (VL) is among the most important vector-borne diseases that occur in Brazil, mainly due to its zoonotic nature. It is currently present in almost all Brazilian territory, and its control is a challenge both for veterinarians and for public health officials. The etiologic agent is Leishmania infantum (syn chagasi), and the main vector in Brazil is Lutzomyia longipalpis. Of all animals identified as reservoirs of VL, the dog is considered the most important domestic reservoir. Although the disease has already been identified in cats, the epidemiological role of this animal species is still unclear. This article presents a brief review of the epidemiological situation of the disease, its mode of transmission, clinical features in dogs and cats as well as possible risk factors associated with the occurrence of the disease in Brazil.

A leishmaniose visceral (LV) está entre as mais importantes doenças transmitidas por vetores que ocorrem no Brasil, principalmente devido ao seu caráter zoonótico. Atualmente, está presente em quase todo o território brasileiro, e seu controle é um desafio tanto para médicos veterinários como para agentes de saúde pública. O agente etiológico da doença é a Leishmania infantum (syn chagasi), e o principal vetor no Brasil é a Lutzomyia longipalpis. De todos os animais identificados como reservatórios da LV, o cão é considerado o reservatório doméstico mais importante. Apesar da doença já ter sido identificada em gatos, o papel epidemiológico desta espécie animal ainda é incerto. O presente artigo apresenta uma breve revisão sobre a situação epidemiológica da doença, a sua forma de transmissão, os aspectos clínicos nos cães e gatos, bem como possíveis fatores de risco associados à ocorrência da doença no Brasil.

Análise proteômica comparativa de linhagens de Leishmania V. braziliensis e de Leishmania L. infantum sensíveis e resistentes aos antimoniais / Comparative proteomic analysis of Leishmania strains V. braziliensis and Leishmania infantum L. sensitive and resistant to antimony

A emergência de espécies de Leishmania resistentes ao antimonial é um grave problema em vários países. A quimioterapia é a medida mais importante para o controle das leishmanioses, visto que não existe ainda uma vacina eficiente para uso em humanos. Além disso, o controle vetorial é difícil em razão das características ambientais muito diversas e da existência de um grande número de reservatórios domésticos e silvestres dificulta também o controle. Os antimoniais pentavalentes, SbV, são os medicamentos de primeira escolha no tratamento de todas as formas de leishmaniose em vários países. Apesar de serem amplamente utilizados na quimioterapia das leishmanioses por mais de setenta anos, apresentam alta toxicidade no tratamento clínico. Também, alguns pacientes são resistentes ao tratamento clínico com esses compostos. Neste trabalho, realizou-se uma análise proteômica comparativa entre linhagensde L. braziliensis e L. infantum sensíveis e resistentes ao SbIII mediante a utilização da metodologia 2-DE, seguida por espectrometria de massas (LC/MS/MS). Nesta tese utiliza-se a nomenclatura L. infantum (syn. L. chagasi). A análise comparativa dos perfis proteômicos entre as linhagens de Leishmania analisadas revelou que 192 spots foram únicos e/ou mais abundantes. Dos 132 spots proteicos submetidos à análise por MS, 80 foram identificados correspondendo a 57 proteínas distintas. A análise comparativa dos dados mostrou que a maioriadas proteínas com abundância diferencial em ambas as espécies está envolvida na defesa antioxidante, na resposta geral ao estresse, no metabolismo de glicose e de aminoácidos e na organização do citoesqueleto. Cinco proteínas foram mais abundantes em ambas as linhagens de Leishmania resistentes ao SbIII: triparedoxina peroxidase, alfa-tubulina, HSP83, HSP70 e HSP60...

