Estudo do efeito anti-apoptótico do Mycobacterium leprae em células de Schwann humanas / Study of the antiapoptosic effect of the Mycobacterium leprae in cells of Schwann human beings

RESUMO

A Hanseníase, causada pelo Mycobacterium leprae, apresenta como sintoma clínico mais relevante lesões no sistema nervoso periférico. As estratégias utilizadas pelo M. leprae para infectar e se multiplicar nas células de Schwann (CS) são, contudo, pouco conhecidas. Neste trabalho investigamos a capacidade do M. leprae de proteger a célula hospedeira da morte, à semelhança do observado na literatura com outros patógenos intracelulares. Para tal, CS humanas da linhagem ST88-14 foram infectadas ou não com a bactéria foram tratadas com meio RPMI sem soro para induzir a apoptose e a viabilidade celular foi avaliada por dois métodos: i) capacidade celular de excluir o corante Azul de Tripan e ii) coloração com diacetato de fluoresceína e brometo de etídio. Após 48h de incubação, verificamos que somente 50 por cento das células não infectadas permaneciam viáveis frente a 70 a 100 por cento de proteção observada nas culturas infectadas. M. leprae foi capaz de proteger as CS da morte de maneira dose-dependente (1 a 50 bactérias/célula). A redução de células apoptóticas também foi observada pela marcação celular com DiOC6 através de Citometria de Fluxo. Em outra abordagem de nosso trabalho, demonstramos a participação de NF-kB na proteção de morte de CS pelo M. leprae com a utilização do inibidor SN50, específico para este fator transcricional. Em seguida demonstramos que fatores solúveis secretados pela célula infectada estão envolvidos na proteção, visto que o meio condicionado proveniente de culturas infectadas também promoveu a sobrevivência de CS. Um possível candidato para esta ação protetora da bactéria poderia ser o fator de crescimento semelhante à Insulina-I (IGF-I). Confirmamos, então, a capacidade de M. leprae induzir a expressão de IGF-I em CS através da técnica de RT-PCR. Também demonstramos que IGF-I (50ng/mL) adicionado às culturas foi capaz de proteger as CS ST 88-14 de morte, possivelmente mediado pelo seu receptor (IGF-IR) cuja detecção foi observada ...