Morphological Characteristics of the Results of Experimental Modeling of Septic Peritonitis

SUMMARY: Experimental studies devoted to the study of the mechanisms of the pathogenesis of acute peritonitis and the development of new methods of medical and surgical treatment are becoming increasingly relevant. Today, experimental medicine knows many different ways to modeling septic peritonitis and eliminate it, but the role of the local immune system is underestimated, whereas it takes a direct part in inflammation. The objective of our work to study morphological features of results of experimental modeling of septic peritonitis in white rats. The study included 15 sexually mature white male rats weighing 276.75±6.56 grams. A simulation of septic peritonitis was performed by perforating the upper part of the cecum with four punctures with a G16 injection needle. As a result of the experiment, after examination of the peritoneal cavity, all 15 animals were diagnosed with omentum tamponade of perforated damage to the caecum. In 11 cases, the perforated wall of the caecum was covered by the greater omentum (73.34 %), and in the other 4 animals, tamponade was performed by one of the epididymal omentum (26.66 %). The initial stage of tamponade with the greater or epididymal omentums of a perforated caecum begins on the first day of the experiment and consists of tight interstitial consolidation between them, as well as in the invasion of blood vessels from the omentum side to the focus of infection, which ensure the delivery of the appropriate immunocompetent cells. As a result of this process, intensive lymphoid infiltrates are formed in this area, as well as the growth of adipose tissue, which isolates the inflammatory focus from the peritoneal cavity with a thick layer.

Las investigaciones experimentales dedicadas al estudio de los mecanismos de patogénesis de la peritonitis aguda y el desarrollo de nuevos métodos de tratamiento médico y quirúrgico son cada vez más relevantes. Hoy en día, la medicina experimental conoce muchas formas diferentes de modelar la peritonitis séptica y eliminarla, pero se subestima el papel del sistema inmunológico local, mientras que él participa directamente en la inflamación. El objetivo de nuestro trabajo fue estudiar las características morfológicas de los resultados del modelado experimental de peritonitis séptica en ratas blancas. El estudio incluyó 15 ratas macho blancas, sexualmente maduras que pesaban 276,75 ± 6,56 gramos. Se realizó una simulación de peritonitis séptica perforando la parte superior del ciego con cuatro punciones con una aguja de inyección G16. Como resultado del experimento, después del examen de la cavidad peritoneal, a los 15 animales se les diagnosticó taponamiento del omento o lesión perforada del ciego. En 11 casos, la pared perforada del ciego fue recubierta por el omento mayor (73,34 %), y en los otros 4 animales el taponamiento se realizó por uno de los epidídimos (26,66 %). La etapa inicial del taponamiento con omento mayor o epidídimo de un ciego perforado comienza el primer día del experimento y consiste en una estrecha consolidación intersticial entre ellos, así como en la invasión de los vasos sanguíneos desde el lado del omento hasta el foco de infección, que aseguran la entrega de las células inmunocompetentes apropiadas. Como resultado de este proceso, se forman intensos infiltrados linfoides en esta zona, así como el crecimiento de tejido adiposo, que aísla el foco inflamatorio de la cavidad peritoneal con una gruesa capa.

Criopreservação de células-tronco mesenquimais do tecido adiposo: Uma alternativa para lipoenxertia seriada na reconstrução mamária / Cryopreservation of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells: An alternative to serial fat grafting in breast reconstruction

Introdução: A lipoenxertia é um enxerto autólogo de células do tecido celular subcutâneo, que pode ser utilizada como técnica complementar na reconstrução mamária. Diante disso, a criopreservação de células-tronco mesenquimais provenientes de tecido adiposo (CTDAs) poderia ser uma maneira de realizar a coleta em um tempo cirúrgico e após realizar a lipoenxertia de forma fracionada. O dimetilsulfóxido (DMSO) é um criopreservante utilizado em pesquisas com células, porém é potencialmente tóxico, o que impossibilitaria a utilização de CTDAs criopreservadas na prática clínica. Novos criopreservantes celulares, sem toxicidade, vêm sendo descritos na literatura científica experimental, como as substâncias L-prolina e trealose. Com isso, esse trabalho teve como objetivo avaliar a viabilidade de CTDAs criopreservadas com a combinação de L-prolina e trealose, em um período de até 90 dias. Método: Estudo experimental, no qual foram obtidas amostras de lipoaspirado provenientes de 9 pacientes. A fração celular foi processada e congelada com L-prolina (1,5M) + trealose (0,2M), ou com DMSO + soro fetal bovino (SFB), como controle. Após 30 e 90 dias, as amostras foram descongeladas e a viabilidade celular foi avaliada pela técnica de MTT. Resultados: A análise das CTDAs, após 1 e 3 meses de congelamento, indicou que as amostras tratadas com L-prolina + trealose apresentaram viabilidade semelhante àquelas preservadas com DMSO e SFB (p=0,444). Conclusão: A associação de L-prolina e trealose manteve CTDA viáveis por 30 e 90 dias de congelamento, podendo ser uma alternativa como criopreservante celular sem toxicidade e viabilizando o uso de lipoenxertia seriada.

Introduction: Fat grafting is an autologous graft of cells from subcutaneous tissue, which can be used as a complementary technique in breast reconstruction. Given this, the cryopreservation of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (ADMSCs) could be a way to collect them in one surgical procedure and after performing fractional fat grafting. Dimethyl sulfoxide (DMSO) is a cryopreservative used in cell research, but it is potentially toxic, which would make it impossible to use cryopreserved ADMSCs in clinical practice. New cellular cryopreservatives, without toxicity, have been described in the experimental scientific literature, such as the substances L-proline and trehalose. Therefore, this work aimed to evaluate the viability of ADMSCs cryopreserved with the combination of L-proline and trehalose over up to 90 days. Method: Experimental study in which lipoaspirate samples were obtained from 9 patients. The cellular fraction was processed and frozen with L-proline (1.5M) + trehalose (0.2M) or with DMSO + fetal bovine serum (FBS) as control. After 30 and 90 days, the samples were thawed, and cell viability was assessed using the MTT technique. Results: The analysis of ADMSCs, after 1 and 3 months of freezing, indicated that samples treated with L-proline + trehalose showed similar viability to those preserved with DMSO and SFB (p=0.444). Conclusion: The association of L-proline and trehalose kept ADMSC viable for 30 and 90 days of freezing, and could be an alternative as a cellular cryopreservative without toxicity and enabling the use of serial fat grafting.

High fat diet- induced obesity decreases ErbB receptors expression in liver and adipose tissue in C57BL/6 mice

Neuregulins (NRGs) are a family of signaling proteins that bind to receptor tyrosine kinases of the ErbB family (ErbB2 to ErbB4), which can homo- or heterodimerize depending on their structural features and cell type. Many studies have proposed that decreased NRG levels are a common characteristic of obesity. In liver and adipose tissue, the increase in NRG expression has protective effects against obesity. However, it is still unknown whether ErbBs expression is altered in this pathology. We hypothesized that high fat diet-induced obesity downregulates ErbB receptors expression in obese mice compared to normal weight mice. Males C57BL/6 mice (n=6-7 for each group) were fed for 12 weeks and divided into: (i) control diet (CD; 10%-kcal fat, 20%-kcal protein, 70%-kcal carbohydrates), and (ii) high fat diet (HFD; 60%-kcal fat, 20%-kcal protein, 20%-kcal carbohydrates). General parameters and ErbBs expression (qPCR, immunohistochemistry and Western blot) were evaluated. We observed a significant increase in final body weight (47%), adipose tissue to body weight ratio (244%) and HOMA-IR (69%), among other parameters, in obese mice. In HFD group significantly decreased ErbB2 (48%) and ErbB3 (66%) mRNA levels in liver (no change in ErbB4), and ErbB2 (43%), ErbB3 (76%) and ErbB4 (35%) in adipose tissue, compared to CD. Furthermore, ErbB2 and ErbB3 protein levels decreased significantly in HFD group compared to the CD in liver. Therefore, our results suggest that HFD-induced obesity significantly decreases ErbBs expression in liver and adipose tissue in this murine model, that may be associated with alterations in the NRG pathway in obese mice.

