Un prototipo para la electroforesis de campo pulsante. Estandarización de las condiciones para la resolución de grandes moléculas de ADN / A prototype for the pulse field electrophoresis: condition for the resolution of large DNA molecules

RESUMEN

Se desarrolló un prototipo para la electroforesis de campo pulsante en gel de agarosa, que permite separar moléculas de ADN de hasta 2 000 kb. El equipo se fundamenta en la propiedad que tienen las moléculas grandes de ADN, de fraccionarse en geles de agarosa si son sometidas alternadamente a dos campos eléctricos no homogéneos de orientación perpendicular. En los experimentos, los tiempos de pulso fueron 60s, y se estudió la influencia de la fuerza iónica y el tiempo de corrida sobre la resolución de las bandas. El método fue utilizado para obtener el cariotipo electroforético de dos cepas de Saccharomyces cerevisiae. El trabajo describe las distintas partes del equipo, el protocolo electroforético, y la caracterización parcial de algunas bandas mediante hibridización ADN-ADN con sondas específicas para diferentes cromosomas