Desenvolvimento de xenotransplantes de tumores pancreáticos humanos para varredura genética de alvos moleculares com potencial terapêutico / Establishment of xenografts from human pancreatic tumors for genetic screening of molecular targets with therapeutic potential

O adenocarcinoma ductal pancreático (PDAC, pancreatic ductal adenocarcinoma), o tipo mais prevalente de câncer do pâncreas, é uma neoplasia extremamente agressiva e com elevado índice de letalidade. Há uma necessidade premente de identificação de vulnerabilidades no PDAC que possam ser exploradas como alvos terapêuticos, e a utilização de modelos pré-clínicos que recapitulem a complexidade biológica e heterogeneidade clínica da doença é um aspecto central para a realização dessa tarefa. Os xenotransplantes de tecido tumoral derivado de pacientes (PDX, patient-derived tumor tissue xenografts), realizados em camundongos imunodeficientes, replicam com grande similaridade as principais características do tumor original e, assim, constituem uma ferramenta valiosa para o teste de drogas e estudos funcionais. Neste trabalho, 17 amostras cirúrgicas de PDAC humano foram implantadas subcutaneamente em camundongos nude atímicos. Sete tumores (41%) foram enxertados com sucesso e têm sido mantidos em sucessivas gerações de animais receptores. O exame histológico de seis desses xenoenxertos identificou características morfológicas compatíveis com os padrões reconhecidos no PDAC humano, assim como uma consistente similaridade de seu status de diferenciação histológica em relação aos perfis verificados nos tumoresoriginais. O cultivo in vitro de células derivadas de um dos xenotumores resultou em uma nova linhagem de câncer de pâncreas, com morfologia e cinética de crescimento comparáveis às de outras linhagens celulares de câncer pancreático. O potencial tumorigênico dessa nova linhagem foi validado in vivo, com uma consistente formação de tumores após inoculação em camundongos nude. A fim de aproveitar esse recurso para a investigação de potenciais alvos terapêuticos no PDAC, um rastreamento de vulnerabilidades moleculares foi realizado por meio de silenciamento gênico em larga-escala com RNA de interferência (RNAi). Uma biblioteca lentiviral de 4492 shRNAs (short hairpin RNAs), alvejando cerca de 350 genes envolvidos na regulação epigenética, foi empregada para a triagem de genes de suscetibilidade nas células derivadas de PDX, e em outras cinco linhagens tumorais pancreáticas (AsPC-1, BxPC-3, Capan-1, MIA PaCa-2 e PANC-1). Inicialmente, foi realizada uma série de experimentos preliminares, visando à amplificação e controle de qualidade da biblioteca de silenciamento, à produção de vetores lentivirais e à padronização das condições experimentais para a transdução e seleção das células-alvo. Apenas três das linhagens avaliadas (AsPC-1, MIA PaCa-2 e PANC-1) mostraram-se permissíveis à transdução pelos vetores lentivirais, e foram assim utilizadas no screening de alvos epigenéticos. A análise dos dados obtidos nesse ensaio está em curso e os resultados serão utilizados para a definição de potenciais alvos candidatos. Em conclusão, recursos valiosos para apoiar a pesquisa sobre o câncer de pâncreas foram desenvolvidos. A coleção de PDXs estabelecida, bem como a linhagem celular recém-derivada, constituem uma fonte permanente e estável de células de PDAC para análises moleculares e estudos funcionais que busquem elucidar aspectos da doença ainda pouco compreendidos. Adicionalmente, os reagentes gerados e a expertise adquirida com os ensaiosrealizados com a biblioteca de shRNAs contra alvos epigenéticos serão de grande utilidade em futuras investigações para identificar genes com funções importantes na manutenção do fenótipo tumoral, e consequentemente com potencial para serem explorados terapeuticamente