Os ensaios de Western blotting 1-DE e 2-DE confirmaram os dados da análise proteômica. Estes ensaios revelaram que a ciclofilina-A é menos expressa em ambas as linhagens resistentes, LbSbR eLcSbR. De outro lado, a pteridina redutase é mais expressa na linhagem resistente LbSbR e apresenta nível de expressão similar entre as linhagens sensíveis e resistentes de L. infantum. Atriparedoxina peroxidase é mais abundante em ambas as linhagens resistentes, LbSbR e LcSbR. Estes resultados sugerem que o aumento da expressão de enzimas da defesa antioxidante pode desempenhar papel significativo na resistência dos parasitos aos antimoniais. Em conjunto, osdados mostram que o mecanismo de resistência de Leishmania spp. ao antimônio é complexo e multifatorial. É importante ressaltar que entre as 57 proteínas identificadas como diferencialmente adundantes entre as linhagens de Leishmania spp. sensíveis e resistentes ao antimonial 17 foram identificadas anteriormente por outros autores e que as outras 40 foram observadas apenas em nossa análise proteômica de linhagens de Leishmania spp. resistentes ao SbIII. Acreditamos que algumas dessas proteínas estejam associadas com a resposta geral ao estresse e que outras podem estar associadas ao mecanismo de resistência ao antimônio em Leishmania spp. Neste contexto, a futura análise funcional será muito importante para determinar a possível associação destas proteínas com o fenótipo de resistência de Leishmania aos antimoniais...

Factors associated with asymptomatic infection in family members and neighbors of patients with visceral leishmaniasis / Fatores associados com a infecção assintomática em familiares e vizinhos de pacientes com leishmaniose visceral

This study analyzed factors associated with asymptomatic Leishmania chagasi infection in family members and neighbors of patients with visceral leishmaniasis (VL). A cross-sectional study was conducted with 361 individuals in the counties comprising Ilha de São Luís (São Luís Island) in Maranhão State, Brazil. The Montenegro skin test (MST) and serology by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) were performed to detect infection. Odds ratios (OR) and prevalence ratios (PR) and their 95% confidence intervals (95%CI) were estimated by multilevel logistic regression and Poisson regression, respectively. The rates of positive reactions were 71.3% for MST and 9.7% for ELISA. The variable associated with infection according to MST was living in the same household as the index case (PR = 1.36; 95%CI: 1.03-1.78). According to ELISA, the statistically significant variables were: living in the county of Raposa (OR = 3.56; 95%CI: 1.24-10.19) and living in the same household as the index case (OR = 2.70; 95%CI: 1.19-6.08). Family members of individuals with LV are at increased risk of infection. Priority control measures should target these families.

Este estudo transversal analisou os fatores associados à infecção assintomática por Leishmania chagasi em familiares e vizinhos de pacientes com leishmaniose visceral (LV) e foi realizado com 361 indivíduos nos municípios que compõem a Ilha de São Luís, Maranhão, Brasil. Foram realizadas a Intradermorreação de Montenegro (IDRM) e a sorologia por Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) para detectar a infecção. Razões de chances (RC) e razões de prevalências (RP) e seus intervalos de 95% de confiança (IC95%) foram estimadas por meio de regressão logística multinível e regressão de Poisson, respectivamente. A proporção de positivos foi de 71,3% para a IDRM e de 9,7% para o ELISA. A variável associada à infecção segundo a IDRM foi residir no domicílio do caso índice (RP = 1,36; IC95%: 1,03-1,78). Pelo ELISA, as variáveis com significância estatística foram: residir no Município de Raposa (RC = 3,56; IC95%: 1,24-10,19) e no domicílio do caso índice (RC = 2,70; IC95%: 1,19-6,08). Familiares de indivíduos com LV têm maior risco de infecção. Medidas de controle devem ser efetivadas e direcionadas prioritariamente a essas famílias.

