Using polymerase chain reaction in early diagnosis of re-activated Trypanosoma cruzi infection after heart transplantation.

BACKGROUND: Heart transplantation is an effective treatment for patients with end-stage Chagas' heart disease. Re-activation of Chagas' disease in transplant recipients is frequent, triggered by immunosuppression level. Therefore, highly sensitive methods for early diagnosis of Chagas' disease relapse are necessary to initiate appropriate therapy. We analyzed the use of polymerase chain reaction (PCR) in the clinical follow-up of heart transplant recipients. METHODS: We prospectively evaluated 4 heart transplant recipients at the Hospital Privado, Cordoba, Argentina, who had terminal Chagas' disease. The parameters analyzed were presence of parasites in the blood (blood culture, Strout) and in endomyocardial biopsy (EMB) samples, and PCR was performed with oligonucleotides directed to a nuclear repetitive sequence of Trypanosoma cruzi. We evaluated these parameters weekly from the day of transplantation until results were negative and then during regular follow-up visits. RESULTS: In 2 patients, we detected T cruzi using PCR in peripheral blood 30 days before clinical evidence of re-activation. In the 3rd case, PCR results in peripheral blood were positive from the day before transplantation, followed by positive results in EMB and sub-cutaneous chagomas biopsy specimens. Only 1 patient had positive Strout results for parasites in skin lesions, and none showed amastigotes in the biopsy specimens. After clinical diagnosis, all patients received 5 mg/kg/day benzimidazole for 6 months, with acceptable tolerance and good clinical outcome. All patients had negative peripheral blood PRC results after 30 days of treatment. One patient had intermittent positive PCR results during follow-up, with no evidence of clinical re-activation. CONCLUSION: Polymerase chain reaction detection of T Cruzi in heart transplant recipients is a more sensitive and specific procedure in diagnosing Chagas' disease re-activation.

Una técnica de PCR-ELISA cuantitativa para el diagnóstico de enfermedad por citomegalavirus (CMV) en pacientes transplantados renales / A technique of cuantitative PCR-ELISA for diagnosis of cytomegalovirus disease in renal transplanted patients

Introducción: El citomegalovirus (CMV) es el agente causal de la enfermedad viral de mayor prevalencia en pacientes transplantados. La detección del ADN de CMV por medio del PCR es común entre los pacientes receptores de ri±ones, dando resultados falsos positivos en pacientes que no tienen enfermedad. Hemos desarrollado una técnica de PCR-ELISA cuantitativa y competitiva para identificar pacientes que padecen la enfermedad por CMV. Métodos: Analizamos 350 muestras provenientes de 65 receptores de transplantes renales cadavéricos no seleccionados. Se extrajo ADN de CMSP semanalmente hasta el día de la alta hospitalaria y se lo estudio por PCR cualitativa. Los casos positivos se analizaron por PCR-ELISA cuantitativa y competitiva también. Esta técnica usa un estßndar interno(SI) heterólogo que contiene la misma secuencia de oligonucleótido para el 4to exon del gen del antigeno temprano inmediato (ATI) utilizado en una PCR cualitativa. La detección y cuantificación se realizó en placas de 96 pozo cubiertas con sondas específicas para él SI y CMV. Los resultados se expresaron como copias virales (CV) por 1 millón de CMSP. Resultados: Cuarenta y uno de los pacientes (63,1 por ciento) tuvieron un ensayo cualitativo positivo y 8 de ellos tenían infección clínica por CMV. Los 41 pacientes con PCR (+) fueron re-analizados por ensayo cuantitativo. Los 8 que tenían la enfermedad por CMV presentaron un valor promedio de 219,6+/- 117,2 CV/106 CMSP (P<0,01)Conclusión: La carga viral de CMV es útil para identificar los pacientes transplantados renales que desarrollaron la enfermedad por CMV. Valores mayores a 500 CV/106 CMSP se relacionan altamente con el desarrollo de la enfermedad.ABSTRACT: Background: Cytomegalovirus (CMV)is the most prevalent viral disease in organ transplantation. Detection of CMV DNA in PBMC by PCR occurs frequently in renal allograft recipients, yielding false positive patient not having the CMV disease. We have developed a quantitative and competitive PCR-ELISA assay to identify patients with CMV disease. Methods: Three hundred and fifty sample from 65 non-selected cadaveric renal transplant recipients were studies. DNA was extracted from PBMC weekly up to day of discharge and tested by qualitative PCR. The positive samples were studied by quantitative competitive PCR-ELISA

Una técnica de PCR-ELISA cuantitativa para el diagnóstico de enfermedad por citomegalavirus (CMV) en pacientes transplantados renales / A technique of cuantitative PCR-ELISA for diagnosis of cytomegalovirus disease in renal transplanted patients

Introducción: El citomegalovirus (CMV) es el agente causal de la enfermedad viral de mayor prevalencia en pacientes transplantados. La detección del ADN de CMV por medio del PCR es común entre los pacientes receptores de ri±ones, dando resultados falsos positivos en pacientes que no tienen enfermedad. Hemos desarrollado una técnica de PCR-ELISA cuantitativa y competitiva para identificar pacientes que padecen la enfermedad por CMV. Métodos: Analizamos 350 muestras provenientes de 65 receptores de transplantes renales cadavéricos no seleccionados. Se extrajo ADN de CMSP semanalmente hasta el día de la alta hospitalaria y se lo estudio por PCR cualitativa. Los casos positivos se analizaron por PCR-ELISA cuantitativa y competitiva también. Esta técnica usa un estßndar interno(SI) heterólogo que contiene la misma secuencia de oligonucleótido para el 4to exon del gen del antigeno temprano inmediato (ATI) utilizado en una PCR cualitativa. La detección y cuantificación se realizó en placas de 96 pozo cubiertas con sondas específicas para él SI y CMV. Los resultados se expresaron como copias virales (CV) por 1 millón de CMSP. Resultados: Cuarenta y uno de los pacientes (63,1 por ciento) tuvieron un ensayo cualitativo positivo y 8 de ellos tenían infección clínica por CMV. Los 41 pacientes con PCR (+) fueron re-analizados por ensayo cuantitativo. Los 8 que tenían la enfermedad por CMV presentaron un valor promedio de 219,6+/- 117,2 CV/106 CMSP (P<0,01)Conclusión: La carga viral de CMV es útil para identificar los pacientes transplantados renales que desarrollaron la enfermedad por CMV. Valores mayores a 500 CV/106 CMSP se relacionan altamente con el desarrollo de la enfermedad.ABSTRACT: Background: Cytomegalovirus (CMV)is the most prevalent viral disease in organ transplantation. Detection of CMV DNA in PBMC by PCR occurs frequently in renal allograft recipients, yielding false positive patient not having the CMV disease. We have developed a quantitative and competitive PCR-ELISA assay to identify patients with CMV disease. Methods: Three hundred and fifty sample from 65 non-selected cadaveric renal transplant recipients were studies. DNA was extracted from PBMC weekly up to day of discharge and tested by qualitative PCR. The positive samples were studied by quantitative competitive PCR-ELISA