Las neuregulinas (NRGs) son una familia de proteínas de señalización que se unen a receptores tirosina quinasas de la familia ErbB (ErbB2 a ErbB4), que pueden homo- o heterodimerizar dependiendo de sus características estructurales y del tipo celular. Estudios han propuesto que la disminución de los niveles de NRG es una característica común de la obesidad. En el hígado y el tejido adiposo (TA), el aumento de la expresión de NRG tiene efectos protectores contra la obesidad. Sin embargo, aún se desconoce si la expresión de ErbBs está alterada en esta patología. Nuestra hipótesis es que la obesidad inducida por una dieta alta en grasas (DAG) disminuye la expresión de los ErbB en ratones obesos. Ratones machos C57BL/6 (n=6-7 para c/grupo) fueron alimentados durante 12 semanas y divididos en: (i) dieta control (DC; 10%-kcal grasa, 20%-kcal proteína, 70%-kcal carbohidratos), y (ii) DAG (60%-kcal grasa, 20%-kcal proteína, 20%-kcal carbohidratos). Se evaluaron los parámetros generales y la expresión de ErbBs (qPCR, inmunohistoquímica y Western blot). Observamos un aumento significativo del peso corporal final (47%), de la relación tejido adiposo/peso corporal (244%) y del HOMA-IR (69%), entre otros parámetros, en ratones obesos. En este grupo disminuyó significativamente los niveles de ARNm de ErbB2 (48%) y ErbB3 (66%) en el hígado (sin cambios en ErbB4), y de ErbB2 (43%), ErbB3 (76%) y ErbB4 (35%) en el TA. Además, los niveles de proteína ErbB2 y ErbB3 disminuyeron significativamente, en comparación con el grupo DC en el hígado. Nuestros resultados sugieren que la obesidad inducida por DAG disminuye significativamente la expresión de ErbBs en el hígado y el TA, que puede estar asociado con alteraciones en la vía NRG en ratones obesos.

Tratamiento con metformina previene la adiposidad de la médula ósea femoral inducida por un síndrome metabólico experimental en ratas / Metformin treatment prevents experimental metabolic syndrome-induced femoral bone marrow adiposity in rats

RESUMEN Objetivo. Determinar el efecto de un tratamiento con metformina (MET) sobre la predisposición adipogénica de células progenitoras de médula ósea (CPMO), adiposidad de la médula ósea y propiedades biomecánicas óseas. Materiales y métodos. 20 ratas Wistar machos adultos jóvenes fueron separados en cuatro grupos, recibiendo en agua de bebida: 100% agua (C); 20% de fructosa (F); metformina 100 mg/kg peso/día (M); o fructosa más metformina (FM). Tras cinco semanas se sacrificaron los animales, se diseccionaron ambos húmeros para obtener CPMO, y ambos fémures para evaluar adiposidad medular (histomorfometría) y propiedades biomecánicas (flexión a 3 puntos). Las CPMO se cultivaron in vitro en medio adipogénico para evaluar expresión de RUNX2, PPAR-γ y RAGE por RT-PCR, actividad de lipasa y acumulación de triglicéridos. Resultados. La dieta rica en fructosa (grupo F) produjo un aumento tanto de triglicéridos in vitro, como de la adiposidad medular in vivo; siendo parcial o totalmente prevenido por un co-tratamiento con metformina (grupo FM). No se observaron diferencias en las pruebas biomecánicas femorales in vivo, ni en actividad de lipasa y relación RUNX2/PPAR-γ in vitro. La DRF aumentó la expresión de RAGE en CPMO, siendo prevenido por co-tratamiento con MET. Conclusiones. El síndrome metabólico inducido por una dieta rica en fructosa aumenta la adiposidad medular femoral y, en parte, la predisposición adipogénica de las CPMO. A su vez, esto puede ser prevenido total o parcialmente por un co-tratamiento oral con MET.

ABSTRACT Objective. To determine the effect of metformin (MET) treatment on adipogenic predisposition of bone marrow progenitor cells (BMPC), bone marrow adiposity and bone biomechanical properties. Materials and methods. 20 young adult male Wistar rats were sorted into four groups. Each of the groups received the following in drinking water: 100% water (C); 20% fructose (F); metformin 100 mg/kg wt/day (M); or fructose plus metformin (FM). After five weeks the animals were sacrificed. Both humeri were dissected to obtain BMPC, and both femurs were dissected to evaluate medullary adiposity (histomorphometry) and biomechanical properties (3-point bending). BMPC were cultured in vitro in adipogenic medium to evaluate RUNX2, PPAR-γ and RAGE expression by RT-PCR, lipase activity and triglyceride accumulation. Results. The fructose-rich diet (group F) caused an increase in both triglycerides in vitro, and medullary adiposity in vivo; being partially or totally prevented by co-treatment with metformin (group FM). No differences were found in femoral biomechanical tests in vivo, nor in lipase activity and RUNX2/PPAR-γ ratio in vitro. DRF increased RAGE expression in BMPC, being prevented by co-treatment with MET. Conclusions. Metabolic syndrome induced by a fructose-rich diet increases femoral medullary adiposity and, in part, the adipogenic predisposition of BMPC. In turn, this can be totally or partially prevented by oral co-treatment with MET.

Adipocytes-derived exosomal miR-122 promotes non-alcoholic fat liver disease progression via targeting Sirt1 / El miR-122 exosomal derivado de los adipocitos promueve la progresión de la enfermedad hepática por grasa no alcohólica a través de la focalización de Sirt1

Aims: Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) is a chronic liver disease that affects adipose function. This study aimed to explore the function of adipocytes-derived exosomal (ADEs) miR-122 in NAFLD. Methods: A high-fat and high-fructose diet-induced rat model and a palmitic acid (PA)-induced in vitro model were established. The RNA level of miR-122 and Sirt1 was measured using qRT-PCR. The protein levels of exosome biomarkers, and lipogenesis, inflammation and fibrosis biomarkers were determined by western blotting. Cell viability and apoptosis were assessed using cell counting kit-8 and flow cytometry, respectively. Serum alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, total cholesterol, triglyceride levels were measured. Liver tissue damage was assessed using haematoxylin and eosin staining. The interaction between miR-122 and Sirt1 3′UTR was assessed using a luciferase reporter gene assay. Results: ADEs exhibited abundant level of miR-122 and promoted lipogenesis, impaired hepatocyte survival, enhanced liver damage and increased serum lipid levels in vivo and in vitro. Inhibition of miR-122 in ADEs alleviated NAFLD progression, lipid and glucose metabolism, liver inflammation and fibrosis both in vivo and in vitro. miR-122 binds directly to the 3′UTR of Sirt1 to suppress its expression. Moreover, Sirt1 overexpression reversed the increase in cell apoptosis, glucose and lipid metabolism, liver inflammation and fibrosis induced by ADEs in vivo and in vitro. Conclusions: The ADEs miR-122 promotes the progression of NAFLD via modulating Sirt1 signalling in vivo and in vitro. The ADEs miR-122 may be a promising diagnostic biomarker and therapeutic target for NAFLD.(AU)

