Freezing goat embryos at different developmental stages and quality using ethylene glycol and a slow cooling rate / Congelação de embriões caprinos em diferentes estádios de desenvolvimento e qualidade utilizando etileno glicol e taxa de resfriamento lenta

The efficiency of an alternative freezing protocol for goat embryos of different morphology and quality was tested. Fifty-eight embryos on Day 6-7 stage were transferred as fresh or after freeze-thawing (n=29/group). For freezing, embryos were placed into 1.5M ethylene-glycol solution for 10min. During this time, they were loaded in the central part of 0.25mL straw, separated by air bubble from columns containing PBS/BSA 0.4% plus 20% BFS. Straws were then frozen using a freezing machine from 20ºC to -6ºC at a cooling rate of 3ºC/min, stabilization for 15min (seeding after 5min), from -6 C to -32ºC at 0.6 C/min,and plunged into liquid nitrogen. Frozen embryos were thawed for 30s at 37ºC in a water bath. Embryos subjected to fresh transfer were maintained in holding medium (37ºC). Fresh and frozen-thawed embryos were transferred at day 7 post-estrus to 30 recipients. Kidding and kid born rates were similar (P> 0.05), respectively, for recipients receiving fresh (66.7% or 10/15; 55.2% or 16/29) or frozen-thawed (60% or 9/15; 51.7% or 15/29) embryos. The cryopreservation of goat embryos using slow-freezing protocol and 1.5MEG resulted in similar efficiency rates of fresh embryos.(AU)

Este estudo testou a eficiência de protocolo alternativo de criopreservação de embriões caprinos de diferentes qualidades morfológicas. Foram utilizados 58 embriões, coletados entre o sexto e o sétimo dia do ciclo estral (n=29/grupo). Embriões congelados passaram por solução 1,5M etilenoglicol por 10min e foram aspirados durante esse tempo para parte central de palheta 0,25mL, separada por bolhas de ar de colunas contendo PBS 0,4% BSA e 20% SFB. As palhetas foram congeladas em máquina de congelação de 20ºC a -6ºC, com taxa de resfriamento de 3ºC/min, estabilização por 15min (seeding após 5min), -6ºC a -32ºC a 0,6ºC/min, e imersas em nitrogênio líquido. Os embriões foram descongelados por 30s a 37ºC, em água. Embriões frescos foram mantidos em solução de manutenção (37ºC). Embriões frescos e congelados/descongelados foram transferidos para 30 receptoras no sétimo dia do ciclo estral. A taxa de partos e a de crias nascidas (respectivamente) foram similares (P>0,05) para receptoras recebendo embriões frescos (66,7% ou 10/15; 55,2% ou 16/29) ou congelados/descongelados (60,0% ou 9/15; 51,7% ou 15/29). O protocolo de criopreservação de embriões utilizado no presente estudo resultou em índices de eficiência semelhantes aos de embriões frescos.(AU)

Utilização de diferentes volumes de sêmen na realização do teste hiposmótico em touros adultos da raça nelore / Use of different semen volumes in hypoosmotic test of adult nelore bulls / El uso de diferentes volúmenes de semen en el test hiposmótico en toros adultos de la raza nelore

O objetivo deste estudo foi avaliar diferentes proporções de sêmen: solução hiposmótica na realização do teste hiposmótico e suas relações com a congelabilidade do sêmen de touros zebuínos. Utilizaram-se 15 ejaculados de três touros adultos da raça Nelore. No sêmen in natura realizou-se a avaliação física e morfológica, a coloração supravital e o teste hiposmótico. No teste hiposmótico foi utilizada uma solução com osmolaridade de 100 mOsm/Kg com 15 minutos de período de incubação a 37 ºC, tanto no sêmen in natura quanto no congelado/descongelado. Foram utilizados quatro volumes de sêmen em 1mL de solução hiposmótica: 10, 20, 50 e 100 µL. As amostras criopreservadas foram descongeladas e foram realizados os testes hiposmótico, coloração supravital, teste de termo-resistência lento e a coloração fluorescente. Os valores médios e desvios padrão do percentual de espermatozoides reativos ao teste hiposmótico em sêmen in natura e congelado/descongelado foram 69,3 ± 11,8 e 20,5 ± 6,8; respectivamente. Não houve correlação do teste hiposmótico com os aspectos físicos e morfológicos e os testes complementares realizados em sêmen in natura e congelado/descongelado. Nenhum teste de integridade de membrana plasmática dos espermatozoides foi capaz de classificar os touros quanto a sua congelabilidade do sêmen. Conclui-se que o teste hiposmótico pode ser realizado com 20 a 100 µL de sêmen in natura, e 10 a 100 µL de sêmen congelado/descongelado em 1 mL de solução hiposmótica, sem interferir em seus resultados, mas deve-se optar por 100 µL tanto para sêmen in natura e congelado/descongelado, porque melhora consideravelmente a leitura das lâminas.(AU)

