Avaliação in vitro da fotobiomodulação das SHEDs semeadas em um scaffold de osso bovino mineral desproteinizado e colagenado / In vitro evaluation of photobiomodulation of Stem cells from human exfoliated deciduous teeth seeded in a deproteinized bovine bone mineral with 10% collagen scaffold

RESUMO

A regeneração óssea é um processo importante para oferecer tratamentos reconstrutivos mais rápidos e eficientes, no entanto, limitações técnicas continuam sendo um desafio, assim como a velocidade de formação e maturação óssea. Portanto, as pesquisas têm se voltado para técnicas alternativas na regeneração óssea e atualmente, a engenharia tecidual tem estudado o uso de células tronco para tratamento de perdas ósseas. A eficácia e a taxa de sucesso das diferentes técnicas e scaffolds foram avaliadas. Porém, há pouca informação sobre a eficácia combinada de carreadores xenógenos, células tronco de dentes decíduos esfoliados humano (SHEDs) e a terapia de fotobiomodulação (PBMT) na regeneração de defeitos ósseos. Baseado em estudos prévios, a proposta deste estudo foi avaliar, in vitro, a ação da PBMT, uma técnica com propriedades imunomodulatórias, angiogênicas e com capacidade de aumentar a adesão, proliferação e migração celular ao biomaterial tridimensional de osso bovino mineralizado desproteinizado com colágeno suíno a 10% (OBMDC), semeado com SHEDs, para acelerar e aumentar a taxa de formação óssea. Foi utilizado o laser de diodo, com comprimento de onda de 660nm; 40mW de potência; 3J/cm2 de densidade de energia e 2 segundos de tempo de aplicação após 24h e 72h do plaqueamento. Para avaliar a proliferação, as SHEDs foram descongeladas cultivadas, plaqueadas, semeadas no scaffold de OBMDC e divididas em 8 grupos 1) Controle 15%; 2) Controle 5%; 3) OBMDC 15%; 4) OBMDC 5%; 5) Laser 15%; 6) Laser 5%; 7) OBMDC-L 15%; 8) OBMDC-L 5% e a análise de proliferação foi realizada por MTT. Para avaliar diferenciação celular, as amostras foram divididas em quatro grupos 1) Grupo Controle clonogênico SHEDs cultivadas em meio clonogênico; 2) Grupo Controle mineralizante SHEDs cultivadas em meio mineralizante; 3) Grupo laser clonogênico SHEDs cultivadas em meio clonogênico com aplicação de laser; 4) Grupo laser mineralizante SHEDs cultivada em meio mineralizante com aplicação de laser. Para o grupo laser, as células foram irradiadas no período de 24h e 72h após o plaqueamento e todas as amostras fixadas para análise da formação dos depósitos de cálcio, através do ensaio de vermelho de alizarina após 23 dias de cultivo celular e os dados foram tratados estatisticamente (p0,05). Para avaliar a morfologia celular das SHEDs em todos os grupos, utilizou-se o microscópio invertido de fase em 24h e 72h após o plaqueamento. O grupo OBMDC-L 5% SFB em 72h, demonstrou maior proliferação celular que o grupo Controle (p=0.0286). O grupo laser no meio mineralizante apresentou maior formação de depósito de matriz mineralizada em comparação ao grupo controle em meio clonogênico, controle em meio mineralizante e laser em meio clonogênico (p<0,0001). Considerando as condições experimentais deste estudo, concluiu-se que, in vitro, as SHEDs, semeadas em scaffold OBMDC, proliferaram mais após 2 aplicações de PBMT e houve diferenciação osteogênica das células após 23 dias em meio mineralizante.