Interphase cytogenetic analysis in Argentinean B-cell chronic lymphocytic leukemia patients: association of trisomy 12 and del(13q14).

We have evaluated genomic aberrations by conventional cytogenetics and fluorescence in situ hybridization (FISH) analysis in a series of 57 Argentinean B-cell chronic lymphocytic leukemia (B-CLL) patients. The studies were performed on stimulated peripheral blood lymphocytes. FISH analysis for trisomy 12, 13q14 deletion, and monosomy of TP53 (also known as p53) was performed according to standard protocols. Our results showed 46.3% of patients with clonal chromosomal alterations by conventional cytogenetics and 80.7% by FISH. Trisomy 12 was found in 21.9% of patients by G-banding analysis and in 35% by FISH studies. Allelic loss of 13q14 was observed in 63.2% patients, most of them showing D13S319 and D13S25 deletion; 11% of patients showed TP53 monosomy. Coexistence of trisomy 12 and 13q14 deletion was found in 17.5% of patients. In this group, deletion 13q14 was the prevalent clone, with percentages 25-35% higher than those observed for trisomy 12, suggesting clonal evolution. The coexistence of trisomy 12 with deletion 13q14 was observed in a higher frequency than reported in the literature. A probable adverse prognosis is suggested for this group of patients, likely related to clonal evolution.

Análisis de factores pronósticos en leucemia linfática crónica. Valor predictivo del inmunofenotipo, el CD23 soluble y la morfología / Predictive factors in chronic lymphocytic leukemia. Value of immunophenotype, SCD23 and morphology

En LLC se reconocen factores pronósticos útiles como la duplicación linfocitaria, el estadio clínico y el patrón de infiltración medular. Otros, como el porcentaje de células CD38+, están en estudio y requieren confirmación. El objetivo del presente trabajo fue evaluar si existe asociación entre morfología, inmunofenotipo linfocitario, CD23 soluble (SL) y sobrevida libre de eventos (SLE). Se evaluaron prospectivamente 36 pacientes sin tratamiento. Se determinaron: morfología típica, mixta y LLC-PL; inmunofenotipo linfocitario (score de Matutes); niveles plasmáticos de CD23 SL; estadio clínico, duplicación linfocitaria; ß2 microglobulina y alteraciones citogenéticas. Se consideró evento: progresión de enfermedad (necesidad de tratamiento, evolución a estadios avanzados, desarrollo de organomegalia voluminosa) y muerte por enfermedad. Mediana de seguimiento 24 meses. Resultados: estadio 0: 11/36, SLE 80 por ciento; I: 10/36 SLE 90 por ciento; II: 13/36: III y IV: 2/36. SLE >= II 37 por ciento. p= 0.023. Duplicación linfocitaria: <12m 7/31, >12m 24/31. SLE 28 por ciento vs 80 por ciento p<0.001. Citogenético: normal 13/28; anormal 15/28. SLE 92 por ciento vs 54 por ciento p=0.053. +12 positiva 7/30, negativa 23/30. SLE 65 por ciento vs 66 por ciento. ß2 microglobulina normal 9/35, elevada 26/35; SLE 100 por ciento vs 53 por ciento p=0.006. D23 SL < 350 Ul/ml 15/32, > 350 Ul/ml 17/32. SLE 92 por ciento vs 53 por ciento p=0.005. Inmunofenotipo: Score 5: 15/36, Score 4: 19/36, SLE 64 por ciento. Score 3: 2/36. p=0.516. Morfología típica 17/35, mixta 17/35. SLE 81 por ciento vs. 57 por ciento p=0.099. LLC-PL 1/35. El CD 23 SL resultó adecuado para predecir SLE, particularmente útil en estadios iniciales sin otros marcadores de actividad. La morfología y el fenotipo linfocitario, dos variables accesibles, no fueron útiles para el propósito del estudio.

