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Methods Mol Biol ; 2166: 181-194, 2020.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-32710409

RESUMO

Mobility assays coupled with RNA profiling have revealed the presence of hundreds of full-length non-cell-autonomous messenger RNAs that move through the whole plant via the phloem cell system. Monitoring the movement of these RNA signals can be difficult and time consuming. Here we describe a simple, virus-based system for surveying RNA movement by replacing specific sequences within the viral RNA genome of potato virus X (PVX) that are critical for movement with other sequences that facilitate movement. PVX is a RNA virus dependent on three small proteins that facilitate cell-to-cell transport and a coat protein (CP) required for long-distance spread of PVX. Deletion of the CP blocks movement, whereas replacing the CP with phloem-mobile RNA sequences reinstates mobility. Two experimental models validating this assay system are discussed. One involves the movement of the flowering locus T RNA that regulates floral induction and the second involves movement of StBEL5, a long-distance RNA signal that regulates tuber formation in potato.


Assuntos
Clonagem Molecular/métodos , Floema/genética , Potexvirus/genética , RNA Mensageiro/genética , RNA de Plantas/genética , RNA Viral/genética , Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real/métodos , Transporte Biológico/genética , Proteínas do Capsídeo/genética , Proteínas do Capsídeo/metabolismo , Vetores Genéticos , Técnicas In Vitro , Floema/metabolismo , Vírus de RNA/genética , RNA Mensageiro/metabolismo , RNA de Plantas/metabolismo , Solanum tuberosum/genética , Solanum tuberosum/metabolismo , Nicotiana/genética , Nicotiana/metabolismo , Transcrição Viral/genética
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