Identificación rápida de Histoplasma capsulatum en lisados de cultivo / Rapid identification of Histoplasma capsulatum in culture lysates

RESUMEN

Antecedentes. Histoplasma capsulatum es el agente causal de la histoplasmosis, micosis asociada principalmente a pacientes inmunocomprometidos. La rápida identificación del hongo a partir del cultivo permite el tratamiento temprano. Objetivo. Evaluar un sistema de PCR para dos dianas específicas de H. capsulatum en lisados acuosos de cultivos. Métodos. Se utilizaron dos técnicas de PCR previamente descritas que, en reacciones independientes, amplifican fragmentos específicos de 111 y 279 pb del gen AgM de H. capsulatum. Se analizaron 248 cepas de H. capsulatum y 68 de otras especies fúngicas.Para la amplificación se partió de un lisado acuoso (que contenía el ADN), obtenido por tres ciclos de hervido/enfriamiento rápido a 0°C. En casos particulares se obtuvo ADN purificado y/o se secuenció el producto la amplificación. Resultados. Las técnicas de PCR amplificaron las dos bandas a partir del lisado acuoso de 239 cepas de H. capsulatum; las 9 restantes sólo mostraron bandas de amplificación a partir de ADN purificado. No se observó amplificación específica a partir de lisado acuoso ni de ADN purificado de 66 cepas de especies distintas de H. capsulatum. Dos cepas de Emmonsia crescens presentaron ambas bandas de amplificación cuyas secuencias resultaron tener una homología superior al 97% con secuencias de H. capsulatum. El tiempo total de la prueba no superó las 7h con un 96% de sensibilidad, 97% de especificidad y un valor predictivo positivo de 99%. Conclusiones. El método es rápido, económico y puede ser utilizado como una alternativa para identificar presuntivamente H. capsulatum en lisados de cultivo sin purificar(AU)