Sensitivities of a bulk-tank milk ELISA and composite fecal qPCR to detect various seroprevalence levels of paratuberculosis in cattle herds in Normandy, France.

This study evaluated an ELISA on bulk tank milk (BTM) samples and a qPCR on a single composite fecal sample to detect paratuberculosis seropositive cattle dairy herds. Individual serum (n = 15 372), BTM and composite fecal samples were obtained from 192 herds. The within-herd apparent seroprevalence was categorized and compared with BTM ELISA and fecal qPCR results. The BTM ELISA had poor overall sensitivity (16%) to detect seropositive herds but higher sensitivity (53%) in the higher apparent seroprevalence group of > 9%. Using an optimized cut-off point (5.0% S/P), sensitivities overall and in the high apparent seroprevalence group were 53% and 88%, respectively. The BTM ELISA gave 5% positive results in seronegative herds and 25% using the optimized cut-off. Fecal qPCR had 72% sensitivity to detect seropositive herds and 88% in the higher apparent seroprevalence group, but gave 25% positive results in fully seronegative herds. The combination of BTM ELISA and composite fecal qPCR improved the sensitivity to detect seropositive herds.

Sensibilités d'un test ELISA sur lait de réservoir et d'une qPCR sur prélèvement composite de fèces pour le dépistage de cheptels bovins à différents niveaux de séroprévalence en paratuberculose en Normandie, France. L'étude a été entreprise pour évaluer les performances diagnostiques d'un test ELISA, effectué sur un échantillon de lait de réservoir (BTM), et d'une qPCR, réalisée sur un échantillon composite de fèces (CF), pour détecter les troupeaux de bovins séropositifs pour la paratuberculose. Les sérums individuels (n = 15 372), les échantillons de BTM et de CF ont été collectés dans 192 troupeaux. La séroprévalence apparente intra-troupeau a été calculée puis catégorisée avant d'être comparée aux résultats de l'ELISA sur BTM et de la qPCR sur CF. Le test ELISA sur BTM a montré une faible sensibilité globale (16 %) mais celle-ci était plus élevée dans les élevages les plus fortement séropositifs > 9 % (53 %). En utilisant un seuil optimisé (E/P 5,0 %), les sensibilités étaient de 53 % et 88 %, respectivement. Le test ELISA sur BTM a donné 5 % de résultats positifs sur des troupeaux entièrement séronégatifs et 25 % en utilisant le seuil optimisé. La qPCR sur CF avait une bonne sensibilité (72 %), en particulier dans les élevages fortement séropositifs (88 %), et a donné 25 % de résultats positifs sur des cheptels entièrement séronégatifs. L'utilisation combinée de BTM ELISA et CF qPCR a permis d'améliorer la sensibilité à dépister des cheptels séropositifs.(Traduit par Docteur Serge Messier).

Trueness and precision of the real-time RT-PCR method for quantifying the chronic bee paralysis virus genome in bee homogenates evaluated by a comparative inter-laboratory study.

The Chronic bee paralysis virus (CBPV) is the aetiological agent of chronic bee paralysis, a contagious disease associated with nervous disorders in adult honeybees leading to massive mortalities in front of the hives. Some of the clinical signs frequently reported, such as trembling, may be confused with intoxication syndromes. Therefore, laboratory diagnosis using real-time PCR to quantify CBPV loads is used to confirm disease. Clinical signs of chronic paralysis are usually associated with viral loads higher than 108 copies of CBPV genome copies per bee (8 log10 CBPV/bee). This threshold is used by the European Union Reference Laboratory for Bee Health to diagnose the disease. In 2015, the accuracy of measurements of three CBPV loads (5, 8 and 9 log10 CBPV/bee) was assessed through an inter-laboratory study. Twenty-one participants, including 16 European National Reference Laboratories, received 13 homogenates of CBPV-infected bees adjusted to the three loads. Participants were requested to use the method usually employed for routine diagnosis. The quantitative results (n=270) were analysed according to international standards NF ISO 13528 (2015) and NF ISO 5725-2 (1994). The standard deviations of measurement reproducibility (SR) were 0.83, 1.06 and 1.16 at viral loads 5, 8 and 9 log10 CBPV/bee, respectively. The inter-laboratory confidence of viral quantification (+/- 1.96SR) at the diagnostic threshold (8 log10 CBPV/bee) was+/- 2.08 log10 CBPV/bee. These results highlight the need to take into account the confidence of measurements in epidemiological studies using results from different laboratories. Considering this confidence, viral loads over 6 log10 CBPV/bee may be considered to indicate probable cases of chronic paralysis.