Papel da proteína heme oxigenase 1 na infecção de macrófagos por leishmania chagasi / Role of heme oxygenase 1 protein on macrophage infection by leishmania chagasi

A leishmaniose visceral (LV) apresenta ampla distribuição geográfica e é fatal caso não seja tratada. As manifestações hematológicas são constantes na LV e em casos não tratados os pacientes evoluem à óbito por sangramento maciço ou anemia grave. Neste cenário, mecanismos ligados à hemólise, metabolismo do heme e atividade da enzima heme oxigenase podem estar envolvidos na imunopatogênese da LV, no entanto essa perspectiva ainda não foi explorada. A heme oxigenase (HO) tem importantes propriedades regulatórias e está envolvida em processos fisiológicos e patofisiológicos como citoproteção e inflamação. Apesar de sua sugestiva participação no contexto da infecção por Leishmania, uma rápida pesquisa no PubMed com as palavras heme oxigenase e Leishmania remete a somente três trabalhos até a presente data. Nesse projeto testaremos a hipótese de que a ativação da enzima heme oxigenase-1 (HO-1) favorece a infecção por Leishmania (L) chagasi, principal agente etiológico da LV humana no Brasil. Nossas observações nesse trabalho indicam que a enzima HO-1 é induzida em macrófagos durante a infecção por L. chagasi e que a indução farmacológica da HO-1, pela CoPP aumenta a carga parasitária de macrófagos infectados por L. chagasi e reduz a produção de mediadores pró-inflamatórios frente à estimulação por LPS, tais como TNF, NO, PGE2, MCP-1, IL-1β e IL-6. Além disso, a HO-1 favorece um ambiente anti-inflamatório onde prevalece a presença de IL-10 sobre a de TNF. Macrófagos derivados de medula óssea de camundongos deficientes no gene HO-1 tem menor carga parasitária, quando infectados por L. chagasi em comparação aos macrófagos de camundongos selvagens. Esses achados indicam um potencial deletério para a HO-1 na infecção por L. chagasi, bem como sugerem possíveis mecanismos envolvidos na imunopatogênese da LV.

Imunização de camundongos com fragmentos recombinantes de cinesina de Leishmania chagasi e/ou plasmídeos codificando Il-12 e IL-2 murinas / Immunization of mice with recombinant fragments of Leishmania chagasi kinesin and/or plasmids encoding IL-12 and IL-2 murine

Leishmaniose visceral zoonótica (LV) é uma doença que afeta homens e cães e é causada por protozoários das espécies Leishmania infantum e Leishmania chagasi. O cão doméstico é o principal reservatório do agente causal. Uma vacina efetiva contra a LV canina poderá contribuir para o controle da infecção e/ou doença humana e canina. A resposta imune protetora contra a LV canina é do tipo celular (Th1). Em nosso laboratório, dentre um grupo de cinco antígenos ecombinantes selecionados de uma biblioteca de cDNA de L. chagasi, usando-se uma mistura de soro de cães naturalmente infectados e que exibiam resposta imune humoral e celular específica, um fragmento da extremidade carboxila de uma cinesina com cauda de 6 histidinas (rLci2B-NH6), para permitir a purificação, foi escolhido para a avaliação do seu potencial como candidato a componente de uma vacina contra LV canina. No presente trabalho foi avaliada a imunização de camundongos BALB/c com rLci2BNH6/ saponina em associação com os plasmídeos pcDNA3.1-scmu-IL-12 e/ou pcDNA3.1-mu-IL-2. Os animais imunizados com rLci2B-NH6/saponina em associação com a IL-12 e/ou IL-2 produziram anticorpos IgG, IgG2a e IgG1 específicos. Esplenócitos desses animais exibiram proliferação, mas não produziram IFN-γ ou IL-5 após estimulação in vitro com rLci2B-NH6. Esses resultados sugerem que a adição de pcDNA3.1-mu-IL-2 no protocolo de imunização não é capaz de promover uma resposta imune predominantemente Th1. Também foi avaliada a imunização de camundongos com proteína recombinante quimérica (rLci2-NTCT-NH6) formada pelos domínios não repetitivos presentes nas extremidades amina e carboxila codificadas pelo gene da cinesina. Camundongos BALB/c imunizados com rLci2- NT-CT-NH6 ou uma proteína recombinante químerica controle, contendo 5 domínios repetitivos presentes em rLci2B-NH6 entre os domínios não repetitivos de rLci2-NT-CTNH6, apresentaram produção de IgG, IgG2a e IgG1. Esplenócitos desses animais exibiram proliferação, mas não produziram IFN-γ e apenas esplenócitos dos camundongos imunizados com rLci2-NT-5R-CT-NH6 sintetizaram IL-5, após estimulação in vitro com as respectivas proteínas. Contudo, durante a purificação de rLci2-NT-CT-NH6 e rLci2-NT-5R-CT-NH6 ocorreu intensa proteólise que pode ter resultado na destruição de epítopos capazes de induzir resposta Th1. Previamente, em nosso laboratório, foi observada a morte de alguns camundongos injetados com 100 μg saponina/dose, por isso, doses menores de saponina (50 ou 25 μg) foram avaliadas como adjuvante na indução de resposta imune a rLci2B-NH6. Os resultados da mensuração dos anticorpos foram semelhantes nos três grupos. Curiosamente, somente esplenócitos do grupo injetado com 25 μg/dose exibiram proliferação específica. O grupo injetado com 100 μg/dose produziu IFN-γ e IL-5 e o grupo injetado com 50 μg/dose sintetizou IFN-γ, mas não produziu IL-5, após estimulação in vitro com rLci2B-NH6.