Objetivos: La enfermedad del hígado graso no alcohólico (EHGNA) es una enfermedad hepática crónica que afecta a la función adiposa. Este estudio tiene como objetivo explorar la función de los exosomas derivados de los adipocitos (ADEs) miR-122 en la EHGNA. Métodos: Se estableció un modelo de rata inducido por una dieta alta en grasas y fructosa y un modelo in vitro inducido por ácido palmítico (AP). Se midió el nivel de ARN de miR-122 y Sirt1 mediante qRT-PCR. Los niveles de proteína de los biomarcadores de exosomas y los biomarcadores de lipogénesis, inflamación y fibrosis se determinaron mediante western blotting. La viabilidad celular y la apoptosis se evaluaron mediante el kit de recuento de células-8 y la citometría de flujo, respectivamente. Se midieron los niveles séricos de alanina aminotransferasa, aspartato aminotransferasa, colesterol total y triglicéridos. El daño tisular del hígado se evaluó mediante tinción con hematoxilina y eosina. La interacción entre miR-122 y Sirt1 3’UTR se evaluó mediante un ensayo de gen reportero de luciferasa. Resultados: Los ADEs mostraron un nivel abundante de miR-122 y promovieron la lipogénesis, perjudicaron la supervivencia de los hepatocitos, potenciaron el daño hepático y aumentaron los niveles de lípidos séricos in vivo e in vitro. La inhibición de miR-122 en los ADEs alivió la progresión de la EHGNA, el metabolismo de los lípidos y la glucosa, la inflamación del hígado y la fibrosis tanto in vivo como in vitro. miR-122 se une directamente a la 3’UTR de Sirt1 para suprimir su expresión. Además, la sobreexpresión de Sirt1 revirtió el aumento de la apoptosis celular, el metabolismo de la glucosa y los lípidos, la inflamación del hígado y la fibrosis inducida por los ADEs in vivo e in vitro. Conclusiones: El ADEs miR-122 promueve la progresión de la EHGNA a través de la modulación de la señalización de Sirt1 in vivo e in vitro...(AU)

Efecto de vesículas extracelulares derivadas de células madre mesenquimales humanas precondicionadas en hipoxia sobre la osteoblastogénesis y la adipogénesis in vitro / Effect of stem cell-derived extracellular vesicles human mesenchymal cells preconditioned in hypoxia on osteoblastogenesis and adipogenesis in vitro

Objetivos: las células madre mesenquimales (MSC) se caracterizan por su actividad antiinflamatoria, inmunosupresora y sucapacidad de diferenciación. Esto las convierten en una interesante herramienta terapéutica en terapia celular y medicinaregenerativa. En parte, el efecto terapéutico de las MSC, está mediado por la secreción de vesículas extracelulares (EV). Elprecondicionamiento en hipoxia de las MSC puede mejorar la capacidad regenerativa de las EV secretadas. En este con-texto, el objetivo del estudio ha sido evaluar si EV derivadas de MSC humanas cultivadas en hipoxia y normoxia afectan ala osteoblastogénesis y adipogénesis de las MSC.Material y métodos: se aislaron EV de MSC mantenidas 48 h en normoxia o hipoxia (3 % O2) mediante ultrafiltración ycromatografía de exclusión por tamaño. Las EV fueron caracterizadas por “Western blot”, microscopía electrónica y análisisde seguimiento de nanopartículas. En cultivos de MSC se evaluó el efecto de las EV sobre la viabilidad por ensayo con MTT,la migración por “Oris assay” y la diferenciación a osteoblastos y adipocitos.Resultados: las EV aumentaron la viabilidad y migración, pero no hubo diferencias entre las derivadas de normoxia ehipoxia. Las EV, principalmente las derivadas de hipoxia, aumentaron la mineralización y la expresión de genes osteoblás-ticos. Sin embargo, no afectaron significativamente a la adipogénesis.Conclusiones: las EV derivadas de MSC en hipoxia no afectan a la adipogénesis, pero tienen una mayor capacidad de inducirla osteoblastogénesis. Por lo tanto, podrían potencialmente ser utilizadas en terapias de regeneración ósea y tratamientosde patologías óseas como la osteoporosis.(AU)

Adipocytes-derived exosomal miR-122 promotes non-alcoholic fat liver disease progression via targeting Sirt1.

AIMS: Nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD) is a chronic liver disease that affects adipose function. This study aimed to explore the function of adipocytes-derived exosomal (ADEs) miR-122 in NAFLD. METHODS: A high-fat and high-fructose diet-induced rat model and a palmitic acid (PA)-induced in vitro model were established. The RNA level of miR-122 and Sirt1 was measured using qRT-PCR. The protein levels of exosome biomarkers, and lipogenesis, inflammation and fibrosis biomarkers were determined by western blotting. Cell viability and apoptosis were assessed using cell counting kit-8 and flow cytometry, respectively. Serum alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, total cholesterol, triglyceride levels were measured. Liver tissue damage was assessed using haematoxylin and eosin staining. The interaction between miR-122 and Sirt1 3'UTR was assessed using a luciferase reporter gene assay. RESULTS: ADEs exhibited abundant level of miR-122 and promoted lipogenesis, impaired hepatocyte survival, enhanced liver damage and increased serum lipid levels in vivo and in vitro. Inhibition of miR-122 in ADEs alleviated NAFLD progression, lipid and glucose metabolism, liver inflammation and fibrosis both in vivo and in vitro. miR-122 binds directly to the 3'UTR of Sirt1 to suppress its expression. Moreover, Sirt1 overexpression reversed the increase in cell apoptosis, glucose and lipid metabolism, liver inflammation and fibrosis induced by ADEs in vivo and in vitro. CONCLUSIONS: The ADEs miR-122 promotes the progression of NAFLD via modulating Sirt1 signalling in vivo and in vitro. The ADEs miR-122 may be a promising diagnostic biomarker and therapeutic target for NAFLD.

Hibernoma, tumor benigno infrecuente / Hibernoma, rare benign tumor

El hibernoma es un tumor limítrofe, benigno de comportamiento agresivo, de tejidos blandos, raro en frecuencia, que se origina a partir de los adipocitos pardos residuales, afectando principalmente a mujeres entre 10 a 20 años. Clínicamente se presenta como tumoración, más frecuente en los muslos, de crecimiento lento, móvil, firme e indolora. En los estudios de imagen, puede resultar difícil realizar un diagnóstico diferencial por su similitud con neoplasias malignas. El tratamiento ideal es la resección quirúrgica con márgenes amplios para evitar cualquier tipo de recurrencia local. Se presenta el caso de un hibernoma típico, manejo y tratamiento quirúrgico realizado.

Hibernoma is a borderline tumor, benign with aggressive behavior, of soft tissues, rare in frequency, which originates from residual brown adipocytes, mainly affecting women between 10 and 20 years of age. Clinically it presents as a slow-growing, mobile, firm and painless tumor, more frequent on the thighs. In imaging studies, it can be difficult to make a differential diagnosis due to its similarity to malignant neoplasms. The ideal treatment is surgical resection with wide margins to avoid any type of local recurrence. The case of a typical hibernoma, management and surgical treatment performed is presented.