The objective of this study was to evaluate different proportions of semen: hypoosmotic solution in the hypoosmotic swelling test and their relationship with semen freezability in Zebu bulls. A total of 15 ejaculates from three adult Nelore bulls were used. Physical and morphological features were analyzed in fresh semen, as well as supravital staining and hypoosmotic swelling test. In the hypoosmotic test, a hypoosmotic solution with 100 mOsm/kg osmolality using 15 minutes incubation at 37 °C was used both in fresh and frozen/thawed semen. Four semen volumes in 1-ml hyposmotic solution were used: 10, 20, 50 and 100 µL. Cryopreserved samples were thawed and submitted to hypoosmotic tests, supravital staining, slow thermo-resistance test and fluorescent staining. Mean values and standard deviations of the percentage of reactive sperm cells in the hypoosmotic test in fresh and frozen/thawed semen were 69.3 ± 11.8 and 20.5 ± 6.8, respectively. There was no correlation between the hypoosmotic test and physical and morphological features and the complementary tests performed on fresh and frozen/thawed semen. None of the plasma membrane integrity tests was able to predict bull semen freezability. It can be concluded that the hypoosmotic test can be performed with 20 to 100 µL fresh semen, and 10 to 100 µL of frozen/thawed semen in 1 mL of hypoosmotic solution without interfering with their results, but 100 µL should be used in both, because it considerably improves the view of the slides.(AU)

El objetivo de este estudio ha sido evaluar diferentes proporciones de semen: solución hiposmótica en la realización del test hiposmótico y sus relaciones con la congelabilidad del semen de toros cebú. Se utilizaron 15 eyaculados de tres toros adultos de la raza Nelore. En el semen fresco se realizó evaluación física y morfológica, la tinción supravital y test hiposmótico. En el test hiposmótico se ha utilizado una solución con osmolaridad de 100 mOsm/kg con un período de incubación de 15 minutos a 37 ºC, tanto en el semen fresco cuanto en el congelado/descongelado. Fueron utilizados cuatro volúmenes de 1 mL de solución hiposmótica: 10, 20, 50, y 100 µL. Las muestras criopreservadas fueron descongeladas y realizados los tests hiposmótico, tinción supravital, test de resistencia al fuego lento y la tinción fluorescente. Los valores medios y desvío estándar del porcentaje de espermatozoides reactivos al test hiposmótico en l semen fresco y congelado/descongelado fueron 69,3 ± 11,8 y 20,5 ± 6,8; respectivamente. No hubo correlación del test hiposmótico con las características físicas y morfológicas y pruebas adicionales en el semen fresco y congelado/descongelado. Ningún test de integridad de la membrana plasmática de los espermatozoides han sido capaz de clasificar a los toros cuanto su congelabilidad del semen. Se puede concluir que el test hiposmótico puede ser realizado con 20 a 100 µL de semen fresco, y de 10 a 100 µL de semen congelado/descongelado en 1 mL de solución hiposmótica, sin interferir en sus resultados, pero se debe optar por 100 µL para el semen fresco y congelado/descongelado, porque mejora significativamente la lectura de las láminas.(AU)

Efeito da radiação vermelha de baixa intensidade sobre o sêmen canino criopreservado / Effect of low intensity red light on the canine semen cryopreservation

O objetivo geral deste trabalho foi analisar o efeito da radiação vermelha de baixa intensidade sobre alguns parâmetros cinéticos do espermatozoide canino criopreservado. Ejaculados de oito cães adultos foram centrifugados, rediluídos em meio tris-gema de ovo com 6% de glicerol, e, posteriormente, fracionados em: T1: incidência de radiação vermelha (660 NM) (Fisioled - Mmoptics - 100mW) por 60 segundos, antes do resfriamento e após a descongelação; T2: incidência somente antes do resfriamento; T3: incidência somente após a descongelação; e T4: sem incidência. Após a descongelação, as amostras foram submetidas ao TTR utilizando-se Sperm Class Analyzer(r). No TTR0, TTR60 e TTR90, não houve diferença entre as variáveis analisadas pelo CASA. Somente no TTR30 os efeitos da incidência da radiação vermelha foram evidentes e significativos em T1 e T2; T1 resultou em baixa MT (12,5 + 10,6%) e T2 determinou o melhor resultado de MT 40,3 + 26,1%. De forma similar T1 apresentou maior número de espermatozoides estáticos (77,5±28,9%) em relação ao T2 (50,6±28%). Concluiu-se que a dupla incidência de radiação vermelha de baixa intensidade antes do resfriamento e após a descongelação teve efeito deletério sobre a motilidade do espermatozoide canino, expressa principalmente aos 30 minutos após descongelação.

