A novel high-resolution melting analysis strategy for detecting cystic fibrosis-causing variants.

Cystic fibrosis (CF), an autosomal recessive disease, is caused by variants in both alleles of the CF transmembrane conductance regulator (CFTR) gene. A new assay based on allele-specific polymerase chain reaction and high-resolution melting analysis was developed for the detection of 18 CF-causing CFTR variants previously identified in Cuba and Latin America. The assay is also useful for zygosity determination of mutated alleles and includes internal controls. The reaction mixtures were normalized and evaluated using blood samples collected on filter paper. The evaluation of analytical parameters demonstrated the specificity and sensitivity of the method to detect the included CFTR variants. Internal and external validations yielded a 100% agreement between the new assay and the used reference tests. This assay can complement CF newborn screening not only in Cuba but also in Latin America.

Identificación de la mutación I172N del gen CYP21 en pacientes con hiperplasia adrenal congénita / Identification of the I172N mutation of gene CYP21 in patients with congenital adrenal hyperplasia

Introducción: La hiperplasia adrenal congénita abarca un conjunto de trastornos de herencia autosómica recesiva, causados por la deficiencia de alguna de las enzimas de la vía esteroidogénica suprarrenal. Más del 90 (percent) de los casos se debe a un déficit de actividad 21-hidroxilasa por mutaciones en el gen CYP21A2. En el 75 (percent) de los pacientes estas mutaciones son microconversiones procedentes de un pseudogen homólogo cercano. Una de las más frecuentes es la mutación I172N asociada a formas severas de enfermedad. Objetivo: Detectar la mutación I172N en pacientes con hiperplasia adrenal congénita por déficit de 21 hidroxilasa y calcular su frecuencia alélica para determinar la pertinencia de su introducción en el esquema de estudio molecular de la enfermedad. Métodos: Se procesaron 79 muestras de ADN, procedentes de pacientes no consanguíneos, con diagnóstico clínico de la enfermedad. La estrategia empleada consistió en la amplificación específica del CYP21A2, seguida de una PCR-ACRS anidada para la amplificación del locus I172N y posterior digestión enzimática. Resultados: Se detectó la mutación I172N en 8 casos: 3 homocigóticos y 5 heterocigóticos. La frecuencia alélica fue de 0,0696. Cuatro de los pacientes con I172N resultaron heterocigóticos compuestos con otras mutaciones previamente estudiadas…(AU)

Polimorfismo -308A>G en la región promotora del gen del factor de necrosis tumoral alfa en población cubana / -308A>G polymorphism in the promoter region of the tumor necrosis factor alpha gene in the Cuban population

El factor de necrosis tumoral alfa (TNFα) es una citoquina proinflamatoria en cuyo gen se ha notificado el polimorfismo -308A>G. No existen informes genéticos poblacionales de esta variante en Cuba, que permitan caracterizar los perfiles inmunogenéticos a nivel molecular para su aplicación en estudios de asociación alélica. Objetivos: Describir las frecuencias génicas y genotípicas del polimorfismo TNFα (-308A>G) en la población cubana. Métodos: Se realizó un estudio observacional, descriptivo, transversal, entre octubre de 2017 y marzo de 2018, en 162 neonatos cubanos, de ambos sexos y sanos, para el pesquisaje neonatal de enfermedades metabólicas, cuyas muestras biológicas se conservaban en el banco de ADN del Centro Nacional de Genética Médica. La caracterización molecular de los genotipos fue realizada mediante un PCR-ARMS. Se utilizó el software GENEPOP 4.4 y el paquete estadístico STATISTICA 8.0 para el análisis de genética poblacional. Resultados: La población estudiada no se ajustó al modelo de equilibrio de Hardy Weinberg para el gen evaluado. Las frecuencias génicas estimadas para el polimorfismo TNFα (-308A>G) fueron de 0,09 para el alelo A y de 0,91 para…(AU)

Frecuencia de las mutaciones G85E y V754M en pacientes con diagnóstico clínico de fibrosis quística / Frequency of G85E and V754M mutations in patients with a clinical diagnosis of cystic fibrosis