Influencia de ácidos grasos en parámetros sanguíneos y adipogénesis. Estudio experimental en pollos eclosionados / Influence of fatty acids on blood parameters and formation of adipocytes at early age

Introducción: La alimentación en la primera infancia influencia la instauración del tejido adiposo y el desarrollo de diversas patologías en la edad adulta. Objetivo: Evaluar la influencia del consumo de tres fuentes de ácidos grasos sobre parámetros sanguíneos y tejido adiposo en pollos recién eclosionados. Materiales y métodos: Se utilizaron 76 pollitos Cobb 500 distribuidos aleatoriamente en cuatro tratamientos, que fueron alimentados durante siete días con una de las cuatro dietas (T1: 97% Dieta basal (DB); T2: DB +3% de manteca vegetal parcialmente hidrogenada; T3: DB +3% de aceite de quinua y T4: DB +3% de aceite de pescado). Al finalizar, se evaluó en sangre glucosa, colesterol, triglicéridos y tamaño de adipocitos del tejido adiposo subcutáneo y visceral. Se aplicó ANOVA considerando 0,05 de significancia y en el caso de variables no distribuidas normalmente, se aplicó el test no paramétrico de Kruskal-Wallis mediante el programa R-Studio. Resultados: Se obtuvieron diferencias significativas con disminución de los niveles de glucosa y colesterol en animales suplementados con elevada proporción de aceites insaturados (T3 y T4) en comparación a T2. Los tratamientos T3 y T4 promovieron una formación hiperplásica de adipocitos, diferenciándose significativamente de T2, que promovió la hipertrofia en dichas células, esta respuesta fue similar en ambos depósitos subcutáneos. Conclusiones: El consumo de aceite de quinua y aceite de pescado promueve la formación de tejido adiposo saludable, y reducen los niveles de glucosa y colesterol. Contrariamente el consumo de manteca vegetal propicia la hipertrofia de adipocitos de gran tamaño e incrementa los parámetros bioquímicos evaluados(AU)

Introduction: Feeding in early childhood influences the establishment of adipose tissue, and therefore also in the development of various pathologies in adulthood. Objective: To evaluate the influence of the consumption of three sources of fatty acids on blood parameters and adipose tissue at an early age. Materials and methods: 76 Cobb 500 chicks randomly distributed in four treatments were used, who were fed for seven days with one of the four diets (T1: Basal diet; T2: DB +1.0% vegetable shortening partially hydrogenated; T3: DB +1.0% quinoa oil and DB +1.0% fish oil) until the seventh day of life. At the end, glucose, cholesterol, triglycerides and adipocyte size of the subcutaneous and visceral adipose tissue were evaluated. A completely randomized design with ANOVA considering 0.05 significance was applied and in the case of non-normally distributed variables, the non-parametric Kruskal-Wallis test was applied using the R-Studio program. Results: Significant differences were obtained with a decrease in glucose and cholesterol levels in animals supplemented with unsaturated oils (T3 and T4) compared to T2. Regarding the size of adipocytes, treatments T3 and T4 promoted a hyperplastic formation of adipocytes, differing significantly from T2, which promoted hypertrophy in these cells, this response was similar in both subcutaneous deposits. Conclusions: The consumption of quinoa oil and fish oil promote the formation of healthy adipose tissue, in addition to reducing glucose and cholesterol levels. In contrast, the consumption of vegetable shortening favors the hypertrophy of large adipocytes and increases the biochemical parameters evaluated(AU)

Inovação em cânula de lipoaspiração para coleta de enxerto de gordura para uso em reconstrução mamária / Innovation in liposuction cannula to harvest fat graft to use in breast reconstruction

Introdução: A evolução da técnica de lipoaspiração e da enxertia de gordura associada a segurança oncológica permitiram utilizar a gordura como preenchedor autólogo em pacientes com neoplasia de mama que eram submetidas a reconstrução mamária. O objetivo é apresentar uma inovação no instrumento de coleta de gordura que será utilizada como enxerto, para uso em reconstrução mamária. Métodos: Foi realizada a busca de anterioridade nos bancos de dados internacionais e nacional e a confecção de um protótipo de cânula de coleta de gordura de 35cm de comprimento, com diâmetro do tubo de 4mm, com 10 furos redondos na sua extremidade distal com 2mm de diâmetro. Foi realizado um experimento de aspiração de substância viscosa comparando o protótipo com dois modelos de cânulas com desenho padrão da indústria, de três furos tipo Mercedes e de cinco furos tipo Pitanguy. Resultados: Foram encontrados quatro patentes de alta relevância e uma patente de média relevância, que diferem do modelo de utilidade proposto quando se comparam o tipo de desenho da extremidade distal das cânulas estudadas e a função dos instrumentos identificados. Quando comparou-se a eficiência do protótipo, a cânula de cinco furos foi a mais eficiente na aspiração da substância viscosa, e não houve diferença estatística na velocidade de aspiração entre o protótipo e a cânula de três furos tipo Mercedes. Conclusão: A inovação apresentada para a coleta de enxerto de gordura para uso em reconstrução mamária apresentou a mesma eficiência que a cânula Mercedes de três furos neste modelo experimental.

Introduction: The evolution of liposuction and fat graft technique with the oncologic safety allowed to use the fat as autologous filler in patients with breast cancer and submitted to breast reconstruction. The objective is to introduce an innovation in the instrument used to harvest fat grafts for breast reconstruction. Methods: Search of anteriority and trademarks were performed at international and national databases, and a prototype was built as a fat harvest instrument with 35cm in length, 4cm in diameter, with 10 holes at the distal extremity, with 2mm diameter each. It was experimented with a harvest of a viscous substance, comparing the prototype with two regular industry cannulas types: three holes Mercedes' type and five roles Pitanguy's type. Results: Four high-relevance patents and one medium-relevance patent were found, which differ from the proposed utility model when comparing the type of design of the distal end of the studied cannulas and the function of the instruments identified. When the prototype's efficiency was compared with the other cannulas, the cannula with five holes in Pitanguy's type was the most efficient, and it was no statistical difference between the prototype and the cannula with three roles in Mercedes' type. Conclusion: The innovation presented to harvest fat graft for breast reconstruction had the same efficiency in harvesting the viscose substance as the cannula Mercedes type with three holes in this experimental model.

Lipoleiomioma uterino

El lipoleiomioma es una neoplasia uterina benigna poco frecuente cuya incidencia varía entre 0,03% y 0,2%. Este tumor es considerado una variante benigna de los leiomiomas uterinos típicos. Está formado por una proporción variable de adipocitos maduros y células musculares lisas. La etiología puede estar relacionada con la deficiencia de estrógenos que se produce después de la transición menopáusica; generalmente aparece en mujeres obesas perimenopáusicas o menopáusicas. La sintomatología es inespecífica y la mayoría es diagnosticada de forma incidental. Se presenta un caso de lipoleiomioma uterino en paciente de 45 años quien consultó por presentar dolor abdominal. La ecografía mostró tumor en pared anterior de un útero homogéneo y bien definido. Durante la laparotomía se encontró tumor amarillento y de textura blanda. Se realizó histerectomía total más ooforosalpingectomía. El diagnóstico anatomopatológico fue de lipoleiomioma uterino.

Lipoleiomyoma is a rare benign uterine neoplasm whose incidence varies between 0.03%-0.2%. This tumor is considered a benign variant of typical uterine leiomyomas. It consists of a variable proportion of mature adipocytes and smooth muscle cells. The etiology may be related to estrogen deficiency occurring after the menopausal transition; it usually appears in obese perimenopausal or menopausal women. The symptomatology is nonspecific, and most are diagnosed incidentally. We present a case of uterine lipoleiomyoma in a 45-year-old patient who consulted for abdominal pain. Ultrasonography showed a tumor in the anterior wall of a homogeneous and well-defined uterus. During laparotomy, a yellowish tumor with a soft texture was found. Total hysterectomy plus oophorosalpingectomy was performed. The anatomopathologic diagnosis was uterine lipoleiomyoma.