The aim of this study was to analyze the effect of low intensity red light on some kinetic parameters of cryopreserved canine sperm. Ejaculates from 08 adult dogs were centrifuged, diluted in Tris-egg yolk with 6% glycerol, and subsequently separated into: T1: incidence of red light (660 nm) (Fisioled -MMOptics - 100mW) for 60 seconds before the cooling and after thawing, T2: just before cooling, T3: only after thawing, and T4: no incidence. After thawing the samples were subjected to TTR using Sperm analyzer(r). In TTR0, TTR60 and TTR90 there were no differences between the variables analyzed by CASA. Only in TTR30 the effects of the incidence of red light were visible and significant in T1 and T2. T1 resulted in low MT (12.5 ±10.6%) and T2 determined the best result of MT 26.1%±40.3. Similarly T1 showed a higher number of static spermatozoa (77.5±28.9%) compared to T2 (50.6±28%). We concluded that the double incidence of low intensity red light, before cooling and after thawing, had a deleterious effect on canine sperm motility expressed at 30 minutes after thawing.

Sperm parameters and biochemical components of goat seminal plasma in the rainy and dry seasons in the Brazilian Northeast: the season's influence on the cooling of semen / Caracrterísticas espermáticas e bioquímicas do plasma seminal de caprinos nas estações chuvosa e seca do Nordeste brasileiro: influência da estação no resfriamento do sêmen

The present study aimed to verify the caprine semen characteristics during dry and rainy seasons in the Brazilian Northeast, and the influence of these seasons on cooled semen. Seminal volume, concentration, percentage of motile cells, vigor and spermatic morphology, as well as biochemical profile (fructose, citric acid, P, Ca2+, Mg, total proteins and phospholipase A2 activity) were analyzed. It was observed a reduction (P<0.05) in normal sperm morphology, fructose, citric acid, P, Mg and total protein concentration during the dry season, which did not affect the motility, vigor, volume and sperm concentration. Phospholipase A2 activity was increased during the dry season (P<0.05). The analysis of the semen cooled at 4ºC during 48 hours showed reduction in total motility and vigor sperm during the dry season (P<0.05). Based on these results, we conclude that the best period of year for caprine semen cooling is the rainy season.

Verificou-se as características seminais de caprinos durante a época seca e a chuvosa no Nordeste brasileiro e a influência da época no resfriamento do sêmen. Foram mensurados volume, concentração espermática, porcentagem de espermatozoides móveis, vigor, morfologia espermática e características bioquímicas (frutose, ácido cítrico, fósforo, magnésio, proteínas totais e atividade da fosfolipase A2). Observou-se redução (P<0,05) no número de espermatozóides morfologicamente normais, frutose, ácido cítrico, fósforo, magnésio e proteínas totais durante a época seca que não influenciaram na motilidade, vigor, volume e concentração do sêmen. Entretanto, a atividade da fosfolipase A2 foi maior na época seca. Quando o sêmen foi submetido ao resfriamento a 4ºC durante 48 horas, houve redução (P<0,05) na motilidade total e no vigor espermático durante a época seca. Com base nesses resultados, conclui-se que o período chuvoso é melhor para resfriar sêmen de caprinos no Nordeste brasileiro.

Evaluación del semen canino, sometido a congelación con diferentes concentraciones de glicerol como crioprotector / Evaluation of canine semen that has gone through a freezingand thawing process with different glycerol concentrations as a crioprotector / Avaliação do sêmen canino, sujeito a congelamento com diferentes concentrações de glicerol como crioprotetor

El estudio de las biotecnologías usadas con fines reproductivos en caninos, constituye uno de los principalespuntos de estudio investigativo para el campo de la Medicina Veterinaria y la Zootecnia en los últimos años 28. Conel objetivo de evaluar el efecto de tres diferentes concentraciones de glicerol sobre el semen canino sometido aprocesos de criopreservación, se obtuvieron por medio de manipulación manual, 12 muestras seminales de machos de la raza labrador, clínicamente sanos y sometidos a las mismas condiciones de manejo. Cada muestra se dividió en cuatro tratamientos (T1: control, T2: 4%, T3: 6% y T4: 8% de glicerol); a los cuales se les evaluó el volumen,pH, movilidad, concentración, morfología y vitalidad, respectivamente. Luego en el análisis pos descongelaciónse determinaron las diferencias seminales y se estableció su relación con la concentración del crioprotector. De los resultados obtenidos en este proyecto se encontraron diferencias significativas entre las variables morfología, mortalidad y concentración, igualmente se estableció que los tratamientos T2 (4% de glicerol) y T3 (6% de glicerol) presentaron mejores resultados para la congelación de semen en caninos.