La fibrosis quística es una de las enfermedades hereditarias más frecuentes a nivel mundial en poblaciones de origen caucásico. Presenta un patrón de herencia autosómico recesivo con una incidencia en Cuba de 1 en 9862 nacidos vivos. Se han descrito más de 2000 mutaciones que afectan el gen regulador de la conductancia transmembranal de la fibrosis quística. Objetivo: Determinar la frecuencia de las mutaciones G85E y V754M en pacientes cubanos diagnosticados con diagnóstico clínico de fibrosis quística. Métodos: En el presente estudio las mutaciones G85E y V754M se detectaron mediante la técnica de reacción en cadena de la polimerasa-polimorfismo de longitud de los fragmentos en restricción. Resultados: De las 130 muestras analizadas, 7 resultaron positivas: 3 heterocigóticos y 1 homocigótico para V754M y 3 heterocigóticos para G85E. Conclusión: Las frecuencias resultaron para V754M y G85E de 1,9 y 1,2(percent), respectivamente. Con estos valores de frecuencia es factible considerar la introducción de la detección de estas mutaciones en el diagnóstico molecular de los pacientes cubanos con fibrosis quística…(AU)

Caracterización clínica y genética de la fibrosis quística en la provincia de Holguín / Clinical and genetic characterization of cystic fibrosis in Holguin province

Introducción: la fibrosis quística es una enfermedad genética caracterizada por alteraciones pulmonares crónicas, insuficiencia pancreática exocrina y una elevada concentración de los electrólitos en el sudor. Es causada por la presencia de mutaciones en el gen CFTR, que codifica para un canal de cloro denominado proteína reguladora de la conductancia transmembranal (CFTR), localizado en el cromosoma 7. Se hereda con carácter autosómico recesivo, y expresa gran heterogeneidad clínica y genética.Objetivo: describir las principales características clínicas y genéticas que presentan los enfermos con fibrosis quística en la provincia de Holguín.Método: se realizó un estudio descriptivo, tipo serie de casos, en el que la muestra estuvo formada por 22 pacientes con diagnóstico clínico y molecular de fibrosis quística en la provincia de Holguín, en el período de Enero de 2009 a Enero de 2016.Resultados: predominó el sexo masculino, con 15 afectados entre 6 a 10 años, el 81,8 por ciento de los pacientes presentó manifestaciones respiratorias crónicas, y el signo clínico más frecuentemente asociado fue la desnutrición en 14 enfermos (63,6 por ciento). Los heterocigóticos compuestos totalizaron el 59,09 por ciento, los homocigóticos el 40,9 por ciento, la mutación ΔF508 en forma homocigótica se presentó en solo 4 afectados, y heterocigótico compuesto en 7, para 31,8 por ciento.Conclusiones: la mutación más frecuentemente encontrada es la deleción ΔF508, y la enfermedad respiratoria crónica la manifestación clínica que predominó. Los pacientes homocigóticos a la mutación ΔF508 están más afectados desde el punto de vista clínico(AU)

Introduction: cystic fibrosis is one type of genetic disease characterized by chronic pulmonary alterations, exocrine pancreatic failure and high concentration of electrolytes in sweat. It is caused by mutations in CFTR gene that codes for a chlorine channel called transmembrane conductance regulator protein (CFTR) located in chromosome 7. It is a hereditary recessive autosomal disease and expresses great clinical and genetic heterogeneity.Objective: to describe the main clinical and genetic characteristics of patients with cystic fibrosis in Holguin province.Methods: a case-series descriptive study was conducted in a sample of 22 patients with clinical and molecular diagnosis of cystic fibrosis from Holguin province in the period of January 2009 through January 2016.Results: males predominated, 15 diagnosed patients aged 6 to 10 years, 81.8 percent of the sample presented with chronic respiratory manifestations and the most frequently associated sign was malnutrition in 14 patients (63.6 percent). The compound heterozygotes accounted for 59.09 percent and the homozygotes for 40.9 percent; homozygotic ΔF508 mutation affected 4 patients whereas compound heterozygotic form was seen in 7, representing 31.8 percent. Conclusions: the most found mutation is ΔF508 deletion and the predominant clinical manifestation is chronic respiratory disease. The patients with homozygotic ΔF508 mutation were the most clinically affected persons(AU)

Autismo secundario a variante poco frecuente de mosaicismo del gen FMR1. Presentación de un caso / Autism secondary to a rare variant of FMR1 mosaicism. Presentation of a case

El síndrome Frágil X es la causa más común de discapacidad intelectual y la principal causa monogénica de trastornos del espectro autista. Por lo general la base genética de este síndrome es la mutación completa del gen FMR1, y rara vez un mosaicismo génico. Se presenta un varón autista de 3 años de edad, que en el estudio molecular para frágil X se obtuvo mosaico con alelos normales de 33 repeticiones y alelos con mutación completa en el gen FMR1. La expresión fenotípica fue similar a casos con la mutación completa. El lenguaje expresivo estaba muy afectado y conductualmente tenía buena socialización. La madre con discapacidad intelectual ligera moderada es portadora de premutación de 90 repeticiones CGG. Esta variante de mosaicismo del gen FMR1 es poco frecuente y evidencia poca variabilidad en el fenotipo de los afectados…(AU)