Espectros clínicos y fisiopatológicos del síndrome de Bernardinelli Seip / Clinical and pathophysiological spectra of Bernardinelli Seip syndrome

Introducción: La lipodistrofia congénita de Berardinelli-Seip es un síndrome genético autosómico recesivo, caracterizado por la ausencia generalizada del tejido adiposo, el déficit de leptina y las alteraciones metabólicas incluidas la resistencia a la insulina, la esteatohepatitis y la hipertrigliceridemia. Objetivo: Definir los diferentes espectros clínicos y fisiopatológicos del síndrome y su relación con el fenotipo definiendo las estrategias terapéuticas actuales. Métodos: Se realizó una búsqueda bibliográfica no sistemática en las bases de datos Science Direct, EMBASE, LILACS, Redalyc, SciELO y PubMed. Los criterios de inclusión fueron publicaciones en inglés, portugués o español, en las que el título y las palabras clave, abordaban el tema planteado con una vigencia de 10 años. Se obtuvieron 50 artículos relacionados con el síndrome, de los cuales 30 fueron seleccionados para su revisión. Conclusiones: El diagnóstico de la enfermedad es principalmente clínico. Se establece en presencia de tres criterios mayores o la combinación de dos mayores con dos menores y/o por la identificación de variantes patogénicas por medio del estudio genético y molecular. La dieta y el ejercicio conjuntamente con la administración de la metreleptina son pilares fundamentales en el manejo de estos pacientes. El reconocimiento temprano del síndrome es esencial para prevenir las complicaciones, y brindar asesoría genética y reproductiva a los pacientes y familiares(AU)

Introduction: Berardinelli-Seip congenital lipodystrophy is an autosomal recessive genetic syndrome, characterized by the general absence of adipose tissue, leptin deficiency and metabolic alterations including insulin resistance, steatohepatitis and hypertriglyceridemia. Objective: To present the different clinical and pathophysiological spectra of the syndrome, its relationship with the phenotype, defining the current therapeutic strategies. Methods: A non-systematic bibliographic search was carried out in Science Direct, EMBASE, LILACS, Redalyc, SciELO and PubMed databases. The inclusion criteria were publications in English, Portuguese and Spanish, in which the title and keywords included information pertinent to the stated objective with a periodicity of 10 years, 50 articles were retrieved, and 30 of them were selected. Conclusions: The diagnosis of the disease is mainly clinical. It is established in the presence of three major criteria or the combination of two major and two minor criteria and/or by the identification of pathogenic variants through genetic and molecular studies. Diet and exercise together with the administration of metreleptin are fundamental pillars in the management of these patients. Early recognition of the syndrome is essential to prevent complications, allowing genetic and reproductive counseling to be provided to patients and their families(AU)

Hipertrofia y resistencia a la insulina en un modelo in vitro de obesidad y DMT2 inducida por alta glucosa e insulina / Hypertrophy and insulin resistance in an in vitro model of obesity and T2DM induced by high glucose and insulin

Resumen Introducción: La obesidad es considerada un factor de riesgo para desarrollar resistencia a la insulina. La expansión del tejido adiposo se ha relacionado con el aumento de la producción de citoquinas proinflamatorias que, junto a los ácidos grasos son responsables, al menos en parte, del desarrollo de la resistencia a la insulina y esta a su vez, facilita el desarrollo de diabetes mellitus tipo 2 (DMT2). Objetivo: El propósito de este estudio fue realizar y caracterizar un modelo in vitro de obesidad empleando concentraciones altas de glucosa e insulina en una línea de células adipocitarias. Métodos: Se indujo modelo de hipertrofia celular realizando un estímulo en adipocitos maduros con una concentración de glucosa (450 mg/dL) e insulina (106 pmol/L) (modelo HGHI). Tras estímulo se realizaron ensayos de viabilidad celular, diámetro celular, movilización de lípidos y marcadores de señalización de insulina. Resultados: Tras el tratamiento con HGHI, se evidencia hipertrofia adipocitaria, incremento en la acumulación de lípidos, reducción de la ruptura de éstos, alteración de la señalización de insulina y tendencia a modificación de proteínas de marcadores de estrés de retículo y estrés oxidativo. Conclusión: Estos resultados demuestran la validez del modelo in vitro que simula al menos en parte la obesidad asociada a insulino resistencia, siendo una herramienta útil para estudiar los mecanismos de susceptibilidad a obesidad y resistencia a la insulina inducida in vitro con diferentes moléculas.

Abstract Introduction: Obesity is considered a risk factor for developing insulin resistance. The increase in adipose tissue has been related to the increase in the production of pro-inflammatory cytokines, which together with fatty acids are responsible, at least in part, for the development of insulin resistance, and this in turn facilitates the development of T2 diabetes mellitus type 2 (DMT2). Objective: The purpose of this study was to perform and characterize an in vitro model of obesity using high concentrations of glucose and insulin on an adipocyte cell line. Methods: A cell hypertrophy model was induced by stimulating mature adipocytes with a concentration of glucose (450 mg/dL) and insulin (106 pmol/L) (HGHI model). The cell viability, cell diameter, lipid mobilization and insulin signalling markers were evaluated. Results: After HGHI treatment, adipocytes show hypertrophy, increase in lipid accumulation, reduction of lipid breakdown, alteration of insulin signalling, a tendency to modify proteins of reticulum stress markers and, oxidative stress. Conclusion: These results demonstrate a new in vitro model that simulates, at least in part, obesity associated with insulin resistance being a useful tool to study the mechanisms of susceptibility to obesity and insulin resistance induced in vitro by different molecules.

Sports medicine to reduce obesity body fat rate and promote health research / Medicina do esporte na redução da taxa de gordura corporal na obesidade e promoção de pesquisas na saúde / Medicina del deporte en la reducción de la tasa de grasa corporal en obesidad y promoción de investigaciones en la salud

ABSTRACT Introduction: Obesity is a chronic disease with excessive accumulation of body fat, exceeding the normal health level and affecting the physiological functioning of the body. Objective: To establish an obesity evaluation standard closely related to health based on sports medicine indexes, and to provide a new theory and method for the formulation of an obesity evaluation standard in China. Methods: Height, weight, skin fold thickness (shoulder, arm) and medical indexes (SBP, DBP, TC, TG, HDL, INS) of 108 female subjects in a city were tested by means of anthropometry, experiment, and mathematical statistics. All the selected medical indicators were evaluated according to clinical medical standards. Results: the body mass index of 108 women was positively correlated with such medical indexes as systolic blood pressure, diastolic blood pressure, triglycerides, high density lipoprotein cholesterol, insulin and so on (P<0.05~0.01). Conclusions: The correlation between medical indexes and BMI is high, and the abnormal rate increases with the increase in the level of obesity. Clinical indicators can be used as an important scientific basis for the establishment of obesity evaluation criteria. Level of evidence II; Therapeutic studies - investigation of treatment results.

RESUMO Introdução: A obesidade é uma doença crônica em que há acumulo excessivo de gordura corporal, excedendo o nível saudável normal e afetando o funcionamento fisiológico do corpo. Objetivo: Estabelecer uma avaliação padrão de obesidade estritamente relacionada a saúde com base nos índices de medicina do esporte, e fornecer uma nova teoria e novo método para a formulação de uma avaliação padrão de obesidade na China. Métodos: Altura, peso, espessura de dobras cutâneas (ombro, braço) e índices médicos (PSS, PSD, TC, HDL, INS) de 108 sujeitos do sexo feminino, moradoras de uma cidade, foram tomados por meio de antropometria, experimentos e estatísticas matemáticas. Todos os indicadores médicos selecionados foram avaliados de acordo com padrões médicos clínicos. Resultados: o índice de massa corporal de 108 mulheres se correlaciona com índices médicos como pressão sanguínea sistólica, pressão sanguínea diastólica, triglicerídeos, alta densidade de colesterol lipoproteico, insulina e assim por diante (P<0.05~0.01). Conclusões: A correlação entre índices médicos e o IMC é alta e a taxa anormal aumenta com o aumento no grau de obesidade. Indicadores clínicos podem ser usados como base cientifica importante para o estabelecimento de critérios de avaliação de obesidade. Nível de evidência II; Estudos terapêuticos - investigação de resultados de tratamento.

