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STAR Protoc ; 5(2): 102936, 2024 Jun 21.
Artículo en Inglés | MEDLINE | ID: mdl-38735042

RESUMEN

GABAergic interneurons are inhibitory neurons of the CNS, playing a fundamental role in neural circuitry and activity. Here, we provide a robust protocol for the successful enrichment of human cerebellar GABAergic interneurons from human induced pluripotent stem cells (iPSCs) and measuring intracellular calcium transients. We describe in detail steps for culturing iPSCs; generating embryoid bodies; and differentiating and enriching for cerebellar GABAergic neurons (cGNs), with precise steps for their molecular characterization. We then detail the procedure for adeno-associated virus-mediated transduction of cGNs with genetically encoded calcium indicators, followed by intracellular calcium imaging and analyses. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to Pilotto et al.1.


Asunto(s)
Calcio , Diferenciación Celular , Cerebelo , Neuronas GABAérgicas , Células Madre Pluripotentes Inducidas , Interneuronas , Células Madre Pluripotentes Inducidas/citología , Células Madre Pluripotentes Inducidas/metabolismo , Humanos , Calcio/metabolismo , Neuronas GABAérgicas/metabolismo , Neuronas GABAérgicas/citología , Interneuronas/metabolismo , Interneuronas/citología , Diferenciación Celular/fisiología , Cerebelo/citología , Cerebelo/metabolismo , Técnicas de Cultivo de Célula/métodos , Células Cultivadas
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