Leptospira interrogans shotgun phage display identified LigB as a heparin-binding protein.

LigB is an adhesin from pathogenic Leptospira that is able to bind to extracellular matrix and is considered a virulence factor. A shotgun phage display genomic library was constructed and used for panning against Heparan Sulfate Proteoglycan (HSPG). A phage clone encoding part of LigB protein was selected in panning experiments and showed specific binding to heparin. To validate the selected clone, fragments of LigB were produced as recombinant proteins and showed affinity to heparin and to mammalian cells. Heparin was also able to reduce the binding of rLB-Ct to mammalian cells. Our data suggests that the glycosaminoglycan moiety of the HSPG is responsible for its binding and could mediate the attachment of the recombinant protein rLB-Ct. Thus, heparin may act as a receptor for Leptospira to colonize and to invade the host tissue.

Behavior of Leishmania major metacyclic promastigotes during the course of infection and immune response development in resistant versus susceptible hosts

Pouco se conhece sobre os epítopos derivados de promastigotas metacíclicos de Leishmania que são importantes para a regulação ou destruição do parasita, como alvos de ação imunológica no hospedeiro vertebrado. Neste estudo, nós investigamos um método alternativo para obter promastigotas metacíclicos de Leishmania major, pela avaliação do curso da infecção e reação de hipersensibilidade do tipo retardado (HTR) em hospedeiros resistentes e susceptíveis. Promastigotas não-infectantes (procíclicos) de L. major, recentemente isolados de amastigotas, foram selecionados pela adesão a colunas de lã de vidro negativamente carregadas, enquanto que promastigotas metacíclicos não se aderem à coluna e podem ser recuperados com facilidade. Condições ótimas de cromatografia foram validadas por análise estatística. O rendimento médio de parasitas obtidos após separação em colunas de lã de vidro e a viabilidade dos promastigotas foram estimados por microscopia óptica. Os promastigotas metacíclicos tiveram um rendimento médio de 43,5% a 57,5%. Camundongos BALB/c (susceptíveis) e camundongos C57BL/6 (resistentes) apresentaram padrões distintos de lesões cutâneas, os primeiros com lesões mais agressivas, induzidas por promastigotas metacíclicos. As respostas à reação de HTR foram maiores nos grupos de camundongos C57BL/6, submetidos à infecção com promastigotas metacíclicos. Estes resultados indicam que o novo método poderia ser integrado aos protocolos existentes para estudar a metaciclogênese de parasitas do gênero Leishmania in vivo.

Behavior of Leishmania major metacyclic promastigotes during the course of infection and immune response development in resistant versus susceptible hosts

Little is known on the epitopes derived from metacyclic promastigotes of Leishmania that are important on the regulation or destruction of the parasite, as targets of immune attack in the vertebrate host. In this study we investigated an alternative method to obtain metacyclic promasigotes of Leishmania major, as evaluated by the course of infection and delayed-type hipersensitivity (DTH) in resistant versus susceptible inbred mice. Non-infective (procyclic) promastigotes of L. major recently transformed from tissue amastigotes were attached to a negatively charged glass-wool column, whereas metacyclic promastigotes were not bound to columns and could be easily recovered. Optimal chromatography conditions were validated through statistical analyses. Parasite average yield from glass wool columns and promastigote viability were estimated by light microscopy. Metacyclic promastigotes yielded 43.5% to 57.5%. Different patterns of cutaneous lesions were obtained in BALB/c (susceptible) and C57BL/6 (resistant) mice, the former with highly infective lesions induced by metacyclic promastigotes. DTH responses proved to be higher in groups of C57BL/6 mice which were infected with metacyclic promastigotes. These results indicate that the new method could be integrated with the investigation of metacyclogenesis of Leishmania in vivo.

Pouco se conhece sobre os epítopos derivados de promastigotas metacíclicos de Leishmania que são importantes para a regulação ou destruição do parasita, como alvos de ação imunológica no hospedeiro vertebrado. Neste estudo, nós investigamos um método alternativo para obter promastigotas metacíclicos de Leishmania major, pela avaliação do curso da infecção e reação de hipersensibilidade do tipo retardado (HTR) em hospedeiros resistentes e susceptíveis. Promastigotas não-infectantes (procíclicos) de L. major, recentemente isolados de amastigotas, foram selecionados pela adesão a colunas de lã de vidro negativamente carregadas, enquanto que promastigotas metacíclicos não se aderem à coluna e podem ser recuperados com facilidade. Condições ótimas de cromatografia foram validadas por análise estatística. O rendimento médio de parasitas obtidos após separação em colunas de lã de vidro e a viabilidade dos promastigotas foram estimados por microscopia óptica. Os promastigotas metacíclicos tiveram um rendimento médio de 43,5% a 57,5%. Camundongos BALB/c (susceptíveis) e camundongos C57BL/6 (resistentes) apresentaram padrões distintos de lesões cutâneas, os primeiros com lesões mais agressivas, induzidas por promastigotas metacíclicos. As respostas à reação de HTR foram maiores nos grupos de camundongos C57BL/6, submetidos à infecção com promastigotas metacíclicos. Estes resultados indicam que o novo método poderia ser integrado aos protocolos existentes para estudar a metaciclogênese de parasitas do gênero Leishmania in vivo.