Análisis de factores pronósticos en leucemia linfática crónica. Valor predictivo del inmunofenotipo, el CD23 soluble y la morfología / Predictive factors in chronic lymphocytic leukemia. Value of immunophenotype, SCD23 and morphology

En LLC se reconocen factores pronósticos útiles como la duplicación linfocitaria, el estadio clínico y el patrón de infiltración medular. Otros, como el porcentaje de células CD38+, están en estudio y requieren confirmación. El objetivo del presente trabajo fue evaluar si existe asociación entre morfología, inmunofenotipo linfocitario, CD23 soluble (SL) y sobrevida libre de eventos (SLE). Se evaluaron prospectivamente 36 pacientes sin tratamiento. Se determinaron: morfología típica, mixta y LLC-PL; inmunofenotipo linfocitario (score de Matutes); niveles plasmáticos de CD23 SL; estadio clínico, duplicación linfocitaria; ß2 microglobulina y alteraciones citogenéticas. Se consideró evento: progresión de enfermedad (necesidad de tratamiento, evolución a estadios avanzados, desarrollo de organomegalia voluminosa) y muerte por enfermedad. Mediana de seguimiento 24 meses. Resultados: estadio 0: 11/36, SLE 80 por ciento; I: 10/36 SLE 90 por ciento; II: 13/36: III y IV: 2/36. SLE >= II 37 por ciento. p= 0.023. Duplicación linfocitaria: <12m 7/31, >12m 24/31. SLE 28 por ciento vs 80 por ciento p<0.001. Citogenético: normal 13/28; anormal 15/28. SLE 92 por ciento vs 54 por ciento p=0.053. +12 positiva 7/30, negativa 23/30. SLE 65 por ciento vs 66 por ciento. ß2 microglobulina normal 9/35, elevada 26/35; SLE 100 por ciento vs 53 por ciento p=0.006. D23 SL < 350 Ul/ml 15/32, > 350 Ul/ml 17/32. SLE 92 por ciento vs 53 por ciento p=0.005. Inmunofenotipo: Score 5: 15/36, Score 4: 19/36, SLE 64 por ciento. Score 3: 2/36. p=0.516. Morfología típica 17/35, mixta 17/35. SLE 81 por ciento vs. 57 por ciento p=0.099. LLC-PL 1/35. El CD 23 SL resultó adecuado para predecir SLE, particularmente útil en estadios iniciales sin otros marcadores de actividad. La morfología y el fenotipo linfocitario, dos variables accesibles, no fueron útiles para el propósito del estudio. (AU)

Aplicaciones diagnósticas del estudio por PCR de los reordenamientos de los receptores T y de las inmunoglobulinas en oncohematología / Diagnostic applications of PCR studies of T cell receptor and immunoglobulin gene rearrangements in oncohematology

El trabajo consiste en la puesta a punto de diversas técnicas de biología molecular para el diagnóstico de leucemias y linfomas dentro del Instituto. Por medio de la técnica de PCR, utilizada para detectar reordenamientos de los genes de la cadena pesada de las inmunoglobulinas y en el receptor de los linfocitos T (cadena A), se determina clonalidad en las LLA y algunos linfomas en los cuales los métodos convencionales ofrecen dificultad diagnóstica. Se han analizado 64 muestras de ADN provenientes de pacientes de la Sección Inmunología Oncológica del Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex" (I.I.HEMA.), 19 biopsias de linfomas incluidas en parafina y 14 cultivos celulares de pacientes del mismo Instituto. Se ha detectado clonalidad B por PCR mediante la identificación de un fragmento de alrededor de 100 bp en una serie de pacientes oncohematológicos. En 81 ensayos se ha detectado reordenamiento VDJ en 52 casos, distribuidos de la siguiente manera: 15/19 biopsias de linfomas incluidas en parafina, 13/14 cultivos de células mononucleares periféricas de pacientes hemofílicos HIV+ y 24/48 pacientes con leucemias y linfomas (material fresco). Se han detectado reordenamientos en las cadenas A del receptor T por PCR Multiplex con la idea de complementar el diagnóstico en la identificación de la clonalidad T. Se detectaron reordenamientos en el locus TCGR en 23 de las 30 muestras de ADN provenientes de células mononucleares totales de pacientes con linfomas y leucemias. Este es el primer paso para la realización de un diagnóstico preciso y a partir de aquí poder detectar la enfermedad mínima residual en los pacientes post-tratamiento. (AU)