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC), the most prevalent type of pancreatic cancer, is a highly aggressive and lethal neoplasm. There is a pressing need to identify vulnerabilities in PDAC suited to be exploited as therapeutic targets, and the use of preclinical models recapitulating the biological complexity and clinical heterogeneity of the disease is central to this task. Patient-derived tumor tissue xenografts (PDX), established in immunodeficient mice, replicate with great similarity the main characteristics of the original tumor and thus constitute a valuable tool for drug testing and functional studies. In this work, 17 surgical samples of human PDAC were implanted subcutaneously in athymic nude mice. Seven tumors (41%) were successfully grafted and have been maintained through successive generations of recipient animals. Histological examination of six of these xenografts identified morphological characteristics compatible with the recognized patterns of human PDAC, as well as a consistent similarity of their histological differentiation status in relation to the profiles verified in the original tumors. In vitro culture of cells derived from one of these xenografts resulted in a new pancreatic cancer cell line, with morphology and growth kinetics comparable to those of other pancreatic tumor cells. The tumorigenic potential of this freshly derived cell line was validated in vivo, with a consistent tumor formation following inoculation into nude mice. To take advantage ofthis resource to investigate potential therapeutic targets in PDAC, a screening of molecular vulnerabilities was performed through large-scale gene silencing with RNA interference (RNAi). A lentiviral library containing 4492 short hairpin RNAs (shRNAs), targeting about 350 genes involved in epigenetic regulation, was employed for the search of susceptibility genes in the PDX-derived cells and in other five pancreatic tumor cell lines (AsPC-1, BxPC -3, Capan-1, MIA PaCa-2 and PANC-1). Initially, a series of preliminary experiments were carried out aiming at the amplification and quality control of the silencing library, production of lentiviral vectors and adjustment of the experimental conditions for transduction and selection of the target cells. Only three of the cell lines evaluated (AsPC-1, MIA PaCa-2 and PANC-1) were permissible for transduction by the lentiviral vectors, and were accordingly used in the screening of epigenetic targets. The analysis of data obtained in this trial is ongoing and the results will be used for definition of potential candidate targets. In conclusion, valuable resources to support research on pancreatic cancer have been developed. The established collection of PDXs as well as the newly derived cell line constitutes a permanent and stable source of PDAC cells for molecular analyzes and functional studies seeking to elucidate aspects of this disease that are still poorly understood. Additionally, both the reagents generated and the expertise gained from the RNAi assay against epigenetic targets will have inordinate usefulness in future investigations to identify genes with major functions in maintaining the malignant phenotype, and consequently with the potential to be exploited therapeutically

Postoperative Nutritional Effects of Early Enteral Feeding Compared with Total Parental Nutrition in Pancreaticoduodectomy Patients: A Prosepective, Randomized Study

The benefits of early enteral feeding (EEN) have been demonstrated in gastrointestinal surgery. But, the impact of EEN has not been elucidated yet. We assessed the postoperative nutritional status of patients who had undergone pancreaticoduodenectomy (PD) according to the postoperative nutritional method and compared the clinical outcomes of two methods. A prospective randomized trial was undertaken following PD. Patients were randomly divided into two groups; the EEN group received the postoperative enteral feed and the control group received the postoperative total parenteral nutrition (TPN) management. Thirty-eight patients were included in our analyses. The first day of bowel movement and time to take a normal soft diet was significantly shorter in EEN group than in TPN group. Prealbumin and transferrin were significantly reduced on post-operative day (POD) 7 and were slowly recovered until POD 90 in the TPN group than in the EEN group. EEN group rapidly recovered weight after POD 21 whereas it was gradually decreased in TPN group until POD 90. EEN after PD is associated with preservation of weight compared with TPN and impact on recovery of digestive function after PD.

Respuesta a la terapia combinada vs monoterapia con betabloqueantes en profilaxis primaria de sangrado variceal en pacientes con cirrosis hepática / Response to combined therapy vs beta blockers monotherapy in the primary prophylaxis of bleeding esophageal varices in cirrhotics

Esta investigación tuvo como objetivo comparar los resultados del propanolol combinado o no con ligadura endoscópica (LE) en la profilaxis primaria del sangrado variceal en pacientes que acudieron al Servicio de Gastroenterología del Hospital Universitario de Maracaibo, durante los meses de Enero a Octubre 2009. La investigación fue de tipo correlacional, prospectiva, longitudinal. La población estuvo conformada por 40 pacientes entre 18 y 75 años de edad con Cirrosis Hepática y varices esofágicas de tamaño mediano-grande con o sin signos rojos, sin antecedentes de hemorragia digestiva superior. Se seleccionaron al azar 2 grupos, el primero estuvo representado por 20 pacientes, quienes fueron sometidos a LE combinado con Propanolol y el segundo por 20 pacientes tratados sólo con Propanolol. Para la recolección de datos se diseñó un cuestionario basado en las variables, dimensiones e indicadores propuestos en la investigación. Se demostró que el propanolol como monoterapia es tan efectivo como combinado con LE en la profilaxis primaria del sangrado variceal.

