Hibridación in situ por fluorescencia (fish) en muestras de líquido amniótico obtenido por amniocentesis precoz / Fluorescence in situ hybridization (fish) in samples of amniotic fluid obtained by early amniocentesis

La hibridación in situ por fluorescencia (FISH) se puede utilizar para diagnosticar prenatalmente las aneuploidías más frecuentes. Se utilizan núcleos interfásicos de células fetales no cultivadas. Este es un avance importante en el diagnóstico prenatal. Se describe la aplicación de la FISH en 15 muestras de líquido amniótico no cultivado extraído entre la 12 ± 7.5 y 14 6/7 semanas de gestación (m ± 1 sd = 13,63 ± 0,52). El volumen de líquido amniótico recolectado oscilo entre de 2 y 4ml (3,16 ± 0,58). Todas las pacientes presentaban como principal indicación para la realización del procedimiento la edad materna avanzada. El tiempo para obtener los resultados varió de 1 a 5 días (2,13 ± 1,55 días). El tiempo de entrega de los resultados citogenéticos osciló entre 13 y 22 días (18,4 ± 3,2). En total, 14 casos (93,33) fueron informativos. Las cinco aneuploidías diagnosticadas por FISH fueron confirmadas por citogenética tradicional, sin embargo, el análisis citogenético tradicional identificó un caso de rearreglo cromosómico equilibrado: [46, XY, t (16; 17) (q24; q12) pat] y un caso de mosaicismo: 46,XX/47,XX,+mar. La realización de FISH requiere muchos pasos que pueden impedir que los resultados sean obtenidos, es importante obtener un número suficiente de núcleos para la hibridación. El estudio de aneuploidías en amniocitos no cultivados debe ser introducido en el protocolo de diagnóstico prenatal en mujeres embarazadas con riesgo aumentado de concebir un feto con aneuploidias.

Amniocentesis precoz: estudio citogenético en 505 embarazadas / The early amniocentesis: cytogenetic study in 505 pregnant

El diagnóstico citogenético en líquido amniótico obtenido por amniocentesis precoz (AP) es una alternativa a la embarazada de primer trimestre. El objetivo de este trabajo fue investigar el tipo y la frecuencia de anormalidades cromosómicas encontradas en muestras de líquido amniótico obtenido por medio de esa técnica de colecta. En un periodo de 5 años, 531 AP fueron realizadas en 505 pacientes (479 gestaciones únicas y 26 gemelares), con edad gestacional variando de 12 0/7 a 14 6/7 semanas. La principal indicación para la realización del procedimiento fue edad materna avanzada (66,3 de los casos). Los cultivos fueron establecidos en medio Chang y Amniomax (cultivo en frasco). El tiempo de colecta para la obtención de las preparaciones citogenéticas varió de 7 a 22 días (15,5 ± 2,8). Por lo menos 25 células fueron analizadas por paciente. El tiempo de entrega de resultados varió de 12 a 25 días (18,7±2,8 días). La frecuencia de éxito de cultivo fue del 98,7. Cariotipos anormales fueron identificados en 22 casos (4,2), siendo tres (0,6) rearreglos cromosómicos equilibrados y 19 (3,6) anomalías cromosómicas no equilibradas. De estas, la anormalidad cromosómica más frecuente fue la trisomía del cromosoma 21 (27,3). Fueron identificados cinco casos de cromosomas marcadores, tres en forma de mosaico. Fueron confirmados seis (18,2) resultados anormales detectados en Vellosidad Corial (VC). La frecuencia de pseudomosaicismo encontrada fue del 2,3. Nuestros datos confirman la precisión del estudio citogenético en líquido amniótico obtenido por AP. Con procedimientos de rutina bien establecidos y protocolos adecuadamente estandarizados en el laboratorio de diagnóstico prenatal, se aumenta el éxito de los cultivos de células de líquido amniótico vobtenido por AP y se reduce el tiempo medio de entrega de resultados.

Protein and DNA analysis for the prenatal diagnosis of alpha2-laminin-deficient congenital muscular dystrophy.