Síndrome mielodisplásico: evaluación de la proteína p53 como factor pronóstico / Myelodysplastic syndrome: evaluation of p53 prognostic factor

Los síndromes mielodisplásicos representan un estado preleucémico en el cual existe una falla de los progenitores hematopoyéticos para diferenciarse normalmente. Se ha observado que estos cuadros clínicos obedecen a un desorden clonal y que el incremento de células blásticas en la médula ósea se correlaciona con un pobre pronóstico. Si bien no se conocen completamente los mecanismos moleculares que subyacen a esta progresión, se han detectado diversas anomalías cromosómicas y mutaciones genéticas. La proteína p53 es el producto de un gen supresor de tumor relacionado con los mecanismos de control de la división celular y en el desarrollo de neoplasias. Para determinar si p53 tiene participación en el proceso mielodisplásico, evaluamos en este estudio las alteraciones de la proteína p53 y de su gen, empleando inmunohistoquímica y polimorfismo conformacional de cadena simple (SSCP) en un grupo de 21 pacientes con mielodisplasia, relacionando los hallazgos con la transformación leucémica, en un seguimiento a 5 años. Se encontraron alteraciones de la proteína en 4/21 casos (19 por ciento) y mutaciones del gen que la codifica también en 4/21 pacientes (19 por ciento). Seis pacientes (sobre 17 evaluables) desarrollaron leucemia aguda. El 50 por ciento de ellos presentó alteraciones de la proteína p53... (AU)

Aplicaciones diagnósticas del estudio por PCR de los reordenamientos de los receptores T y de las inmunoglobulinas en oncohematología / Diagnostic applications of PCR studies of T cell receptor and immunoglobulin gene rearrangements in oncohematology

El trabajo consiste en la puesta a punto de diversas técnicas de biología molecular para el diagnóstico de leucemias y linfomas dentro del Instituto. Por medio de la técnica de PCR, utilizada para detectar reordenamientos de los genes de la cadena pesada de las inmunoglobulinas y en el receptor de los linfocitos T (cadena µ), se determina clonalidad en las LLA y algunos linfomas en los cuales los métodos convencionales ofrecen dificultad diagnóstica. Se han analizado 64 muestras de ADN provenientes de pacientes de la Sección Inmunología Oncológica del Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex" (I.I.HEMA.), 19 biopsias de linfomas incluidas en parafina y 14 cultivos celulares de pacientes del mismo Instituto. Se ha detectado clonalidad B por PCR mediante la identificación de un fragmento de alrededor de 100 bp en una serie de pacientes oncohematológicos. En 81 ensayos se ha detectado reordenamiento VDJ en 52 casos, distribuidos de la siguiente manera: 15/19 biopsias de linfomas incluidas en parafina, 13/14 cultivos de células mononucleares periféricas de pacientes hemofílicos HIV+ y 24/48 pacientes con leucemias y linfomas (material fresco). Se han detectado reordenamientos en las cadenas µ del receptor T por PCR Multiplex con la idea de complementar el diagnóstico en la identificación de la clonalidad T. Se detectaron reordenamientos en el locus TCGR en 23 de las 30 muestras de ADN provenientes de células mononucleares totales de pacientes con linfomas y leucemias. Este es el primer paso para la realización de un diagnóstico preciso y a partir de aquí poder detectar la enfermedad mínima residual en los pacientes post-tratamiento.