The study of biotechnology used in canines for reproductive purposes, is a of the principal research study points tothe area of Veterinary Medicine in last years28. In the objective to evaluate the effect of three different concentrationsof glycerol on canine semen, to subjected cryo-preservation process, were obtained using manual manipulation, 12semen samples of male Labrador clinically healthy and subject to the same driving conditions. Each sample was divided in four treatments (T1: control, T2: 4%, T3: T4 6% and 8% glycerol), to which they evaluated the volume, pH, motility, concentration, morphology and vitality, respectively. Then in the analysis were determined after thawing seminal differences and its relationship to the concentration of cryoprotectant. From the results obtained in this project are significant differences between the variables morphology, mortality and concentration, also establishedthat T2 (4% glycerol) and T3 (6% glycerol) provide better results for freezing semen canines.

O estudo da biotecnologia utilizada em cães para fins reprodutivos constitui um dos principais pontos de pesquisapara o campo da medicina veterinária e zootecnia nos últimos anos28. Com o objetivo de se avaliar o efeito de trêsdiferentes concentrações de glicerol sobre sêmen canino submetidos a processos crioconservação, foram obtidaspor meio de manipulação manual 12 amostras de sêmen de Labrador macho, clinicamente saudáveis e submetidasàs mesmas condições de manejo. Cada amostra foi dividida em quatro tratamentos (T1: controle, T2: 4%, T3: 6% e T4: 8% de glicerol), os quais foram avaliados quanto ao volume, pH, mobilidade, concentração, morfologia evitalidade, respectivamente. Nas análises pós descongelamento foram determinadas as diferenças entre os semens e se estabeleceu uma relação com a concentração do crioprotetor. A partir dos resultados obtidos neste trabalho foram encontradas diferenças significativas entre a variável morfologia, mortalidade e concentração e também ficou estabelecido que T2 (4% de glicerol) e T3 (6% de glicerol) apresentaram os melhores resultados para o congelamento de sêmen em caninos.

Sperm banking for male cancer patients: social and semen profiles

PURPOSE: Report the characteristics of cryopreserved semen from a cohort of male cancer patients, attitudes towards cryopreservation and outcomes of semen samples based on a 12-year cryopreservation program. MATERIAL AND METHODS: Data from 98 male cancer patients whose sperm samples were banked were evaluated. Demographic parameters, semen characteristics, destination of sperm banked samples and questionnaires answered by the patients regarding cryopreservation time were evaluated. RESULTS: The cancer diagnoses were testicle (56.1 percent), prostate (15.3 percent), Hodgkin’s lymphomas (9.2 percent), non-Hodgkin’s lymphomas (7.1 percent), leukemia (3.1 percent) and other malignancies (9.2 percent). The patients with testicular cancer presented lower sperm concentration (p < 0.001); however, there were no differences with the percentage of normozoospermic patients among cancer type groups (p = 0.185). A shorter time between cancer diagnosis and sperm banking was observed for testicular and prostate cancer patients (p < 0.001). Most of the patients (89.5 percent) favored sperm banking as a fertility preservation method. CONCLUSIONS: Although less than 20 percent of banked sperm samples were disposed of, the majority of patients related sperm banking with safe for fertility preservation. Our results show that all male cancer patients of reproductive age facing cancer treatment could be offered sperm banking.

Agua de coco como soluçäo crioprotetora de espermatozóides humanos / Coconut water as a criopreservant solution for human sperm

A criopreservaçäo de sêmen humano é utilizada há cerca de 50 anos. O crioprotetor universal é o glicerol. A associaçäo de substâncias ricas em açúcares e proteínas melhora a sobrevida dos espermatozóides após o congelamento-descongelamento. Neste trabalho compara-se essa sobrevivência criopreservando-se sêmen, utilizando-se o "Test Yolk Buffer - TYB" (meio que utiliza gema de ovo e citrato), comercialmente utilizado, e glicerol com água de coco. Os resultados de sobrevivência espermática pós-descongelamento näo apresentaram diferenças estatisticamente significantes entre os dois meios. Em conclusäo, a água de coco é um eficiente co-crioprotetor do espermatozóide humano