Congenital muscular dystrophies (CMD) are characterized by neonatal hypotonia and/or artrogriposis associated with a dystrophic muscle biopsy. The CMD1A form is caused by a deficiency of the alpha2 chain of laminin 2 (LAMA2 gene at 6q2), a protein present in the basal lamina of muscle fibers, in Schwann cells, epidermis, and in fetal trophoblastic tissue. This allows its study for prenatal diagnosis in the chorionic villous (CV), which was performed in a family with one deceased affected CMD1A child. Immunohistochemical analysis of the CV using antibodies against the C- and N-terminal domains of the alpha2-laminin protein showed a normal positive labeling for both antibodies in the "at-risk" CV, which did not differ from the normal control CV. The integrity of the CV membrane was confirmed through the analysis with antibodies against alpha1, beta1, and gamma1 laminins. DNA study using markers flanking the 6q2 region showed that the affected patient and the "at-risk" fetus did not share the same haplotype. Therefore, the fetus was considered normal through both methodologies, which was confirmed after the birth of a clinically normal male baby. As the LAMA2 gene is very large and the spectrum of mutations causing disease is wide, the analysis of the protein in muscle biopsy has been largely used for the diagnosis. Besides, the possibility to detect it in the chorionic villous, mainly using positive markers, also offers a powerful tool for prenatal diagnosis.

Anomalias cromossômicas em casais com aborto habitual / Chromosomal abnormalities in couples with recurrent spontaneus abortions

Há uma enorme dificuldade em identificar as causas do aborto habitual (ou aborto espontâneo recorrente). Sabe-se que em uma pequena porcentagem de casais com este problema pelo menos um dos cônjuges é portador de uma cromossomopatia. Estudamos 301 casais com dois ou mais abortos espontâneos para verificar a porcentagem de portadores de rearranjos cromossômicos equilibrados. Dos 301 casais, 17 (3,6 por cento) mostraram-se portadores de translocaçoes recíprocas ou inversoes que justificam as perdas gestacionais e outros 2 por cento possuem anomalias de significado duvidoso. Perdas gestacionais ocorreram preferencialmente no primeiro trimestre de gestaçao. Estes dados mostram a importância da cariotipagem dos casais com aborto habitual para diagnóstico e aconselhamento genético em futuras gestaçoes.

O mosaicismo cromossômico em amostra de vilo corial / Chromosome mosaicism in chorionic villus sampling

Este trabalho relata o estudo cromossômico de 1752 AVC realizadas pelo método direto modificado (cultura de 24 horas). O mosaicismo cromossômico representou 1,9 por cento da amostra total (34/1752). Mosaicismo envolvendo cromossomos autossômicos foi observado em 64,7 por cento (22/34), mosaicismo envolvendo cromossomos sexuais em 23,5 por cento dos casos (8/34), mosaicismo envolvendo poliploidia em 5,9 por cento (2/34); um caso (2,9 por cento) envolveu um cromossomo marcador e outro, um rearranjo entre um autossomo e um cromossomo sexual. O mosaicismo placentário confinado representou 58,8 por cento dos casos de mosaicismo (20/34) enquanto que o mosaicismo verdadeiro esteve presente em 14,7 por cento dos casos (5/34). Nós perdemos contato com uma paciente e uma outra abortou antes da realizaçao da amniocentese. Os seguimentos citogenéticos em 7 casos nao foram realizados porque 5 das 7 (l4,7 por cento) decidiram interromper a gestaçao após o resultado da AVC e duas pacientes (5,9 por cento) prosseguiram a gestaçao e relataram que as crianças, ao nascerem, eram clinicamente normais.

Higroma cístico em feto 45,X: diagnóstico precoce por ultra-sonografia e amostra de vilo corial / Cystic hygroma in a 45,X fetus: early detection by ultrasound and chorionic villus sampling

Paciente primigesta sem antecedentes de doença familial ou hereditária é submetida à ultra-sonografia de rotina na décima semana de gestaçao, constatando-se higroma cístico. Encaminhada ao nosso Instituto, é repetida a ultra-sonografia por via vaginal com 11 4/7 semanas, encontrando-se edema subcutâneo de tronco e confirmando-se o higroma cístico. Optou-se, pela facilidade de acesso, por amostra de vilo corial, por via transcervical, cuja análise citogenética revelou constituiçao cromossômica 45,X. Esse trabalho assinala a importância da ultra-sonografia precoce e da amostra de vilo corial na detecçao precoce de anomalias fetais.