RESUMEN Introducción: La obesidad es una enfermedad crónica en que hay acúmulo excesivo de grasa corporal, excediendo el nivel saludable normal y afectando el funcionamiento fisiológico del cuerpo. Objetivo: Establecer una evaluación estándar de obesidad estrictamente relacionada a la salud con base en los índices de medicina del deporte, y brindar una nueva teoría y método para la formulación de una evaluación estándar de obesidad en China. Métodos: Altura, peso, espesor de pliegues cutáneos (hombro, brazo) e índices médicos (PSS, PSD, TC, HDL, INS) de 108 sujetos del sexo femenino, residentes de una ciudad, se tomaron por medio de antropometría, experimentos y estadísticas matemáticas. Todos los indicadores médicos seleccionados se evaluaron de acuerdo a patrones médicos clínicos. Resultados: El índice de masa corporal de 108 mujeres se correlaciona a índices médicos como presión sanguínea sistólica, presión sanguínea diastólica, triglicéridos, colesterol de lipoproteínas de alta densidad, insulina y así sucesivamente (P<0.05~0.01). Conclusiones: La correlación entre índices médicos y el IMC es alta y la tasa anormal aumenta con el aumento en el grado de obesidad. Indicadores clínicos pueden usarse como base científica importante para el establecimiento de criterios de evaluación de obesidad. Nivel de evidencia II; Estudios terapéuticos - investigación de resultados de tratamiento.

Relação entre resposta imune inata do receptor toll-like-4 (TLR-4) e o processo fisiopatológico da cardiomiopatia da obesidade / Relationship between innate immune response toll-like receptor 4 (TLR-4) and the pathophysiological process of obesity cardiomyopathy

Resumo Fundamento A obesidade é uma condição inflamatória crônica de baixo grau relacionada a distúrbios cardíacos. No entanto, o mecanismo responsável pela inflamação cardíaca relacionada à obesidade não é claro. O receptor do tipo toll 4 (TLR-4) pertence a um receptor da família das transmembranas, responsável pela resposta imune, cuja ativação estimula a produção de citocinas pró-inflamatórias. Objetivo Testar se a ativação do receptor TLR-4 participa do processo de cardiomiopatia da obesidade, devido à produção de citocinas por meio da ativação do NF-ĸB. Métodos Ratos Wistar machos foram randomizados em dois grupos: o grupo controle (C, n = 8 animais) que recebeu dieta padrão/água e o grupo obeso (OB, n = 8 animais) que foi alimentado com dieta rica em açúcar e gordura e água mais 25% de sacarose por 30 semanas. Análise nutricional: peso corporal, índice de adiposidade, alimentos, água e ingestão calórica. Análise de distúrbios relacionados à obesidade: glicose plasmática, ácido úrico e triglicerídeos, HOMA-IR, pressão arterial sistólica, TNF-α no tecido adiposo. A análise cardíaca incluiu: expressão das proteínas TLR-4 e NF-ĸB, níveis de TNF-α e IL-6. Comparação pelo teste t de Student não pareado ou teste de Mann-Whitney com um valor de p <0,05 como estatisticamente significativo. Resultados O grupo OB apresentou obesidade, glicose elevada, triglicerídeos, ácido úrico, HOMA, pressão arterial sistólica e TNF-α no tecido adiposo. O grupo OB apresentou remodelação cardíaca e disfunção diastólica. A expressão de TLR-4 e NF-ĸB e os níveis de citocinas foram maiores em OB. Conclusão Nossos achados concluem que, em uma condição obesogênica, a inflamação derivada da ativação do TLR-4 cardíaco pode ser um mecanismo capaz de levar à remodelação e disfunção cardíaca.

Abstract Background Obesity is a chronic low-grade inflammation condition related to cardiac disorders. However, the mechanism responsible for obesity-related cardiac inflammation is unclear. The toll-like receptor 4 (TLR-4) belongs to a receptor of the transmembrane family responsible for the immune response whose activation stimulates the production of proinflammatory cytokines. Objective To test whether the activation of the TLR-4 receptor participates in the obesity cardiomyopathy process, due to cytokine production through NF-ĸB activation. Methods Male Wistar rats were randomized into two groups: the control group (C, n= 8 animals) that received standard diet/water and the obese group (OB, n= 8 animals) that were fed a high sugar-fat diet and water plus 25% of sucrose for 30 weeks. Nutritional analysis: body weight, adiposity index, food, water, and caloric intake. Obesity-related disorders analysis: plasma glucose, uric acid and triglycerides, HOMA-IR, systolic blood pressure, TNF-α in adipose tissue. Cardiac analysis included: TLR-4 and NF-ĸB protein expression, TNF-α and IL-6 levels. Comparison by unpaired Student's t-test or Mann- Whitney test with a p-value < 0.05 as statistically significant. Results The OB group showed obesity, high glucose, triglycerides, uric acid, HOMA, systolic blood pressure, and TNF-α in adipose tissue. OB group presented cardiac remodeling and diastolic dysfunction. TLR-4 and NF-ĸB expression and cytokine levels were higher in OB. Conclusion Our findings conclude that, in an obesogenic condition, the inflammation derived from cardiac TLR-4 activation can be a mechanism able to lead to remodeling and cardiac dysfunction.

Viabilidade das células-tronco mesenquimais do tecido adiposo proveniente de lipoaspirado humano / Viability of mesenchymal stem cells of adipose tissue from human liposuction

Introdução: A lipoenxertia é uma alternativa com importante aplicabilidade para reconstrução de mama e/ou correções de assimetrias decorrentes do tratamento oncológico. Esta técnica consiste na transferência de gordura autóloga, cujo estroma contém células-tronco derivadas do tecido adiposo que tem capacidade de diferenciar-se em toda a linhagem mesodermal. Para o preparo do tecido adiposo, Coleman fundamentou a centrifugação, de material aspirado por seringa, em 3000 rotações por minuto (rpm) durante 3 minutos. Contudo, estudos questionam se velocidades menores de centrifugação poderiam ser menos deletérias para viabilidade celular. Métodos: Foi realizado um estudo experimental, onde foram avaliadas as células adiposas de seis pacientes; a partir de 60mL de lipoaspirado de cada um. A amostra coletada foi fracionada em quatro tubos, e submetidos a diferentes protocolos, decantação e centrifugação nas velocidades 500, 1000 e 3000rpm por 3 minutos. Após as amostras foram processadas com colagenase IA por 30 min, submetidas ao cultivo celular por 24 horas e realizado a análise da viabilidade celular. Os resultados foram tabulados e analisados pelo teste ANOVA utilizando os programas Graphpad Prism 6.0® e SAS®. Resultados: A viabilidade celular foi maior na amostra celular centrifugada a 3000rpm e menor na amostra decantada. A coloração com Giemsa indicou manutenção da morfologia celular entre as amostras. Conclusão: As células centrifugadas na velocidade de 3000rpm apresentaram maior viabilidade celular. A centrifugação foi efetiva na compactação do tecido e eliminação de resíduos indesejados (sangue e óleo residual).

Introduction: Lipografting is an alternative with important applicability for breast reconstruction and/or corrections of asymmetries resulting from cancer treatment. This technique consists of autologous fat transfer, whose stroma contains stem cells derived from adipose tissue that can differentiate itself throughout the mesodermal lineage. For adipose tissue preparation, Coleman-based centrifugation of syringe-aspirated material at 3000 revolutions per minute (rpm) for 3 minutes. However, studies question whether lower centrifugation speeds could be less harmful to cell viability. Methods: An experimental study was conducted to evaluate the adipose cells of six patients; from 60mL of liposuction of each one. The sample collected was fractionated into four tubes and submitted to different protocols, decanting and centrifugation at speeds 500, 1000, and 3000rpm for 3 minutes. Afterward, the samples were processed with collagenase IA for 30 min, submitted to cell culture for 24 hours, and a cell viability analysis. The results were tabulated and analyzed by the ANOVA test using the Graphpad Prism 6.0® and SAS®. Results: Cell viability was higher in the cell sample centrifuged at 3000rpm and lower in the decanted sample. Giemsa staining indicated maintenance of cell morphology on the samples. Conclusion: Centrifuged cells at a speed of 3000rpm showed higher cell viability. Centrifugation was effective in compacting tissue and eliminating unwanted waste (blood and residual oil).

