Efeito do composto ftalimídico LASSBio-468 sobre a fibrose pulmonar induzida por sílica em camundongos / Effect of compound ftalimídico LASSBio-468 on the silica-induced lung fibrosis in mice

RESUMO

A silicose é uma doença ocupacional causada pela inalação de sílica em sua forma livre e cristalina. A inflamação e fibrose pulmonar constituem as principais características da patologia, que envolve uma variedade de mediadores inflamatórios, como o TNF-(alfa), um mediador de ações amplas e que exerce seus efeitos em um grande número de tipos celulares. LASSBio-468 é um análogo da talidomida já descrito como capaz de modular a produção de TNF-(alfa) e inibir o choque endotóxico e artrite reumatóide em modelos animais. Neste estudo, nós investigamos o potencial efeito do LASSBio -468 em modelo de silicose experimental emcamundongos. Animais Swiss-webster machos (18 – 20g) foram instilados intranasalmente com uma suspensão de sílica (10 mg/50 µL) e veículo (salina). O tratamento consistiu na administração por via oral de LASSBio-468 (12,5 – 100 mg/kg) e talidomida (50 mg/Kg) durante 7 dias consecutivos, do vigésimo primeiro ao vigésimo oitavo dia após a instilação de sílica. Foram analisadas a função pulmonar (resistência e elastância) e hiperreatividade das vias aéreas à aerolização de metacolina (3 – 27 mg/mL), através de pletismógrafo invasivo de corpo inteiro (Finepoint, Buxco System), além de análises morfológicas e morfométricas do tecido pulmonar. A produção de colágeno tecidual foi acessada pelo método de sircol, enquanto que a quantificação de citocinas/quimiocinas foi realizada pelo ensaio de ELISA. A técnica de imunohistoquímica permitiu a identificação da população de miofibroblastos no pulmão. Através de uma digestão mecânica e enzimática do tecido pulmonar, obtivemos uma cultura primária de miofibroblastos que, assim como macrófagos alveolares AMJ2C11 e células epiteliais A549, foram pré-tratados com diferentes concentrações de LASSBio-468 e talidomida, estimulados com IL-13 ou sílica e avaliados quanto a proliferação celular, viabilidade e produção de mediadores inflamatórios in vitro. Demonstramos que animais silicóticos apresentaram níveis basais elevados de resistência pulmonar e elastância, bem como hiperreatividade frente à aerolização de metacolina. Resposta inflamatória tecidual, extensiva deposição de colágeno, formação de granuloma e produção de quimiocinas (KC and MCP -1) e citocinas (TNF-(alfa)and TGF-(beta)) também foram detectadas em pulmões de animais silicóticos, assim co mo o aumento do número de miofibroblastos no tecido. O tratamento com LASSBio-468 reduziu o comprometimento da função pulmonar e hiperreatividade, formação de granulomas, expressão de miofibroblastos e deposição de colágeno no tecido pulmonar de animais doentes.Miofibroblastos oriundos de animais silicóticos apresentaram basal de proliferação superior, sendo responsivos também ao estímulo mitogênico da IL-13, que foi atenuado frente ao pré-tratamento com LASSBio-468. A estimulação de macrófagos alveolares e células epiteliais com sílica promoveu a liberação de TNF-(alfa) e IL-8, respectivamente, sendo o LASSBio-468 capaz de inibir de forma significativa esta produção. Em conjunto, nossos resultados mostraram que o tratamento com LASSBio-468 foi capaz de reduzir de forma curativa o comprometimento da função pulmonar e resposta granulomatosa, através de ações sobre células específicas, indicando que o composto em questão parece constituir uma promissora ferramenta para o tratamento de doenças pulmonares fibróticas crônicas como a silicose.