Using capillary electrophoresis sodium dodecyl sulfate (CE-SDS) and liquid chromatograph mass spectrometry (LC-MS) to identify glycosylated heavy chain heterogeneity in the anti-VEGFR-2 monoclonal antibody.

The size variant, which can be measured by capillary electrophoresis sodium dodecyl sulfate (CE-SDS), is a critical quality attribute of monoclonal antibodies (mAbs). The CE-SDS size heterogeneity can hardly be identified by tandem mass spectrometry, which is an intractable obstacle of mAb development and quality control across the industry. We analyzed the purity of an anti-vascular endothelial growth factor receptor 2 (VEGFR-2) mAb, an antagonist of the human VEGFR-2, through reduced CE-SDS and observed glycosylated heavy chain heterogeneity. The heterogeneity has potential impact on safety, efficacy, and stability of drugs for clinical use. Therefore, it should be characterized so as to evaluate its potential risk. In order to identify the heterogeneity, we used mass spectrometry to confirm that the molecular size heterogeneity was not due to peptide bond cleavage in the heavy chain. Subsequently, we employed mass-spectrometry-glycosylation profiling and CE-SDS analysis of various glycosidase-treated samples, in addition to the preparation of mAb references with different glycoforms. Ultimately, we demonstrated that the heavy chain heterogeneity was induced by different levels of galactosylation modifications which will potentially impact the efficacy of antibody drugs (i.e., complement-dependent cytotoxicity). In this study, potential risk caused by heavy chain size heterogeneity was evaluated, which addressed the obstacle of mAb development and quality control. Therefore, this study offers a feasible approach for the investigation and identification of heavy chain heterogeneity in reduced CE-SDS, providing a novel strategy for mAb quality control and evaluation.

Serie de 618 casos de gammapatías monoclonales de significado indeterminado (GMSI): factores predictivos de desaparición del componente monoclonal o de evolución a gammapatías malignas / A series of 618 of monoclonal gammopathy of undeterminated significance: variables asocciated with disappearance and progression

Introducción. La identificación de las gammapatíasmonoclonales de significado incierto (GMSI) conriesgo elevado de progresión se viene estudiandoen los últimos años.Objetivos. Evaluar la incidencia de las GMSI enun área de 300.000 habitantes y sus factoresasociados: la desaparición del componentemonoclonal (CM), gammapatías transitorias (GMT) ysu evolución a gammapatías malignas (GMM).Métodos. Estudio de 618 GMSI.Resultados. Incidencia: 30-40 casos nuevos/año, conun incremento en los últimos años de hasta 70 casospor año. Edad y sexo: 71,4 años (32-100); relaciónH/F 1,4. Patología asociada: infecciosa 328,cardiológica 249, reumatoidea 211, hepática 108,neoplasia 80 y neuropatía 43. Características del CM:IgG 407, IgA 93, IgM 78, IgD 2, biclonales 16,triclonal 1 y ninguna cadena pesada 21. Cadenasligeras: kappa 389 casos. Variables (media): CM 14 g/l, VSG 32,5 mm, MO porcentaje de células plasmáticas 5,9%, ß2-microglobulina 2,59 mg/l, albúmina 3,1 g/l, serie ósea normal 39,5%. Evolución: GMT 20 casos. Tiempo medio de desaparición 2,6meses (1,4-4,6), GM transformadas a GMM 24 casosTiempo medio de progresión 3 años (IC 1,82-4,3).Resultados. Se identifican como factoresasociados a transformación a GMM: cadena pesadaIgA (p < 0,002), VSG (p < 0,001), edad < 70 años(p < 0,05), porcentaje de CP (p < 0,002) yosteoporosis (p < 0,005). Se propone un modelo de seguimiento de GMSI

Introduction. How to identify monoclonalgammopathies of undeterminated significance(MGUS) at risk for progression has been studied forthe last years. Aims. To study the incidence ofMGUS in a region with 300,000 inhabitants andfactors which associate with a) monoclonalgammopathy disappearance (transient MGUS)b) evolution to malignant gammopathy.Methods. Study of 618 MGUS.Results. Incidence: 30/40 new cases a year withincrease to 70 cases a years in the latest years ofstudy. Age and gender: 71,4 y (32-100),male/female ratio 1.4. Associated pathology:infection 328, heart diseases 249, rheumaticdiseases 211, liver diseases 108, cancer 80,neuropathy 43. Monoclonal proteins: IgG 407,IgM 78, IgD 2, biclonal 16, triclonal 1; no heavychain 21, light chain Kappa 389. Variables (mean):monoclonal component: 14 g/l, ESR 32,5, bonemarrow: 5,9% plasma cells ß2-microglobulin: 2,59 mg/l, albumin: 3,1g/l, bone survey: normal 39,5%. Evolution: transient MGUS 20 cases. Time to disappearance 2,6 months (1,4-4,6). Evolution to malignant gammopathy 24 cases, time to progression 3 years (IC 1,82-4,3).Results. Several factors were associatedçwith malignant transformation: heavy chain IgA (p < 0,002), ESR (p < 0,001), age < 70 (p < 0,05), bone marrow percentage of plasma cells (p < 0,002) y ostheoporosis (p < 0,005). A MGUS follow up model is suggested

Characterization of plasma cell subsets in thyroid disease

La glándula tiroides puede presentar patologías que desde el punto de vista histológico muestran diferentes grados de infiltración linfocitaria y plasmocitaria. Con el fin de identificar los subtipos de células plasmáticas en algunas patologías tiroideas nosotros hemos realizado un estudio inmunohistoquímico sobre la presencia de cadenas pesadas (IgG, IgA, IgM) y livianas (K y L) que se pueden encontrar en el citoplasma de las células plasmáticas. En las tiroiditis de Hashimoto estudiadas se encontró un predominio de células plasmáticas conteniendo IgG y kappa. El estroma linoplasmocitario que a veces acompaña al carcinoma papilar de tiroides también mostró una mayor frecuencia de células plasmáticas con IgG, aunque lambda fue la cadena liviana predominante en este caso. Por otro lado, las tiroiditis de Riedel mostraron un mayor predominio de IgA y lambda. Los 6 casos de fibrosis retroperitoneal, enfermedad a veces asociada con tiroiditis de Riedel, mostraron en conjunto una distribución de subtipos de células plasmáticas similar a la observada en las tiroiditis de Riedel aunque la frecuencia de células con IgA fue menos marcada. Estos resultados sugieren que la desigual distribución de inmunoglobulinas citoplasmáticas en estas entidades estudiadas puede estar relacionada con la presencia de diferentes antígenos involucrados en el proceso patogénico que trae aparejado el infiltrado linfoplasmocitario