Estudo dos efeitos desencadeados pelo veneno de Bothrops moojeni na síntese de mediadores inflamatórios em pré- adipócitos e os mecanismos envolvidos

Snakebites constitute an important public health problem, recognized by World Health Organization. In Brazil, Bothrops genus snakes are responsible for the major number of registered envenomation cases. Among this genus, the species B. moojeni is known for the severity of local inflammatory response. However, systemic repercussions of bothropic envenomation are still not well stablished. In this context, adipose tissue is a metabolically active organ, known for producing many proinflammatory mediators. Preadipocytes and adipocytes are important cell types that constitute this tissue and possess the capacity of synthetize components that drive to inflammation. Therefore, this study aims to investigate the effects of B. moojeni whole venom (BmV), in cultured preadipocytes, with focus on: i) release of cytokines and chemokines (TNF-α, IL-6, IL-10, MCP-1 and KC); ii) release of prostaglandin E2 (PGE2); iii) protein expression of cyclooxygenase-1 and -2 (COX-1 and -2); iv) participation of COX-1, -2, and PGE2 receptors (EP1-4) on PGE2 release; v) activation of transcription factor NF-κB; vi) participation of NF-κB on PGE2 release and COX-2 protein expression; and vii) preadipocytes differentiation into mature adipocytes. Moreover, the venom effects in adipocytes were investigated, focusing on: i) PGE2 release and ii) COX-2 protein expression. In order to this, 3T3-L1 preadipocytes were cultured in DMEM medium, with 10% BFS, 1% L-glutamine and antibiotics until confluence. Next, they were incubated with DMEM only, or TNF-α (20 ng/mL), or BmV (1 μg/mL) for different experimental periods of time. TNF-α, IL-6, IL- 10, MCP-1, KC and PGE2 concentration, in supernatants, was evaluated by ELISA. COX-1, -2, and P-NF-κB protein expression was determined by Western blotting analysis. COX-1, -2, EP1-4 receptors and NF-κB participation on PGE2 release were evaluated utilizing pharmacological treatments with specific inhibitors and/or antagonists. BmV effect on preadipocytes differentiation into mature adipocytes was evaluated according to protocol previously described in literature. Taken together, results obtained show that BmV activates proinflammatory pathways in preadipocytes and mature adipocytes. This venom acts on these cells stimulating the synthesis of cytokines that regulate inflammation (IL-6 and IL-10), or that possess chemotactic activity (KC), besides PGE2. Moreover, BmV was capable of activating mature adipocytes to PGE2 synthesis. In preadipocytes, COX-1 and -2 and EP1 receptor are important factors of venom-induced mechanisms involved in PGE2 release, with COX-2 protein expression increased in this process. It was also demonstrated NF-κB participation in PGE2 synthesis by preadipocytes. Finally, BmV is able to enhance preadipocytes differentiation into mature adipocytes. Taken together, this work indicates that adipose tissue cells are targets for BmV and must collaborate to the biosynthesis of inflammatory mediators involved in bothropic envenoming pathophysiology.

Os acidentes ofídicos constituem um importante problema de saúde pública, reconhecido pela Organização Mundial da Saúde. No Brasil, as serpentes do gênero Bothrops são responsáveis pelo maior número de envenenamentos registrados. Dentro deste gênero, a espécie B. moojeni é conhecida pela gravidade da resposta inflamatória exacerbada, no local da picada. No entanto, as repercussões sistêmicas do envenenamento botrópico, em diferentes tecidos, ainda não são bem estabelecidas. Neste contexto, o tecido adiposo é um órgão metabolicamente ativo, conhecido por produzir diversos mediadores pró-inflamatórios. Os pré-adipócitos e adipócitos são importantes tipos celulares que constituem este tecido e possuem a capacidade de sintetizar componentes que conduzem à inflamação. Sendo assim, o objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos do veneno bruto de B. moojeni (VBm), em pré-adipócitos, em cultura, quanto a: i) liberação de citocinas e quimiocinas (TNF-α, IL-6, IL-10, MCP-1 e KC); ii) liberação de prostaglandina E2 (PGE2); iii) expressão proteica de ciclo-oxigenases-1 e -2 (COX-1 e -2); iv) participação das COX-1 e -2, e dos receptores de PGE2 (EP1-4) na liberação de PGE2; v) ativação do fator de transcrição NF-κB; vi) participação do NF-κB na liberação de PGE2 e na expressão proteica de COX-2; e vii) diferenciação de pré- adipócitos em adipócitos maduros. Ainda, o efeito do veneno em adipócitos foi investigado quando à: i) liberação de PGE2 e ii) expressão proteica de COX-2. Pré- adipócitos da linhagem 3T3-L1 foram cultivados em meio DMEM, contendo 10% de SFB, 1% de L-glutamina e antibiótico até a confluência. Em seguida, foram incubados com apenas DMEM, ou TNF-α (20 ng/mL), ou VBm (1 μg/mL) por diferentes períodos de tempo experimentais. A concentração de TNF-α, IL-6, IL-10, MCP-1 e KC, nos sobrenadantes, foi avaliada por ELISA. A expressão proteica de COX-1 e -2 e P-NF-κB foi determinada por Western blotting. A participação das COX-1 e -2, dos receptores EP1-4 e do NF-κB na liberação de PGE2 foi avaliada utilizando-se inibidores e/ou antagonistas específicos. O efeito do VBm na diferenciação de pré-adipócitos em adipócitos maduros foi avaliada seguindo protocolo descrito na literatura. Em conjunto, os resultados obtidos evidenciaram que o VBm ativa vias pró-inflamatórias em pré-adipócitos e adipócitos maduros. Este veneno atua sobre estas células estimulando a síntese de citocinas, que regulam a inflamação (IL-6 e IL-10), ou possuem atividade quimiotáxica (KC), além de PGE2. Além disso, o VBm foi capaz de ativar adipócitos maduros para a síntese de PGE2. Em pré-adipócitos, as COX-1 e -2 e o receptor EP1 são fatores importantes nos mecanismos desencadeados pelo veneno, que acarretam a liberação de PGE2, sendo que a COX-2 tem sua expressão proteica aumentada neste processo. Também foi demonstrada a participação do NF-κB na síntese de PGE2 em pré- adipócitos. Por fim, o VBm é capaz de aumentar a diferenciação de PAds em adipócitos maduros, provavelmente através dos mecanismos antilipolíticos da PGE2. Em conclusão, este trabalho aponta que as células do tecido adiposo são alvos do VBm e devem colaborar para a biossíntese de mediadores inflamatórios, envolvidos na fisiopatologia do envenenamento botrópico.

Estudo dos efeitos do Veneno da serpente Crotalus durissus terrificus quanto à produção de mediadores imunomodulatórios em pré-adipócitos / Study of the effects of the Venom of the snake Crotalus durissus terrificus on the production of immunomodulatory mediators in pre-adipocytes

Ophidic accidents are a major public health problem in tropical regions around the world and are included in the WHO list of neglected diseases. The envenomation caused by the Crotalus durissus terrificus is responsible for the highest mortality in Brazil[...]