Amostra de vilo corial: 1290 casos / Chorionic villus sampling: 1290 cases

Os autores estudaram 1.290 gestantes que se submeteram ao diagnóstico pré-natal precoce (primeiro trimestre de gestaçao) para detectar possíveis anormalidades cromossômicas no feto.O método utilizado foi a amostra de vilo corial coletada por via transcervical (AVC-TC) ou por via transabdominal (AVC-TA), dependendo das condiçoes anatômicas e da idade gestacional das pacientes. Entre as gestantes estudadas, 68,5 por cento tinham como principal indicaçao para o exame a idade avançada (igual ou superior a 35 anos); seguida de ansiedade, 11,24 por cento; filho anterior com outras anomalias cromossômicas, 10,2 por cento; filho anterior malformado, 2,9 por cento; rearranjo cromossômico nos pais, 2,6 por cento; determinaçao de sexo (nos casos de doenças ligadas ao cromossomo X), 2,5 por cento; outras indicaçoes, 2,2 por cento. Sao discutidos, neste trabalho, a importância da realizaçao da amostra de vilo corial (AVC) no primeiro trimestre da gestaçao para o diagnóstico pré-natal de alteraçoes cromossômicas no feto.

Transabdominal chrorionic villus sampling: experience with 70 cases

Säo analisados os 70 primeiros casos de Amostra de Vilo Corial por via Transabdominal (ACTA), ralizados no Serviço de Genética Humana da Associaçäo Maternidade de Säo Paulo, de Novembro de 1987 a Fevereiro de 1989. Em todos os casos obteve-se material adequado para análise e a média de inserçöes da agulha foi 1.6. Oitenta por cento dos casos foram realizados em funçäo da idade materna avançada (> = 35 anos). Seis casos (8.6%) revelaram anomalias cromossômicas sendo as respectivas gestaçöes interrompidas. O risco de perdas gestacionais no período de 2 semanas que se seguiram a coleta foi de 1.4%. A AVTA e um método alternativo de diagnóstico genético no pré-natal, podendo ser realizada sem limitaçöes no que diz respeito a idade gestacional, embora investigaçöes ainda sejam necessárias para que seja estabelecida a segurança do procedimento

Cytogenetic analysis of first trimester chorionic villi samplings

O cariótipo fetal foi determinado em 65 amostras de vilosidade coriônica obtidas entre as oitava e décima segunda semanas de gestaçäo. A idade materna foi a indicaçäo principal em 40 gravidezes e nesse grupo foram detectadas 4 alteraçöes cromossômicas: 47,XX,+21;45,X/47,XYY;92,XXXX e 47,XX,+mar. Em 8 casos havia uma criança anterior portadora de aberraçäo cromossômica; entre eles, foi diagnosticado um feto triplóide. Cinco exames foram realizados porque ocorrera anteriormente uma criança malformada, cuja constituiçäo cromossômica era desconhecida (2) ou por motivos psicológicos (3); todos revelaram cromossomos normais. Cinco genitores eram portadores de translocaçöes equilibradas e um dos fetos tinha a aberraçäo näo equilibrada. O exame foi realizado para a determinaçäo do sexo em 7 gravidezes com risco de doença de herança recessiva ligada ao X; três fetos masculinos foram identificados. Foram estabelecidas culturas de tecidos fetal e da placenta após o abortamento, nos casos triplóide e tetraplóide; confirmaram-se os resultados obtidos no diagnóstico pré-natal. No caso do cariótipo 47,XX,+mar, o exame cromossômico após amniocentese revelou cariótipo normal

Chorionic villi sampling for early prenatal genetic diagnosis

Foram estudadas 11 pacientes submetidas a AVC, para diagnóstico cromossômico, entre a 8ª e a 10ª semana de gestaçäo. Utilizou-se um catéter especial para este tipo de procedimento (Portex LTD, Inglatera) e a colheita do material foi sempre guiada por ultra-sonografia. Três casos näo forneceram metáfases que permitissem análise cromossômica e para estes foi indicada amniocentese posterior. Com exceçäo do primeiro caso onde o material foi colhido em um aborto retido, todas as demais gestaçöes evoluem satisfatoriamente