Comportamento da fauna de flebotomíneos, com ênfase em Lutzomyia Longpalpis, em área endêmica para Leishmaniose Visceral no Município de Passira, Agreste de Pernambuco / Behavior phlebotomine fauna, with emphasis on Lutzomyia longipalpis in an endemic area for visceral leishmaniasis in municipal Passirra, Agreste of Pernambuco

As leishmanioses são doenças infecciosas, causadas por protozoários do gênero Leishmania, trasmistidos por insetos da família Phlebotominae (Diptera: Psychodidae). Em Pernambuco, a LV vem apresentando importante expansão geográfica. Passira registrou 06 casos de LV humana entre 2002 e 2007 e, 35 casos de LVC entre 2005 e 2009. Este estudo objetivou descrever o comportamento da fauna de flebotomíneos, com ênfase em Lutzomyia longipalpis, em área endêmica para leishmaniose visceral no município de Passira, Agreste de Pernambuco. Quatro localidades foram selecionadas para o estudo (Apara, Poço do Pau, Sítio Borba e Varjada de Cima). Utilizou-se armadilhas CDC, armadilha de Shannon e armadilha Disney modificada com isca animal (Galea spixii e Rattus rattus) para coletar os flebotomíneos em diferentes ecótopos. Dos flebotomíneos coletados alguns foram dissecados e o restante foi feito pools com 5 ou 10 exemplares para extração e detecção do parasito através do teste de PCR. Entre agosto/2009 a agosto/2010 foram capturados 24.226 flebotomíneos com armadilha CDC, em diferentes ecótopos. Destes, 23.716 exemplares são de Lutzomyia longipalpis. Ademais, foram realizadas capturas com Armadilha de Shannon, na qual se coletaram 373 espécimens de Lutzomyia longipalpis, sendo então dissecados 30 exemplares. Verificou-se que de todos os ecótopos trabalhados, o E1 referente ao galinheiro foi o que mais atraiu os flebotomíneos. Três animais (dois Galea spixii e um Rattus rattus) foram utilizados para captura de flebotomíneos com armadilha Disney modificada, sendo 228 espécimens coletados de Lutzomyia longipalpis. Adicionalmente, verificou-se a flutuação da populaçao de flebotomíneos com a variação climática na região, no qual se podem observar picos de flebotomíenos em períodos após a chuva, que correspondeu ao mês de fevereiro. Para detecção de L. infantum foram analisadas 628 pools de flebotomíneos, sendo 01 exemplar de Lutzomyia longipalpis apresentando positividade...