This research was aim to relate the results propranolol combined or not with endoscopic ligation (LE) in the primary prophylaxis of variceal bleeding in the Gastroenterology Service, Hospital Universitario de Maracaibo, during the months of January to October 2009. A correlational, prospective, longitudinal type study. The population was 40 patients between 18 and 75 years old with liver cirrhosis and esophageal varices of large-medium size, with no history of upper gastrointestinal bleeding. They were two randomly selected samples, the first is represented by 20 patients who underwent LE combined with propranolol and the second 20 patients treated with propranolol alone. For data collection a questionnaire was designed based on the variables, dimensions and indicators proposed in the research. We demonstrated that monotherapy with propranolol is as effective as combined with LE in the primary prophylaxis of variceal bleeding.

Las hormonas esteroides y el páncreas: Un nuevo paradigma / Steroid hormones and pancreas: A new paradigm

The relation between steroid hormones and pancreatic function has been poorly discussed and not very well understood. In general, there is a lack of recognition among the scientific community about the importance of steroids in pancreatic function (current paradigm). In the present article we present basic, as well as clinic and epidemiologic data that demonstrate steroid synthesis and steroid biotransformation by pancreatic tissue, how exocrine and endocrine functions are modulated by steroids, the gender specific frequency and behavior of some tumors and the use of synthetic steroids and steroid action antagonists as therapeutic agents. With the available information it is possible to establish that: 1. Pancreatic tissue synthesize and transform steroid hormones. 2. Pancreatic tissue respond to steroid hormones and express steroid specific receptor molecules. 3. Some endocrine functions such as insulin synthesis and release are modulated by steroids. 4. Tumor growth is modulated by steroids and anti-steroid drugs. This set of data creates a new paradigm for the holistic study of pancreas and opens new research fields. The application of this new paradigm might result in an increase in the knowledge of pancreatic physiology, in the design of new and better diagnostic methods and eventually in the design of more effective medical treatments for the pancreatic cancers.

La relación de las hormonas esteroides con el páncreas ha sido muy poco explorada y comprendida y no se concede en general que exista una interacción relevante entre su función y los esteroides endógenos o exógenos (paradigma actual). En esta revisión se presentan datos de modelos experimentales y de estudios clínicos y epidemiológicos que demuestran que existe una clara relación entre la biotransformación y el efecto de las hormonas esteroides y la fisiopatología del páncreas. Con la información disponible se puede establecer que: 1. El páncreas es un órgano que sintetiza y transforma hormonas esteroides. 2. Que expresa receptores específicos para este tipo de substancias. 3. Que algunas de sus funciones como la síntesis y liberación de la insulina pueden ser modulados por la acción de esteroides gonadales. 4. Que el crecimiento tumoral puede ser inducido o frenado por la acción de esteroides y antiesteroides. Estas relaciones establecen un nuevo paradigma en el estudio de la fisiopatología del páncreas y abren nuevas líneas de investigación para el avance del conocimiento y su eventual aplicación clínica.