Síndrome mielodisplásico: evaluación de la proteína p53 como factor pronóstico / Myelodysplastic syndrome: evaluation of p53 prognostic factor

Los síndromes mielodisplásicos representan un estado preleucémico en el cual existe una falla de los progenitores hematopoyéticos para diferenciarse normalmente. Se ha observado que estos cuadros clínicos obedecen a un desorden clonal y que el incremento de células blásticas en la médula ósea se correlaciona con un pobre pronóstico. Si bien no se conocen completamente los mecanismos moleculares que subyacen a esta progresión, se han detectado diversas anomalías cromosómicas y mutaciones genéticas. La proteína p53 es el producto de un gen supresor de tumor relacionado con los mecanismos de control de la división celular y en el desarrollo de neoplasias. Para determinar si p53 tiene participación en el proceso mielodisplásico, evaluamos en este estudio las alteraciones de la proteína p53 y de su gen, empleando inmunohistoquímica y polimorfismo conformacional de cadena simple (SSCP) en un grupo de 21 pacientes con mielodisplasia, relacionando los hallazgos con la transformación leucémica, en un seguimiento a 5 años. Se encontraron alteraciones de la proteína en 4/21 casos (19 por ciento) y mutaciones del gen que la codifica también en 4/21 pacientes (19 por ciento). Seis pacientes (sobre 17 evaluables) desarrollaron leucemia aguda. El 50 por ciento de ellos presentó alteraciones de la proteína p53...

Efecto de dos hormonas hipofisarias de estrés, prolactina y hormona de crecimiento, sobre la función de neutrofilos y linfocitos B humanos / Effect of two hypophysary hormones of stress, prolactin and growth hormone, on the function of neutrophils and human B lymphocytes

Los sistemas de integración del organismo son responsables del mantenimiento de la homeostasis en la totalidad del mismo. El sistema nervioso ocupa un lugar central entre ellos, secundado por el sistema endócrino y el sistema inmune. Muchos de los efectos del sistema nervioso son de hecho mediados por cambios en éstos últimos, que a su vez regulan diversas funciones periféricas. Los mediadores del sistema endócrino con frecuencia funcionan como efectores de distintas situaciones en las que el sistema nervioso debe responder a condiciones, transitorias o no, de pérdida de la homeostasis. Algunas hormonas están especialmente asociadas a las situaciones de estrés y parecen jugar un papel clave en la generación de una respuesta integrada al mismo. Entre estas hormonas de estrés resaltan, a nivel hipofisario, la prolactina y la hormona de crecimiento. El objetivo del presente trabajo fue determinar el efecto en humanos de la prolactina (PRL) y la hormona de crecimiento (HC) sobre la función de neutrófilos y completar estudios previos sobre la diferenciación de linfocito B a célula plasmática inducida por mitógeno pokeweed mitogen (PWM) in vitro. Como control in vivo, se emplearon sujetos normales y pacientes portadores de tumores no secretantes de PRL ni HC; in vitro, se empleó también somatostatina (que en muchos sistemas funciona como antagonista funcional de HC). Se obtuvieron células mononucleares totales (CMT) a partir de sangre periférica... (TRUNCADO)(AU)

Efecto de dos hormonas hipofisarias de estrés, prolactina y hormona de crecimiento, sobre la función de neutrofilos y linfocitos B humanos / Effect of two hypophysary hormones of stress, prolactin and growth hormone, on the function of neutrophils and human B lymphocytes

Los sistemas de integración del organismo son responsables del mantenimiento de la homeostasis en la totalidad del mismo. El sistema nervioso ocupa un lugar central entre ellos, secundado por el sistema endócrino y el sistema inmune. Muchos de los efectos del sistema nervioso son de hecho mediados por cambios en éstos últimos, que a su vez regulan diversas funciones periféricas. Los mediadores del sistema endócrino con frecuencia funcionan como efectores de distintas situaciones en las que el sistema nervioso debe responder a condiciones, transitorias o no, de pérdida de la homeostasis. Algunas hormonas están especialmente asociadas a las situaciones de estrés y parecen jugar un papel clave en la generación de una respuesta integrada al mismo. Entre estas hormonas de estrés resaltan, a nivel hipofisario, la prolactina y la hormona de crecimiento. El objetivo del presente trabajo fue determinar el efecto en humanos de la prolactina (PRL) y la hormona de crecimiento (HC) sobre la función de neutrófilos y completar estudios previos sobre la diferenciación de linfocito B a célula plasmática inducida por mitógeno pokeweed mitogen (PWM) in vitro. Como control in vivo, se emplearon sujetos normales y pacientes portadores de tumores no secretantes de PRL ni HC; in vitro, se empleó también somatostatina (que en muchos sistemas funciona como antagonista funcional de HC). Se obtuvieron células mononucleares totales (CMT) a partir de sangre periférica... (TRUNCADO)