Leishmaniasis are infectious diseases caused by protozoa of the genus Leishmania, transmited by insects of Phlebotominae family (Diptera: Psychodidae). In Pernambuco, the VL has shown significant geographic expansion. Passira recorded 06 cases of human VL between 2002 and 2007, and 35 cases of VCL between 2005 and 2009. This study aimed describe thebehavior of the sandfly fauna, with emphasis on Lutzomyia longipalpis in an endemic area for visceral leishmaniasis in the municipality of Passira, Agreste of Pernambuco. Four locations were selected for the study (Apara, Poço do Pau, Sítio Borba and Varjada de Cima). We used CDC light traps, Shannon traps and traps baited with Disney modified animal (Galea spixii and Rattus rattus) to collect sand flies in different ecotypes. Some of the sandflies collected were dissected and the remainder was made pools of 5 or 10 copies for extraction anddetection of parasites by PCR test. Between August/2009 and August/2010 were captured 24.226 san flies with CDC light traps, in differents ecotypes. Of these, 23.716 specimens are Lutzomyia longipalpis. Moreover, there were captured with Shannon trap, in wich collected 373 specimens of Lutzomyia longipalpis, and then dissected 30 specimens. It was found that all workd ecotypes, E1 corresponding to henhouse was the most attracted sand flies. Threeanimals (two Galea spixii and one Rattus rattus) were used to capture sand flies with Disney trap changed, being 228 specimens of Lutzomyia longipalpis collected. Additionally, there was a fluctuation of the population of sand flies with climate variability in the region in which we can observe peaks of sand flies after rain periods, which corresponded to the month of February. For detection of L. infantum were analyzed 628 pools of sand flies, and 01 copie of Lutzomyia longipalpis was positive.

Análisis cuantitativo del crecimiento y cambio morfométrico en poblaciones de Leishmania chagasi y Trypanosoma cruzi mantenidos en cultivos axénicos puros y mixtos / Quantitative approach to the analysis of the growth and morphometric change in populations of Leishmania chagasi and Trypanosoma cruzi maintained in pure and mixed axenic cultures

Las relaciones que se establecen entre géneros de la familia trypanosomatidae en condiciones de coexistencia en el mismo medioambiente pueden estar vinculadas a respuestas compensatorias inter-poblacionales que incluyen cambios morfológicos (diferentes estadios) y morfométricos (diferencias mensurables). El análisis cuantitativo de tales respuestas en cultivos axénicos puros de Leishmania chagasi y trypanosoma cruzi, así como en isomezclas axénicas de L. chagasi-T. cruzi mantenidas in vitro, no ha sido abordado, desconociéndose por lo tanto, particularidades biológicas. Muestras interdiarias de cultivo se fijaron, colorearon, observaron, digitalizaron y procesaron cuantitativamente. Además de cuantificar las densidades poblacionales, se registraron las magnitudes numéricas de variables morfométricas que, posteriormente, se analizaron con herramientas estadísticas. Los resultados indicaron cambios específicos en las variables investigadas, así como heterogeneidad morfométrica entre los mismos morfotipos de los mismos géneros al ser mantenidos en cultivos puros o mixtos. Los modelos de cambio morfométrico de L. chagasi y T. cruzi en cultivos puros difieren de los modelos de cambio morfométrico en los cultivos mixtos (L. chagasi-T. cruzi). Las metodologías biométricas discriminan, en términos morfométricos, poblaciones del mismo estadio (morfotipo) en ambientes diferentes.

The relations established among genera of the Trypanosomatidae family in coexisting conditions in the same environment may be linked to inter-population compensatory answers that include morphological (differences among stages) and morphometrical (measurable difference) changes. The quantitative analysis of these answers in Leishmania chagasi and Trypanosoma cruzi pure axenic cultures, as well as in L. chagasi - T. cruzi axenic iso-mixtures in vitro maintained has not been approached, and consequently, potentially useful biological particularities in the control of these important human parasites are unknown. Every other day culture samples were fixed, stained, observed, digitalized and quantitatively processed. In addition to quantify, the population densities and the appearance-disappearance stage (morphotypes) dynamics, the numeric magnitudes of the morphometric variables were recorded and later analyzed with multivariate statistical techniques. The results indicate specific changes in the investigated variables, as well as morphometric heterogeneity between the same morphotypes of the same genera when maintained in pure or mixed cultivation. The morphometric change models for L. chagasi and T. cruzi in pure culture differ from the models of morphometric change in mixed cultivation (L. chagasi-T. cruzi). The biometric methodologies discriminate in morphometric terms populations of the same stage (morfotype) in different environments.