Caracterización molecular del gen GBA en pacientes cubanos con enfermedad de Gaucher / Molecular characterization of the GBA gene in Cuban patients with Gaucher disease

La enfermedad de Gaucher (EG) es el trastorno relacionado con el depósito lisosomal de mayor prevalencia a nivel mundial. Presenta un patrón de herencia autosómico recesivo y se origina fundamentalmente por mutaciones en el gen GBA, localizado en la región cromosómica 1q21, que codifica la enzima lisosomal ácido β-glucosidasa. En el presente trabajo se describen los resultados obtenidos por el laboratorio de Biología Molecular del Centro Nacional de Genética Médica, La Habana, Cuba, en el análisis del gen GBA en pacientes cubanos con sospecha clínica de la EG. Fueron estudiados siete pacientes no emparentados, caracterizados clínicamente y con diagnóstico bioquímico y/o histológico. Se realizó el estudio de cuatro mutaciones mediante amplificación de secuencias del gen GBA y digestión con enzimas de restricción. En los casos en que ninguna de las mutaciones estudiadas por análisis directo estuvo presente, las muestras se sometieron a cribado de mutaciones y secuenciación de ADN. El análisis molecular permitió identificar la mutación presente en el 100(percent) de los cromosomas analizados. Fueron detectadas las mutaciones L444P, N370S e I403T. El presente estudio estableció una metodología para el diagnóstico por biología molecular de la enfermedad de Gaucher en la población cubana que permite ofrecer un servicio diagnóstico efectivo y rápido en pacientes con sospecha de la enfermedad y en posibles portadores…(AU)

Diagnóstico molecular del síndrome de X frágil mediante PCR específica de metilación / Molecular diagnosis of Fragile X syndrome through methylation-specific PCR

El síndrome de X frágil (SXF) es causado por el silenciamiento epigenético del gen FMR1, debido al incremento por encima de 200 repeticiones del trinucleótido CGG localizado en su región 5 no traducida. Las expansiones entre 55 y 200 repeticiones, denominadas premutación (PM), tienden a expandirse a mutación completa (MC) cuando se transmiten por vía materna. Los individuos con PM pueden desarrollar el síndrome de temblor/ataxia asociado a X frágil o insuficiencia ovárica primaria asociada a X frágil (FXPOI). En este trabajo se describen los resultados del análisis molecular del gen FMR1 en 251 individuos con sospecha clínica de SXF o con historia familiar de esta enfermedad, así como en 14 fetos de madres con riesgo de tener hijos afectados. El análisis se realizó empleando PCR específica de metilación. Se identificaron 16 varones y 4 hembras con MC, 3 varones mosaicos, y 4 varones y 21 mujeres con PM, 8 de ellas con un alto riesgo de transmitir la enfermedad. Se confirmó el diagnóstico clínico de FXPOI en dos mujeres y de SXF en 20 pacientes con discapacidad intelectual. La distribución de frecuencias alélicas difiere de la reportada para otras poblaciones…(AU)

Distribución de las mutaciones más frecuentes de fibrosis quística en Cuba / Distribution of the most frequent cystic fibrosis mutations in Cuba

Se han identificado más de 1900 mutaciones en el gen CFTR, responsable de la fibrosis quística; algunas de ellas son frecuentes en la mayoría de las poblaciones, mientras que otras caracterizan a una población o familia en particular. Dada la heterogenicidad multinacional y teniendo en cuenta los origenes étnicos de la población cubana, el objetivo de este estudio fue caracterizar la distribución de las mutaciones mas frecuentes en las diferentes regiones del país. Se extrajo ADN a partir de muestras de sangre periférica. La detección de p.F508del, p.G542X, p.R1162X, p.R334W, p.R553X y c.3120+1G>A se realizó mediante la Reacción en Cadena de la Polimerasa, seguido de una digestión enzimática y electroforesis en gel de agarosa. Posteriormente se calculó la frecuencia de las mutaciones relacionadas para cada una de las regiones del país. De los 252 pacientes estudiados, 106 fueron de la región Occidental, 65 de la central y 81 de la región Este del país. Teniendo en cuenta el origen étnico de nuestra población, cabe esperar una heterogeneidad elevada de la fibrosis quística. Las mutaciones más frecuentes detectadas están distribuidas de forma general por toda la isla, en relación con el impacto de los genes europeos, africanos y nativo-americanos, así como en dependencia de la migración entre las diferentes regiones del país…(AU)