Inmunología de la leucemia aguda: fenotipo inmunológico de los blastos y evaluación en ellos del sistema interferon / Immunology of the acute leukemia: immunological phenotype of the blast and evaluation in them of the interferon system

La epidemiología de la leucemia aguda ha sido explorada con relativo detalle en el caso de la leucemia linfoide aguda [LLA] pero no tanto en el de la leucemia aguda no linfoide [LANL]. La compresión de los mecanismos moleculares que conducen al proceso leucémico están siendo activamente investigados, pero hasta el presente se desconoce la secuencia de eventos involucrada. El objetivo de este estudio fue determinar el fenotipo de los blastos leucémicos en 180 pacientes con leucemia aguda, reclutados en el Instituto de Investigaciones Hematológicas de la Academia Nacional de Medicina entre marzo de 1992 y febrero de 1994. Se estudiaron 104 pacientes con LLA, 75 con LANL y 1 con una leucemia de estirpe no determinada. Se empleó un panel de anticuerpos monoclonales contra CD1, CD3, CD4, CD5, CD7, CD11b, CD13, CD14, CD15, CD19, CD20, CD25, CD33, CD34, CD38, CD41, CD56, CD71, HLA-DR, glicoforina, mieloperoxidasa y antígeno reconocido por My8, todos ellos por inmunofluorescencia. Para las LLA, la distribución fue similar a la encontrada en un estudio previo de nuestro propio grupo. En el caso de la LANL, los datos no arrojaron un perfil característico de ninguna progenie células, demostrando la existencia de heterogeneidad en los blastos de la médula ósea, en forma consistente con observaciones de otros grupos internacionales. Para anlizar los cambios moleculares en el conjunto de genes del interferón alfa, se obtuvo ADN de los blastos, sometiéndolo a restricción con las enzimas EcoR1 y HindIII, seguido de electroforesis e hibridización con ADNc de interferón alfa [revelado por autorradiografia]. Se encontró que existían deleciones o rearreglos de estos genes entre 25 y 30 por ciento de las muestras, en forma consistente con sugerencias previas. El estudio de la producción de interferón se realizó mediante inducción de los blastos con virus Sendai, seguida de medición por ELISA en el sobrenadante de cultivo de los mismos. En relación a los sujetos normales, se encontró una reducción de la producción de interferón en el grupo de LLA, con cifras muy heterogéneas dentro del mismo. Analizando casos individuales, el mayor defecto se presentaba en los pacientes con deleción que tenían capacidad residual de producción [tal vez compensatoria]... (TRUNCADO)(AU)

Inmunología de la leucemia aguda: fenotipo inmunológico de los blastos y evaluación en ellos del sistema interferon / Immunology of the acute leukemia: immunological phenotype of the blast and evaluation in them of the interferon system