Caracterização do polimorfismo intraespecífico do lipofosfoglicano (LPG) de Leishmania infantum Nicolle, 1908 e seu papel na interação com Lutzomyia longipalpis e macrófagos murinos

O LPG é o principal glicoconjugado da superfície de Leishmania sendo constituído por quatro domínios: (I) uma âncora lipídica de 1-O-alquil-2-liso-fosfatidilinositol, (II) uma parte central formada por um heptassacarídeo Gal(α1,6)Gal(α1,3)Galf(β1,3)[Glc(α1)- PO4]Man(α1,3)Man(α1,4)-GlcN(α1), (III) uma região de unidades repetitivas fosforiladas Gal(β1,4)Man(α1)-PO4 e (IV) um oligossacarídeo terminal ("cap"). As variações na seqüência e composição de açúcares ligados às unidades repetitivas e ao cap atribuem polimorfismos à molécula de LPG. O polimorfismo interespecífico do LPG tem sido amplamente estudado para espécies do Velho e do Novo Mundo e demonstra implicações na especificidade da. interação parasito-vetor. Entretanto, pouco se sabe sobre a variabilidade intraespecífica da molécula de LPG. O principal objetivo deste trabalho foi avaliar o grau de polimorfismo das unidades repetitivas do LPG de 16 cepas de Leishmania infantum do Brasil, França, Tunísia e Algéria. Além disso, o papel deste polimorfismo foi avaliado durante a interação in vivo de L. infantum com Lutzomyia longipalpis e na interação in vitro dos parasitos e seus respectivos LPGs com macrófagos murinos.

O polimorfismo das unidades repetitivas do LPG de L. infantum foi considerado relativamente baixo e, de acordo com suas modificações, o LPG foi classificado em três tipos: tipo I, LPG cujas unidades repetitivas não apresentam cadeias laterais; tipo II, LPG cujas unidades repetitivas apresentam cadeias laterais contendo um resíduo de β-glicose e, tipo III, LPG cujas unidades repetitivas apresentam cadeias laterais contendo até três resíduos de glicose. Essas variações no LPG não afetaram a densidade de parasitos no intestino do vetor. No entanto, foi observada uma tendência à maior produção de Óxido Nítrico (NO) por macrófagos estimulados por LPGs glicosilados do tipo II. Juntos, os resultados obtidos neste trabalho indicam que o polimorfismo intraespecífico do LPG de L. infantum não tem efeito sobre a interação do parasito com seu vetor, mas exerce papel regulatório sobre a produção de NO. A caracterização de todos estes LPGs, realizada pela primeira vez com uma ferramenta bioquímica, confirma os dados de estudos moleculares anteriores e nos permitem considerar que L. chagasi e L. infantum são a mesma espécie.

Caracterização do polimorfismo intraespecífico do lipofosfoglicano (LPG) de Leishmania infantum Nicolle, 1908 e seu papel na interação com Lutzomyia longipalpis e macrófagos murinos / Characterization of intraspecific polymorphism of lipofosfoglicano (LPG) of Leishmania infantum Nicolle, 1908 and its role in the interaction with murine macrophages and Lutzomyia longipalpis