Acidentes ofídicos constituem um importante problema de saúde pública em regiões tropicais do mundo e estão incluídas na lista de doenças negligenciadas da OMS. O envenenamento causado pela serpente Crotalus durissus terrificus é responsável pelo maior índice de letalidade do Brasil. O veneno desta serpente exerce efeito neurotóxico, miotóxico e imunomodulatório. Os efeitos imunomodulatórios ainda não foram esclarecidos e as ações deste veneno, em células produtoras de mediadores que regulam o processo inflamatório, foram pouco estudadas. Neste sentido, as células do tecido adiposo constituem uma fonte importante de mediadores inflamatórios e anti-inflamatórios, uma vez que o tecido adiposo é um órgão endócrino, que contribui para processos fisiológicos e fisiopatológicos. Em mamíferos, existem dois tipos de tecido adiposo, o Tecido adiposo branco e o Tecido adiposo marrom. O tecido adiposo branco contribui para a atividade metabólica do organismo e produz uma ampla variedade de mediadores, que participam de doenças metabólicas e de natureza inflamatória. Dentre esses mediadores estão a prostaglandina E2 (PGE2) e a IL-10. A PGE2 é um importante mediador pró-inflamatório e imunomodulatório, que também regula a diferenciação de pré-adipócitos em adipócitos maduros. A interleucina-10 (IL-10) é uma citocina envolvida em efeitos anti-inflamatórios e imunomodulatórios, que incluem a inibição de funções de macrófagos e de células T. Considerando essas informações, o presente estudo tem como objetivo avaliar os efeitos do veneno de Crotalus durissus terrificus (VCdt), na produção dos mediadores imunomodulatórios PGE2 e IL-10, em pré-adipócitos. Para tanto, pré-adipócitos da linhagem 3T3-L1 foram cultivados em meio de cultura DMEM, suplementado com soro fetal bovino 10%. Estas células foram incubadas com diferentes concentrações do VCdt (0,5, 1, 5 ou 10 μg / mL) ou DMEM (controle), por diferentes períodos de tempo (1 - 24 h). A viabilidade celular foi avaliada pelo ensaio do MTT. As concentrações de PGE2 e IL-10 foram determinadas nos sobrenadantes das culturas, por ensaio imunoenzimático (EIA). Os resultados mostraram que o VCdt não alterou a viabilidade celular em nenhuma 9 das concentrações e períodos de tempo avaliados; a concentração de 10 μg / mL de VCdt foi então definida para os estudos subsequentes. O VCdt induziu uma liberação significativa de PGE2 nos períodos de 3 a 24 h de incubação, em comparação aos respectivos controles. Além disso, o VCdt induziu uma liberação significativa de IL- 10, após 48 h de incubação, mas não nos demais períodos de tempo estudados, em comparação aos controles. Em conclusão, os dados mostraram a capacidade do VCdt, em concentração não citotóxica, estimular pré-adipócitos em cultura e induzir a liberação dos mediadores PGE2 e IL-10 por estas células. Além disso, este estudo aponta o tecido adiposo como alvo importante do veneno crotálico, para a geração de mediadores imunomodulatórios.

Effect of refrigeration in the viability and apoptosis of decanted adipocytes after liposuction.

OBJETIVO: Evaluar el efecto de la refrigeración en la apoptosis y la viabilidad del lipoaspirado en las primeras 2 horas después de la toma. MÉTODO: Se incluyeron 20 pacientes que fueron sometidas a una liposucción del abdomen por razones estéticas. Se obtuvieron 5 ml de grasa y se procesaron para su estudio. La viabilidad se determinó usando azul tripano. La apoptosis se determinó usando el ensayo TUNEL. RESULTADOS: Todas las pacientes eran mujeres, con una edad media de 36.5 años (rango: 21-67). Con respecto a la viabilidad, en el tiempo 0, en el grupo control fue del 59.08 ± 24% y en el grupo de refrigeración fue del 60.96 ± 22%; a los 60 minutos, los valores fueron del 50.82 ± 21% y el 55 ± 32.6%, respectivamente (p = 0.74); y a los 120 minutos, fueron del 42.69 ± 20.85% y el 50.33 ± 21%, respectivamente. En cuanto a la apoptosis, el porcentaje de células apoptóticas en el tiempo 0 fue del 37.87 ± 9.7% para el grupo de control y del 34.28 ± 9.74% para las muestras refrigeradas; a los 60 minutos, del 51.11 ± 8.64% y el 45.94 ± 9.15%, respectivamente; y a los 120 minutos, del 62.97 ± 13.33% y el 55.81 ± 9.45%, respectivamente. CONCLUSIONES: Refrigerar el lipoaspirado a 4 °C disminuyó la mortalidad y la apoptosis de los adipocitos en menos del 10% en las primeras 2 horas desde la toma.

OBJECTIVE: To evaluate the effect of refrigeration in the apoptosis and viability of the lipoaspirate in the first 2 h after harvesting. METHODS: 20 consecutive patients who underwent liposuction from the abdomen for esthetic reasons were included. 5 ml of fat were obtained and processed for study. The viability was obtained using trypan blue. Apoptosis was determined using TUNEL assay. RESULTS: All patients were female with a median age of 36.5 (21-67) years. On regard of the viability, at time 0, the viability in the control group was 59.08 ± 24% and 60.96 ± 22% in the refrigeration group. At 60 min, the values were 50.82 ± 21% versus 55 ± 32.6% (p = 0.74) and a 120 min, 42.69 ± 20.85% and 50.33 ± 21% respectively. On regard of apoptosis, the percentage of apoptotic cells at time 0 was 37.87 ± 9.7% for the control group and 34.28 ± 9.74% for refrigerated samples. At 60 min 51.11 ± 8.64% versus 45.94 ± 9.15% and at 120 min, 62.97 ± 13.33% versus 55.81 ± 9.45% respectively. CONCLUSIONS: Refrigerating the lipoaspirate at 4 °C decreased the mortality and apoptosis of the adipocytes in <10% within the first 2 h from harvesting.

Regulation of adiposity by mTORC1 / Controle da adiposidade por mTORC1

ABSTRACT Obesity is characterized by an excessive increase in the adipose tissue mass, and is associated with higher incidence of several chronic metabolic diseases, such as type 2 diabetes. Therefore, its increasing prevalence is a public health concern, and it is important to better understand its etiology to develop new therapeutic strategies. Evidence accumulated over the years indicates that obesity is associated with a marked activation in adipose tissue of the mechanistic target of rapamycin complex 1 (mTORC1), a signaling pathway that controls lipid metabolism, and adipocyte formation and maintenance. Curiously, mTORC1 is also involved in the control of nonshivering thermogenesis and recruitment as well as browning of white adipose tissue. In this review, we explored mTORC1 functions in adipocytes and presented evidence, suggesting that mTORC1 may either increase or reduce adiposity, depending on the conditions and activation levels.

RESUMO A obesidade é caracterizada pelo aumento excessivo da massa de tecido adiposo, estando associada à maior incidência de diversas doenças metabólicas crônicas, como diabetes tipo 2. Sua crescente prevalência é uma questão de saúde pública, e faz-se importante compreender melhor sua etiologia, para desenvolver novas estratégias terapêuticas. As evidências acumuladas por muitos anos indicam que a obesidade está associada à significativa ativação no tecido adiposo do complexo 1 da proteína alvo mecanístico da rapamicina (mTORC1), uma via de sinalização que regula o metabolismo de lipídeos, bem como a formação e manutenção de adipócitos. Curiosamente, mTORC1 também está envolvido no controle da termogênese, independente do tremor muscular, e no recrutamento e browning de tecido adiposo branco. Nesta revisão, exploramos as diferentes funções do mTORC1 em adipócitos e apresentamos evidências que sugerem que o mTORC1 pode aumentar ou reduzir a adiposidade, dependendo das condições e de seu nível de ativação.