Pancreatic cancer: new strategies available, but long battle ahead

With the recent advancement in science some neoplasia, such as certain leukemia, are less lethal, but unfortunately this is not the case with all diseases. The art of diagnosis and treatment of certain tumors is still in a state of dormancy. Pancreatic cancer remains a notoriously difficult disease to treat. Pancreatic cancer is an aggressive tumor and unless complete surgical resection is possible, the disease is fatal. The diagnostic tools currently available usually do not detect early stage of this disease, and therefore most patients have metastasis at the time of diagnosis. Little is know regarding chemoprevention, and pharmacologic and surgical interventions are seldom curative. Thus, efforts to understand the molecular mechanism underlying the development of pancreatic cancer may lead to prevention or a better prognosis. This is an editorial

Cáncer de páncreas / Cancer of the pancreas

Objetivo: Revisar y actualizar información epidemiológica, clínica histopatológica, de diagnóstico, etapificación y tratamiento del cáncer de páncreas. Antecedentes: El cáncer de páncreas en México y en el mundo ha mostrado incremento en su frecuencia. Es una enfermedad de diagnóstico temprano difícil y pronóstico generalmente malo, que produce elevada mortalidad. Método: Se hizo una recopilación de la información contenida en artículos clásicos y de informes recientes de la literatura de acuerdo con los objetivos planteados. Resultados: La ingesta de café y bebidas alcohólicas además del tabaquismo con los aspectos epidemiológicos más frecuentemente relacionados con la enfermedad. Los síntomas son inespecíficos y cuando ya son evidentes normalmente la enfermedad ya está avanzada. El adenocarcinoma intraductal es la variedad histológica más frecuente. La sospecha clínica apoyada de la tomografía Axial Computarizada (TAC) son elementos importantes en el diagnóstico. Existen otros novedosos como los anticuerpos monoclonales y la determinación de oncogenes. La etapificación es importante para conocer el tipo de tratamiento apropiado en cada caso. La operación clásica sigue siendo la duodenopancreatectomía la cual ha sufrido algunas modificaciones que no inciden grandemente en los resultados a largo plazo. Conclusiones: En la actualidad se tiene un mejor conocimiento de la enfermedad lo cual ha redituado en diagnósticos más tempranos y en un incremento en la sobrevida

Tumores endocrinos del páncreas / Endocrine tumors of the pancreas

Antecedentes. Los tumores endocrinos del páncreas son neoplasias derivadas de sus células neuroendocrinas o las situadas en la pared del duodeno. Objetivo. Describir las características clínicas, métodos diagnósticos y de tratamiento de los tumores endocrinos del páncreas, así como analizar la experiencia con estos tumores en el Instituto Nacional de la Nutrición ®Salvador Zubirán¼. Resultados. los tumores endocrinos del páncreas son neoplasias de crecimiento lento. Los más comunes son el insulinoma, el gastrinoma y los tumores no funcionales. El cuadro clínico de los tumores funcionales está ocasionado por el efecto de los péptidos secretados y el diagnóstico se establece al demostrar elevación de la hormona correspondiente. Para evaluar la localización de los tumores e investigar la presencia de metástasis, se han empleado diversos estudios de imagen con resultados poco satisfactorios en cuanto a localización. Recientemente se han empleado estudios dinámicos que permiten regionalizar la elevación hormonal y tanto el ultrasonido transendoscópico como transoperatorio parecen ser estudios promisorios para la localización del tumor. El tratamiento curativo consiste en la resección quirúrgica, e incluso la resección de metástasis hepáticas ha demostrado mejoría en la sobrevida. En el INNSZ se han administrado a 38 pacientes con tumores endocrinos del páncreas en un periodo de 32 años. El tumor más frecuente fue el insulinoma, seguido por los tumores no funcionales y el gastrinoma. La gran mayoría de los insulinomas fueron benignos, no así el resto de los tumores. Conclusiones. Los tumores endocrinos del páncreas son lesiones poco frecuentes, con cuadros clínicos muy variados en relación a la hormona que producen, son difíciles de localizar antes de la cirugía y se caracterizan por cursar con una evolución muy favorable a juzgar por la alta frecuencia de curación de las lesiones benignas y la supervivencia prolongada de los pacientes con tumores malignos

Adenocarcinoma de páncreas. ¿Es frecuente su diagnóstico precoz? / Pancreas adenocarcinoma. Is frequent early diagnosis?