La epidemiología de la leucemia aguda ha sido explorada con relativo detalle en el caso de la leucemia linfoide aguda [LLA] pero no tanto en el de la leucemia aguda no linfoide [LANL]. La compresión de los mecanismos moleculares que conducen al proceso leucémico están siendo activamente investigados, pero hasta el presente se desconoce la secuencia de eventos involucrada. El objetivo de este estudio fue determinar el fenotipo de los blastos leucémicos en 180 pacientes con leucemia aguda, reclutados en el Instituto de Investigaciones Hematológicas de la Academia Nacional de Medicina entre marzo de 1992 y febrero de 1994. Se estudiaron 104 pacientes con LLA, 75 con LANL y 1 con una leucemia de estirpe no determinada. Se empleó un panel de anticuerpos monoclonales contra CD1, CD3, CD4, CD5, CD7, CD11b, CD13, CD14, CD15, CD19, CD20, CD25, CD33, CD34, CD38, CD41, CD56, CD71, HLA-DR, glicoforina, mieloperoxidasa y antígeno reconocido por My8, todos ellos por inmunofluorescencia. Para las LLA, la distribución fue similar a la encontrada en un estudio previo de nuestro propio grupo. En el caso de la LANL, los datos no arrojaron un perfil característico de ninguna progenie células, demostrando la existencia de heterogeneidad en los blastos de la médula ósea, en forma consistente con observaciones de otros grupos internacionales. Para anlizar los cambios moleculares en el conjunto de genes del interferón alfa, se obtuvo ADN de los blastos, sometiéndolo a restricción con las enzimas EcoR1 y HindIII, seguido de electroforesis e hibridización con ADNc de interferón alfa [revelado por autorradiografia]. Se encontró que existían deleciones o rearreglos de estos genes entre 25 y 30 por ciento de las muestras, en forma consistente con sugerencias previas. El estudio de la producción de interferón se realizó mediante inducción de los blastos con virus Sendai, seguida de medición por ELISA en el sobrenadante de cultivo de los mismos. En relación a los sujetos normales, se encontró una reducción de la producción de interferón en el grupo de LLA, con cifras muy heterogéneas dentro del mismo. Analizando casos individuales, el mayor defecto se presentaba en los pacientes con deleción que tenían capacidad residual de producción [tal vez compensatoria]... (TRUNCADO)

Diagnóstico inmunofenotípico de leucemias agudas por citometría de flujo / Immunophenotyic diagnosis of the acute leukemias by flow cytometry

La caracterización del inmunofenotipo de las células leucémicas es esencial para el diagnóstico de las leucemias agudas. El objetivo del presente trabajo fue analizar el inmunofenotipo de los blastos de pacientes que ingresaron al IIHEMA con el diagnóstico de leucemia aguda en el período 12/94 a 12/96. Para tal fin, estudiamos el patrón inmunofenotípico de 128 casos de leucemia aguda (58 casos de LMA, 27 casos de LLA-B, 7 casos de LLA-T, 16 casos de LLA-My, 3 casos de LMA-Ly, 16 casos de leucemias de linaje mixto y 1 caso de leucemia indiferenciada) utilizando como método la citometría de flujo. Esta técnica es bastante reciente en el país (hay sólo 22 citómetros). El servicio de citometría de flujo del IIHEMA, que comenzó a funcionar en noviembre de 1994, es uno de los centros con mayor experiencia en el diagnóstico oncohematológico, debido al gran número de pacientes referidos. De los 58 casos de LMA, en 13 la expresión del antígeno HLA-DR, resultó negativa... (TRUNCADO)(AU)

Diagnóstico inmunofenotípico de leucemias agudas por citometría de flujo / Immunophenotyic diagnosis of the acute leukemias by flow cytometry

La caracterización del inmunofenotipo de las células leucémicas es esencial para el diagnóstico de las leucemias agudas. El objetivo del presente trabajo fue analizar el inmunofenotipo de los blastos de pacientes que ingresaron al IIHEMA con el diagnóstico de leucemia aguda en el período 12/94 a 12/96. Para tal fin, estudiamos el patrón inmunofenotípico de 128 casos de leucemia aguda (58 casos de LMA, 27 casos de LLA-B, 7 casos de LLA-T, 16 casos de LLA-My, 3 casos de LMA-Ly, 16 casos de leucemias de linaje mixto y 1 caso de leucemia indiferenciada) utilizando como método la citometría de flujo. Esta técnica es bastante reciente en el país (hay sólo 22 citómetros). El servicio de citometría de flujo del IIHEMA, que comenzó a funcionar en noviembre de 1994, es uno de los centros con mayor experiencia en el diagnóstico oncohematológico, debido al gran número de pacientes referidos. De los 58 casos de LMA, en 13 la expresión del antígeno HLA-DR, resultó negativa... (TRUNCADO)