Tubersulose: da resistência genômica à isoniazida e à rifampicina ao paciente com multirresistência / Tubersulosis: genomic resistance to isoniazid and rifampicin to patient with multiresistance

RESUMO

A tuberculose (TB) é a principal causa de morte no mundo, por um agente infeccioso único. Atualmente, o maior problema global da TB é o aumento gradual de cepas multirresistentes (resistência pelo menos à isoniazida e à rifampicina) do Mycobacterium tuberculosis (Mtb), pela dificuldade do tratamento que produz. Os dois objetivos iniciais deste trabalho foram 1. Analisar os tipos de mutação que ocorrem em duas regiões iniciais do gene katG do Mtb, locais de maior frequência de mutações que causam resistência à isoniazida (INH) e 2. Determinar os tipos e frequências das mutações no gene rpoB que produzem resistência à rifampicina (RMP). As culturas, na grande maioria multirresistentes (MR), e os respectivos DNAs, foram fornecidos pelo Centre de Referência Professor Helio Fraga (FIOCRUZ). Duas regiões do gene katG, a primeira do códon 1 até o códon 119, e a segunda, do códon 267 até o códon 504, e a região entre os códons 445 e 560 do gene rpoB foram amplificadas por PCR e os produtos sequenciados, para o diagnóstico de mutações, que ocorreram nas cepas resistentes. Para a análise do gene katG foram utilizadas 101 cepas, conforme a disponibilidade. Na região 1 houve 30 casos de mutação, sendo 24 por deleção de um nucleotídeo no códon 4. Na região 2 ocorreram 80 mutações pontuais, sendo 73 no códon 315, a maioria de Serina AGC para Treonina ACC. Considerando as duas regiões o diagnóstico de resistência foi possível em 87,1% das 101 cepas. Na análise do gene rpoB usamos 120 cepas de Mtb e na região delimitada ocorreram 118 mutações em 107 cepas, sendo a maioria nos códons 531 (45.6%), 526 (26%) e 516 (12.5%). Nosso terceiro objetivo foi determinar as características clínicas e a evolução de 50 pacientes do Estado do Rio de Janeiro, com tuberculose pulmonar (pela facilidade de obtenção dos dados), infectados com os bacilos multirresistentes que estudamos anteriormente. A partir das culturas de escarro os doentes foram identificados e os dados clínicos...

ABSTRACT

Tuberculosis (TB) is the main cause of death in the world due to a single infectious pathogenic agent. Nowadays, one of the most serious global problems related to this disease is the increase in the occurrence of multidrug resistant (MDR) M. tubersulosis strains, resistant to isoniazid and rifampicin, and their treatment. Firstly, there are two early aims to objectives in the first part of this thesis 1 - To analyze and compare the types kind of mutations in two different regions of the KatG gene, the usual region for responsible for isoniazid resistance; and 2 - To determine and compare the type and frequency of rpoB gene mutations envolved in the rifampicin resistance. The cultures, almost of all MDR, and their respectively DNA, were provided by Centro de Referência Professor Helio Fraga (FIOCRUZ). Two regions of the katG gene (gene bank U06252), the first going from codon 1 up to codon 119 and the second one, from codon 267 to codon 504, were amplified by PCR, and sequenced to identify the mutations. The analyses were done in 101 Mycobacterium tuberculosis sputum cultures from Centro de Referência Prof. Helio Fraga. To analyse of the KatG gene, were considered 101 TB sputum cultures were considered. Thirty cases had mutations in region 1, being 24 cases by deletions at codon 4. Region 2 showed 80 point mutations, especially at codon 315, where, in 73 cases changed Serine AGC was changed to Threonine ACC. Regarding both regions the diagnosis of resistance occurred in 87.1% of the 101 strains. The analyses of the rpoB gene was done with 120 TB strains, and 118 mutations were detected in 107 isolates, being the majority at codons 531 (45.6%), 526 (26%) and 516 (12.5%). The third aim was to determine the clinical features and evolution of 50 patients with multidrug-resistant Mycobacterium tuberculosis in the lung (TBMDR) from State of Rio de Janeiro. The sputum cultures to MDRTB, clinical data were obtained from Braziliam Ministry of Health MDRTB database...