O LPG é o principal glicoconjugado da superfície de Leishmania sendo constituído por quatro domínios: (I) uma âncora lipídica de 1-O-alquil-2-liso-fosfatidilinositol, (II) uma parte central formada por um heptassacarídeo Gal(α1,6)Gal(α1,3)Galf(β1,3)[Glc(α1)- PO4]Man(α1,3)Man(α1,4)-GlcN(α1), (III) uma região de unidades repetitivas fosforiladas Gal(β1,4)Man(α1)-PO4 e (IV) um oligossacarídeo terminal ("cap"). As variações na seqüência e composição de açúcares ligados às unidades repetitivas e ao cap atribuem polimorfismos à molécula de LPG. O polimorfismo interespecífico do LPG tem sido amplamente estudado para espécies do Velho e do Novo Mundo e demonstra implicações na especificidade da. interação parasito-vetor. Entretanto, pouco se sabe sobre a variabilidade intraespecífica da molécula de LPG. O principal objetivo deste trabalho foi avaliar o grau de polimorfismo das unidades repetitivas do LPG de 16 cepas de Leishmania infantum do Brasil, França, Tunísia e Algéria. Além disso, o papel deste polimorfismo foi avaliado durante a interação in vivo de L. infantum com Lutzomyia longipalpis e na interação in vitro dos parasitos e seus respectivos LPGs com macrófagos murinos.

O polimorfismo das unidades repetitivas do LPG de L. infantum foi considerado relativamente baixo e, de acordo com suas modificações, o LPG foi classificado em três tipos: tipo I, LPG cujas unidades repetitivas não apresentam cadeias laterais; tipo II, LPG cujas unidades repetitivas apresentam cadeias laterais contendo um resíduo de β-glicose e, tipo III, LPG cujas unidades repetitivas apresentam cadeias laterais contendo até três resíduos de glicose. Essas variações no LPG não afetaram a densidade de parasitos no intestino do vetor. No entanto, foi observada uma tendência à maior produção de Óxido Nítrico (NO) por macrófagos estimulados por LPGs glicosilados do tipo II. Juntos, os resultados obtidos neste trabalho indicam que o polimorfismo intraespecífico do LPG de L. infantum não tem efeito sobre a interação do parasito com seu vetor, mas exerce papel regulatório sobre a produção de NO. A caracterização de todos estes LPGs, realizada pela primeira vez com uma ferramenta bioquímica, confirma os dados de estudos moleculares anteriores e nos permitem considerar que L. chagasi e L. infantum são a mesma espécie.

Leishmaniose visceral canina: estudo parasitológico, imunológico e histopatológico em olhos de cäes / Leishmaniasis visceral in dogs: parasitological, immunological and histopathological study in eyes of dogs

O envolvimento ocular externo em cäes naturalmente infectados com Leishmania infantum e Leishmania donovani tem sido relatado por diversos autores. Entretanto, ainda näo foram realizados estudos dos olhos de cäes no nosso meio. Objetivando investigar a possibilidade de parasitismo ocular, foram examinados 12 cäes com leishmaniose visceral provenientes da regiäo metropolitana de Belo Horizonte e quatro cäes controle. O diagnóstico foi realizado através de sorologia convencional (RIFI, RFC e ELISA) e exame parasitológico de aspirado de medula óssea. Para o isolamento do parasito foi realizada a inoculaçäo de aproximadamente 100 µl de humor aquoso e/ou corpo vitreo em meio de cultura de NNN/LIT, que foi mantido a 23 ºC. Parasitismo intra-ocular foi observado em 41,6 por cento dos animais, sendo o parasito identificado como Leishmania chagasi através de caracterizaçäo isoenzimática, utilizando as enzimas: ASAT, ALAT, PGM, GPI, MDH, G6PDH e 6PGDH. Foi observado também que no humor aquoso dos animais com parasitismo da câmara anterior o conteúdo protéico foi cerca de duas vezes superior que nos demais animais. Utilizou-se o ensaio imunoenzimático (ELISA) para detecçäo de anticorpos anti-leishmania (IgM e IgG), em níveis que variaram de 1:80 a 1:2560 no humor aquoso e/ou corpo vítreo dos animais infectados e menores que 1:5 nos animais controle. O exame histopatológico dos olhos dos cäes infectados mostrou formas amastigotas no interior das células relacionadas com focos inflamatórios. Foram identificadas lesöes no tecido conjuntivo relacionadas com os músculos extra-oculares, esclera e trato uveal. Na retina, näo identificou-se exsudato inflamatório relacionado com as células parasitadas.