El cáncer de páncreas se encuentra dentro de las principales causas de muerte por cáncer, con un pronóstico grave, ya que sólo 1 por ciento de los pacientes en nuestro medio se pueden curar con los procedimientos terapéuticos actuales, por lo que el diagnóstico temprano es de vital importancia. Se revisaron 85 pacientes en diez años; 51 masculino y 34 femeninos. Los antecentes más importantes fueron: alcoholismo, tabaquismo y diabetes mellitus. El dolor abdominal, pérdida de peso, ictericia, náusea, vómito y tumoración abdominal, fueron los síntomas y signos más frecuentes. El diagnóstico fue realizado en base a cuadro clínico, ultrasonido y tomografía computada. Quince pacientes fueron tratados médicamente por sus condiciones clínicas. En seis se realizó laparotomía exploradora sin otro procedimiento agregado; 58 pacientes fueron sometidos a cirugía paliativa y seis a cirugía curativa. Sobreviven actualmente tres pacientes. Después de estos resultaods se enfatiza la necesidad de un diagnóstico temprano

Tumor sólido epitelial papilar-quístico del páncreas: reporte de un caso clínico y revisión de la literatura / Solid and papillary epithelial tumor of the pancreas

El tumor sólido epitelial papilar quístico del páncreas (SEPQ) es una infrecuente neoplasia de bajo grado de malignidad que ocurre principalmente en adolescentes y mujeres jóvenes. Reportamos un caso de SEPQ en una mujer de 17 años de edad, que ingresó por una tumoración abdominal, la cual fue diagnosticada mediante biopsia por aspiración. El tumor fué resecado totalmente. En el seguimiento a los 6 meses no hay evidencia de recidiva. Siendo una patología poco común, se hace una revisión de la literatura sobre los aspectos clínicos, histológicos, radiológicos y quirúrgicos

Cáncer de páncreas / Pancreas cancer

El páncreas es un órgano retropiretoneal que está estrechamente relacionado a muchas otras estructuras abdominales incluyendo los sistemas nervioso y linfático. El cáncer pancreático es generalmente irresecable al momento de su diagnóstico y la supervivencia a los 5 años es menor al 3%. Una serie de técnicas pueden ser necesarias para detectar el carcinoma pancreático. Estas incluyen: ecografía abdominal, tomografía axial computarizada (TAC), colangiopancreatografía retrógrada endoscópica (CPRE), arteriografía, marcadores tumorales séricos, resonancia magnética y más recientemente, la biopsia usando una aguja fina dirigida mediante ecografía o TAC. El 95% de los tumores malignos del páncreas son adenocarcinomas que se derivan de las células epiteliales ductales. Los tumores localizados en la cabeza del páncreas producen obstrucción precoz del conducto biliar principal condicionando ictericia indolora. Los tumores localizados en el cuerpo y la cola presentan a menudo gran crecimiento antes que causen dolor y pérdida de peso. El curso desfavorable de la enfermedad se debe a la ausencia de síntomas en la fase precoz.

The pancreas is a retroperitoneal organ which is closely related to many other abdominal structures including neural and lymphatic systems posteriorly. Pancreatic cancer is usually unresectable at the time of diagnosis, and their overall 5 years survival is less than 3%. A wide range of technique may be needed to detect pancreatic carcinoma. These include ultrasound, compluted tomography, endoscopic retrograde cholangiopancreatography, angiography, numerous serum markers, magnetic resonance imaging and more recently, biopsy using a needle under ultrasound or computed tomography guidance. Ninety five per cent of malignancies arising in the pancreas are adenocarcinomas derived from the ductular epithelial cells. Tumors in the head of the pancreas produce early obstruction of the bile duct leading to painless jaundice. Tumors in the body and tail often grow to a significanty longer size before they cause pain and weight loss. The unfavourable course of illness is due to the symptomless early phase.

Studies on DNA sequencing of K-ras-2 Gene in patients with liver and pancreas cancer

Point mutations in K-ras-2 gene were detected either in primary liver or pancreas cancer patients using polymerase chain reaction followed by polyacrylamide DNA sequencing determination analysis. The frequencies of point mutations which found liver tumors were mainly due to adenine base insertion, whereas in pancreatic tumors cytosine insertion type was found to be abundant. Both types of tumors showed guanine deletion of K-ras-2 mutations. This work shed light on the possibility of using point mutations in K-ras-2 gene as a useful approach for differential diagnosis of cancers