CRISPR/Cas9-mediated endogenous TCR knockout enhances TCR-T cells targeted killing HPV16-positive cervical cancer cells / 中国肿瘤生物治疗杂志
Chinese Journal of Cancer Biotherapy
; (6): 373-379, 2023.
Article
in Zh
| WPRIM
| ID: wpr-974922
Responsible library:
WPRO
ABSTRACT
@#[摘 要] 目的:基于CRISPR/Cas9基因编辑技术制备无内源TCR的TCR-T细胞并鉴定其在体外杀伤HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞的功能。方法:培养健康志愿者外周血CD8+ T细胞和Jurkat细胞,CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除CD8+ T、Jurkat细胞的TCR基因,制备过表达转基因TCR的重组慢病毒,在敲除内源性TCR的CD8+ T和Jurkat细胞中用慢病毒过表达转基因TCR制备TCR-T细胞,多色FCM检测TCR-T细胞中TCR和CD3的表达水平,荧光素酶活性实验检测TCR-T细胞对HPV16阳性SiHa细胞的杀伤效率。结果:CRIPSR/Cas9基因编辑技术高效地敲除了外周血CD8+ T细胞和Jurkat细胞中的TRAC和TRBC基因,敲除效率分别为(81.4±4.5)%、(98.5±0.07)%,制备的无内源TCR的TCR-T细胞高效表达转基因TCR,在外周血CD8+ T和Jurkat细胞中表达率为(66.0±17.8)%、(97.3±2.6)%,敲除内源TRAC和TRBC基因有效增强CD8+ T和Jurkat细胞膜表达转基因TCR(均P<0.01),敲除内源TCR增强TCR-T细胞特异性杀伤HPV16阳性的SiHa细胞[(71.4±1.0)% vs (35.1±2.0)%,P<0.01)]。结论:无内源TCR的TCR-T细胞显著增强转基因TCR的表达和对HPV16阳性宫颈癌SiHa细胞的靶向杀伤能力,为提高TCR-T细胞的临床疗效提供了实验依据。
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Index:
WPRIM
Language:
Zh
Journal:
Chinese Journal of Cancer Biotherapy
Year:
2023
Type:
Article