Visceral leishmaniasis with special reference to Egypt [review and comment]

Leishmaniases comprise several diseases of wide diversity of manifestations caused by different species of the genus Leishmania. They are grouped under 3 main headings: Cutaneous leishmaniasis, visceral leishmaniasis, and mucocutaneous leishmaniasis. Leishmania donovani complex which visceralize in man with a predilection for infecting cells in the viscera, particularly in the spleen and the main vectors, are Phlebotomus of the major group. These include L. d. donovani [Asia, mainly India and China], L. d. infantum [Mediterranean countries] infects mainly children, and L. d. chagasi [South America] infects adults and children. In this paper, the historical background of L. donovani and L. infantum with special reference to Egypt was given

Vector-host-parasite inter-relationships in leishmaniasis. I. the effect of Leishmania parasites on rate of digestion of blood proteins from various vertebrate hosts by the sand fly phlebotomus langeroni [diptera: psychodidae]

Protein digestion in the gut of Phlebotomus langeroni [Nitzulescu] was studied at 4 subsequent 24-hour intervals post feeding on human, dog [Canis familiaris], rat [Rattus rattus] and turkey [Melagris gallopava] blood with and without Leishmania infantum or L. major promastigotes. Most of the proteins of the studied blood meals were digested within 96 hours. The percentage of blood proteins digested in the first 48 hours was higher than in the second 48 hours in all cases of the studied blood meals, except the normal blood of the turkey, in which the ratio of the digested blood proteins in the 2 periods was 1: 1. During the first 48 hours, the percentage of the digested blood proteins was lower than normal in the presence of L. infantum in case of human and dog blood meals. The reverse was true in case of the rat and turkey blood meals in the presence of L. infantum and in the blood meals from each of the 4 vertebrate hosts in the presence of L. major. The significance of these findings, considering L. infantum as a natural parasite of P. langeroni in El-Agamy focus, was discussed

Vector-host-parasite inter-relationships in leishmaniasis. II-Influence of blood meal from natural vertebrate hosts with and without leishmaniasis infantum and L. major on the proteolytic activity in the gut of phlebotomus langeroni [diptera: Psychodidae]

Proteolytic activity in the gut of Phlebotomus langeroni [Nitzulescu] was studied at 4 subsequent 24-hour intervals post feeding on human, dog [Canis familiaris], rat [Rattus rattus] and turkey [Melagris gallopava] blood with and without Leishmania infantum or L. Major promastigotes. The gut proteolytic activity increased gradually after feeding to reach a maximum at 48 hours post feeding on any of the 12 studied blood meals. In all cases, the activity declined after 48 hours and almost terminated by 96 hours. In case of normal blood, the proteolytic activity, at 48 hours post feeding, was the highest in case of the dog, followed by human, rat and turkey, respectively. Promastigotes were alive and active in fresh gut smears of P. langeroni fed on human, dog and rat blood mixed with either L. infantum or L. major, throughout the digestion period [1 - 4 days]

Cricetulus migratorius [gray hamster], another possible animal reservoir of Kala-Azar in Meshkin-Shahr, Iran

Altogether, 120 Rodents of 4 species were trapped alive in various parts of Meshkin-Shahr district where visceral leishmaniasis is endemic. 13 of them were Cricetulus migratorius [gray hamste] that all were caught inside the living rooms. Nine of them showed Leishmania antibody in titers of >/= 1:100 in direct agglutination test [DAT] and amastigotes were found in the spleen smears of 2 Cricetulus migratorius. One of them showed Leishmania antibody in titer of 1:400 and another one in titer 1:800 in DA test. This is the first report on the natural infection of a rodent with Leishmania in its internal organs in the endemic foci of visceral leishmaniasis in Iran